Hoëprestasie vloeistofchromatografie (HPLC) en vloeistofchromatografie-massaspektrometrie (LCMS) is twee kragtige analitiese tegnieke wat in verskillende velde gebruik word, insluitend farmaseutiese produkte, omgewingswetenskappe en lewenswetenskappe. Alhoewel beide metodes die skeiding en ontleding van verbindings behels, is hul beginsels, funksies en toepassings baie anders. Hierdie blogpos sal HPLC en LCMS vergelyk, met die fokus op hul belangrikste verskille en die voordele van elke tegniek.

Beginsel van operasie

HPLC

HPLC is 'n chromatografiese tegniek wat verbindings skei op grond van hul interaksie met die stilstaande en mobiele fases. In HPLC word 'n vloeibare mobiele fase deur 'n kolom gevul met 'n stilstaande fase, wat gewoonlik bestaan uit klein deeltjies silika of polimere. As 'n monstermengsel in die stelsel ingebring word, word die komponente geskei op grond van hul affiniteit vir die stilstaande fase. Verbindings wat sterker in wisselwerking is met die stilstaande fase, elute stadiger, terwyl verbindings wat minder sterk vinniger in wisselwerking is, vinniger elueer. Die geskeide verbindings word dan opgespoor met behulp van 'n verskeidenheid detektore, soos UV-vis, fluoressensie of brekingsindeksopsporers.

Wil u meer weet oor die toepassings van chromatografie -flessies, kyk gerus na hierdie artikel:15 Toepassings van chromatografie -flessies in verskillende velde

LCMS

LCMS kombineer die skeidingsvermoë van HPLC met die massa -analise -vermoëns van massaspektrometrie. In LCMS word monsters eers met HPLC geskei, net soos in konvensionele HPLC. In plaas daarvan om deur 'n konvensionele detektor opgespoor te word, word die geëlueerde verbindings egter in 'n massaspektrometer ingestel. Die massaspektrometer ioniseer die verbindings en meet hul massa-tot-lading-verhouding, wat gedetailleerde inligting bied oor die molekulêre gewig en struktuur van die analiet. Hierdie kombinasie van skeiding en massaspektrometrie bied groter sensitiwiteit en spesifisiteit as HPLC alleen.

Skeidingsmeganisme

HPLC:HPLC gebruik hoë druk om 'n vloeibare mobiele fase deur 'n volgepakte kolom wat 'n stilstaande fase bevat, te druk. Verbindings word geskei op grond van hul differensiële interaksies met die stilstaande fase, wat lei tot presiese en doeltreffende skeidings.

LCMS:LCMS kombineer die fisiese skeidingsvermoë van HPLC met die massaspektrometrievermoë van massaspektrometrie (MS). Die vloeistofchromatografiekomponent skei die verbindings, terwyl die massaspektrometer die massa-tot-lading-verhouding van die geïoniseerde spesie meet.

Sensitiwiteit en selektiwiteit

HPLC:HPLC het 'n goeie sensitiwiteit en selektiwiteit, veral as dit gekombineer word met gevorderde detektore soos UV-vis, fluorescentie of diode-skikkingsdetektors. HPLC alleen kan egter nie voldoende spesifisiteit vir komplekse monsters bied nie.

LCMS:LCMS het 'n uitstekende sensitiwiteit en selektiwiteit in vergelyking met HPLC. Massaspektrometers kan verbindings akkuraat identifiseer en kwantifiseer op grond van hul unieke massa-tot-lading-verhoudings, selfs in komplekse matrikse. Dit maak LCM's veral nuttig om spoorverbindings te ontleed en die identiteit van onbekende stowwe te bevestig.

Voorbeeldvoorbereiding

HPLC:Monstervoorbereiding vir HPLC behels tipies verdunning, filtrasie of eenvoudige ekstraksietegnieke. Monsters hoef nie verdamp te word nie, dus is HPLC geskik vir 'n wye verskeidenheid verbindings, insluitend polêre en nie -vlugtige stowwe.

LCMS:Voorbeeldvoorbereiding vir LCMS is soortgelyk aan dié vir HPLC, maar bykomende stappe kan nodig wees om verenigbaarheid met die massaspektrometer te verseker. Byvoorbeeld, vlugtige buffers of bymiddels kan nodig wees om ionisasie te verbeter en ioononderdrukking te voorkom.

Aansoeke

HPLC:HPLC word wyd gebruik vir die ontleding van farmaseutiese produkte, voedsel en omgewingsmonsters. Dit is veral effektief om verbindings in komplekse mengsels te skei en te kwantifiseer, soos dwelm onsuiwerhede, voedseladditiewe en plaagdoderreste.

LCMS:LCMS het 'n wye verskeidenheid toepassings, insluitend:

Farmaseutiese analise: gebruik in medisyne -ontdekking, ontwikkeling en kwaliteitskontrole.

Proteomika en metabolomika: word gebruik om proteïene en metaboliete in biologiese monsters te identifiseer en te kwantifiseer.

Omgewingsanalise: word gebruik om spoorbesoedeling in water, grond en lugmonsters op te spoor.

Nuuskierig oor die rol van gesertifiseerde HPLC -flessies om akkurate monsteranalise te verseker? Lees hierdie artikel: Die belangrikheid van gesertifiseerde HPLC -flessies vir akkurate monsteranalise

Konklusie

HPLC en LCMS is albei kragtige analitiese tegnieke met hul eie sterk punte en beperkings. Die keuse tussen die twee hang af van die spesifieke vereistes van die analise, soos sensitiwiteit, selektiwiteit, steekproefkompleksiteit en beskikbare hulpbronne.

HPLC is 'n goeie keuse vir roetine -ontleding van bekende verbindings in relatief eenvoudige matrikse, waar koste en gemaklike gebruik belangrike faktore is. LCMS, daarenteen, is die voorkeurtegniek vir die ontleding van komplekse monsters, die identifisering van onbekende verbindings en die opsporing van ultra-spoorvlak.

Namate tegnologie aanhou vorder, sal die integrasie van HPLC en LCMS 'n toenemend belangrike rol speel in die aanwending van die ontwikkelende behoeftes van analitiese chemie en om resultate van hoë gehalte oor verskillende toepassings te verseker.

Die uiteindelike gids vir 0,45 mikron spuitfilters vir u

Alles wat u moet weet oor Headspace GC -monstervoorbereiding