ፍሰቱን መቆጣጠር፡ የ HPLC ሞባይል ደረጃዎች የላብ ወታደር መመሪያ

መግቢያ

ባለህበት ነበርኩ—ጠዋቱ 2 ሰዓት ላይ ሞኒተሩን እያየሁ፣ በባህሩ ላይ እንደጠፋች ጀልባ ስትንሳፈፍ የመነሻ መስመር ስትንሸራሸር እየተመለከትኩ፣ “HPLC doo-hickey” የተፈለሰፈው የእኔን ጤናማነት ለመፈተሽ ብቻ እንደሆነ እያሰብኩ ነው። በከፍተኛ አፈፃፀም ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (HPLC) ዙሪያ ጭንቅላትዎን ለመጠቅለል መሞከር የሚያስደስት ስሜት ከተሰማዎት ትንፋሹን ይውሰዱ። ይህ ውድ ክፍሎች ሳጥን ብቻ አይደለም; በኬሚስትሪ እና በፊዚክስ መካከል ያለ ቀጭን ዳንስ ነው።

በቤተ ሙከራ ውስጥ ብዙውን ጊዜ የሞባይል ደረጃ የስርዓቱ "የሕይወት መስመር" ነው እንላለን. ያለሱ, የእርስዎ ናሙና በመርፌ ውስጥ ተቀምጧል, የትም አይሄድም. ነገር ግን ሞለኪውሎችዎን ወደ ጠቋሚው ለመውሰድ ትክክለኛውን "ባቡር" እንዴት ይመርጣሉ? በእረፍት ክፍል ውስጥ ከቡና ጋር እየተነጋገርን እንዳለን እንከፋፍለው.

1. HPLC ምንድን ነው, በእውነቱ?

በዋናው ላይ፣ HPLC ስለ መለያየት ነው። እንደ ውድድር አስቡት "ትራክ" የማይንቀሳቀስ ደረጃ (አምድ) እና "ነፋስ" ሯጮቹን የሚገፋው የ hplc ሞባይል ደረጃ ነው.

አስማቱ የሚከሰተው የተለያዩ ሞለኪውሎች የተለያዩ "ግንኙነቶች" ስላሏቸው ነው። አንዳንድ ሞለኪውሎች የሞባይል ደረጃን ይወዳሉ እና በአምዱ ውስጥ ያሳድጋሉ። ሌሎች ደግሞ "ሙጥኝ" ናቸው - በቋሚው ደረጃ ላይ ፍቅር አላቸው እና ወደ ኋላ ቀርተዋል። ይህ የፍጥነት ልዩነት በእርስዎ chromatogram ላይ እነዚያን ጫፎች የሚፈጥረው ነው።

2. መደበኛ ደረጃ በተገላቢጦሽ ደረጃ

ይህ ብዙውን ጊዜ ሁሉም ሰው ፀጉራቸውን ማውጣት የሚጀምሩበት ነው. በአመታት ልምምድዎ ውስጥ, ይህንን ለማስታወስ ቀላሉ መንገድ ፖሊነትን በመመልከት አግኝቻለሁ.

ሀ. መደበኛ ክሮማቶግራፊ

ይህ "የድሮው ትምህርት ቤት" መንገድ ነው. በመደበኛ ደረጃ ክሮማቶግራፊ፣ የቋሚ ደረጃው ዋልታ ነው—ለዋልታ ሞለኪውሎች እንደ ማግኔት አስቡት። እዚህ የምንጠቀመው የሞባይል ደረጃ ዋልታ ያልሆነ፣ ብዙውን ጊዜ እንደ ሄክሳን ወይም ሄፕታን ያሉ ፈሳሾች ነው።

• አመክንዮ፡ የዋልታ "ተጣብቅ" ሞለኪውሎች በዋልታ አምድ ወደ ኋላ ይመለሳሉ። የዋልታ ያልሆኑ ሞለኪውሎች ከዋልታ ባልሆነ የሞባይል ደረጃ በፍጥነት ይታጠባሉ።

• የፕሮ ጥቆማው፡ የተንቀሳቃሽ ስልክዎን ደረጃ ከፍ ካደረጉ (ትንሽ አይሶፕሮፓኖል በመጨመር) የእርስዎ ናሙናዎች በፍጥነት ይንቀሳቀሳሉ።

ለ. የተገላቢጦሽ ደረጃ Chromatography

ዛሬ ይህ የወርቅ ደረጃ ነው። በቤተ ሙከራ ውስጥ የምሰራው 90% የሚሆነው ስራ የተገላቢጦሽ ክሮሞግራፊን ያካትታል። እዚህ, ስክሪፕቱን እንገለበጣለን. ዓምዱ ዋልታ ያልሆነ (ሃይድሮፎቢክ፣ እንደ ዘይት)፣ እና ደረጃው ሞባይል ዋልታ ነው (ብዙውን ጊዜ የውሃ እና ሜታኖል ወይም አሴቶኒትሪል ድብልቅ)።

• አመክንዮው፡- ውሃ ወዳድ (ዋልታ) ሞለኪውሎች ቅባታማውን አምድ ስለሚጠሉ ያጉላሉ። ወፍራም አፍቃሪ (የዋልታ ያልሆኑ) ሞለኪውሎች ልክ እንደ ሙጫ ከአምዱ ጋር ይጣበቃሉ።

• ለምን እንደወደድነው፡ ሊተነበይ የሚችል፣ ሁለገብ እና በቀላሉ ለማስተዳደር ቀላል የሆኑትን በውሃ ላይ የተመሰረቱ ፈሳሾችን ይጠቀማል።

3. የሟሟ ጥራት "ወርቃማው ህግ".

በሆነ ምክንያት "HPLC Grade" በመለያዎች ላይ ያያሉ። ስለ ACS ግሬድ ወይም ስለመጠቀም እንኳን አያስቡ። ለምን፧ ምክንያቱም እነዚያ በዝቅተኛ ደረጃ መሟሟት ውስጥ ያሉ "ጥቃቅን" ቆሻሻዎች በጊዜ ሂደት በአምድዎ ላይ ይከማቻሉ፣ ይህም መፍትሄዎን ይገድላሉ እና እንግዳ የሆኑ የሙት ከፍታዎችን ይፈጥራሉ።

ምንጊዜም ሚሊ-Q (18.2 MΩ.cm) ደረጃ ውሃ ይጠቀሙ። ውሃዎ "ቆሻሻ" ከሆነ የመነሻ መስመርዎ እንደ ተራራማ ክልል ይመስላል እና ለምን እንደሆነ ለማወቅ ሶስት ቀናትን ያሳልፋሉ.

4. Deassing እና Filtration: የአፈጻጸም ገዳዮቹ

አየር የ hplc ሞባይል ደረጃ ጠላት ነው። በተለመደው ግፊት, አየር በእርስዎ መፈልፈያዎች ውስጥ ይሟሟል. ነገር ግን ያ ሟሟ ፓምፑን ከተመታ በኋላ ትንንሽ አረፋዎች በቼክ ቫልቮች ወይም በማወቂያ ሴል ውስጥ ሊገቡ ይችላሉ።

• ውጤቱ፡ የፍሰት መጠን ውጣ ውረድ፣ የመነሻ መስመሮች እና የሚንቀሳቀስ የማቆያ ጊዜዎች።

• ማስተካከያው፡- ከፍተኛ ትብነት ያላቸው ሙከራዎችን የምታካሂዱ ከሆነ አብሮገነብ ነዳጆችን፣ ወይም sonication\/vacuum filtration ይጠቀሙ።

ማጣራት አማራጭ አይደለም. የ HPLC ደረጃ መሟሟት እንኳን ከማምረት ሂደቱ ወይም ከጠርሙሱ ቆብ ጥቃቅን ቅንጣቶች ሊኖራቸው ይችላል. የውሃ ማጠራቀሚያዎን ከመንካትዎ በፊት ሁል ጊዜ በ 0.22µm ወይም 0.45µm ገለፈት ያጣሩ። አምድዎን ካለጊዜው ሞት ሊያድን የሚችል የ5 ደቂቃ ተግባር ነው።

5. ቋት እና የመስታወት ወጥመድ

በተገላቢጦሽ ደረጃ ክሮማቶግራፊ፣ ionizable ናሙናዎች ፒኤች እንዲረጋጋ ለማድረግ ቋት እንጠቀማለን።

• Pro ጠቃሚ ምክር፡ ዛሬ ቋት ከተጠቀሙ ወደ ቤት ከመሄድዎ በፊት ስርዓቱን በንጹህ ውሃ/ኦርጋኒክ ድብልቅ ያጠቡ። ካላደረጉት እነዚያ ጨዎች የፓምፕ ማኅተሞችዎን ክሪስታላይዝ ያደርጋሉ እና ይሰባበራሉ።

• የብርጭቆ ወጥመድ፡ የእርስዎ hplc የሞባይል ደረጃ ፒኤች> 8.0 ከሆነ፣ ከመስታወት ማጠራቀሚያዎች የብረት ionዎችን እንደሚያፈስ ያውቃሉ? በእነዚህ አጋጣሚዎች ወደ አይዝጌ ብረት ወይም ልዩ የፕላስቲክ እቃዎች ይለውጡ.

መለያየትዎን ፍጹም እናድርግ

የሞባይል ደረጃን በትክክል ማግኘት በ HPLC ውስጥ ካለው ጦርነት 80% ነው። በ"shag carpet" መነሻ መስመሮች፣ የግፊት ፍንጮች ወይም ወጥነት ከሌላቸው ውጤቶች ጋር እየታገልክ ከሆነ ሌላ ቀን በመገመት አታባክን።

ለእነዚህ ትክክለኛ ጉዳዮች መላ ለመፈለግ በሺዎች የሚቆጠሩ ሰዓቶችን በቤንች አሳልፌያለሁ። ፕሮጀክትዎን ወደ ትክክለኛው መንገድ ለመመለስ ሁልጊዜም ትንሽ "በላብራቶሪ የተረጋገጠ" ምክር በማካፈል ደስተኛ ነኝ።

• WhatsApp: 86 18338832256

• ኢሜይል፡-boonemi@aijirenvial.com
  

ዋቢዎች

• ስናይደር፣ ኤል.አር.፣ ኪርክላንድ፣ ጄ.ጄ.፣ እና ዶላን፣ ጄ.ደብሊው (2011) የዘመናዊ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ መግቢያ። 3 ኛ እትም. ጆን ዊሊ እና ልጆች። (የ HPLC መለያየት ዘዴዎችን ለመረዳት "የወርቅ ደረጃ")።

• ዶላን, ጄ.ደብሊው (2002). "የሞባይል ደረጃ ዝግጅት" LCGC ሰሜን አሜሪካ፣ ተከታታይ መላ ፍለጋ። (ለማጣራት እና ለማጣራት አስፈላጊ ተግባራዊ መመሪያ).

• አፓሪሲዮ ፣ አር (ኤድ)። (2013) የ HPLC ማሻሻያ መመሪያ. ሌላ። (በተገላቢጦሽ የደረጃ ክሮማቶግራፊ ውስጥ ስለ ሟሟ ፖላሪቲ እና ቋት ምርጫ ላይ ያለው አጠቃላይ መረጃ)።

• ቀልጣፋ ቴክኖሎጂዎች. "የHPLC ስርዓት መላ ፍለጋ መመሪያ፡ የተለመዱ የሞባይል ደረጃ ስህተቶችን ማስወገድ።" የቴክኒክ ሀብት ቤተ መጻሕፍት.

• የውሃ ኮርፖሬሽን. "የ Chromatography መርሆዎች፡ መደበኛ ደረጃ ከተቃራኒ ደረጃ ጋር።" የትምህርት ተከታታይ.

• ዓለም አቀፍ ኮንፈረንስ ስለ ስምምነት (ICH)። Q2(R1) የትንታኔ ሂደቶችን ማረጋገጥ፡ ጽሑፍ እና ዘዴ። (የከፍተኛ አካባቢ መጠን እና የማቆያ ጊዜ መረጋጋት መደበኛ)።