Hplc nümunəsi hazırlığı haqqında bilmək üçün lazım olan hər şey

Nümunə hazırlığı bir sıra səbəblərə görə HPLC analizində kritik bir addımdır.

Müdaxiləni minimuma endirmək:Nümunələr tez-tez hədəf analitiklərin aşkarlanmasına müdaxilə edə biləcək çirk və matris komponentləri ehtiva edir. Effektiv nümunə hazırlıq üsulları bu istenmeyen maddələrin çıxarılmasına və analitik dəqiqliyi yaxşılaşdırmağa kömək edə bilər.

Analite bərpa yaxşılaşdırın:Düzgün hazırlıq analite bərpa yaxşılaşdırır və nəticələrin orijinal nümunənin faktiki konsentrasiyasını əks etdirməsini təmin edir. Bu, analitiklərin aşağı konsentrasiyalarda mövcud olduğu izlərin təhlili üçün xüsusilə vacibdir.

İnkişaf etmiş zirvə forması:Düzgün hazırlanmış nümunələr, xromatoqramda simmetrik və yaxşı müəyyən edilmiş zirvələrə kömək edir. Bu dəqiq miqdar üçün vacibdir. Yanlış nümunə hazırlığı, məlumat təfsirini çətinləşdirən zirvəli quyruq və genişlənmə ilə nəticələnə bilər.

HPLC sisteminizi qoruyun:Nümunənizdəki çirkləndiricilər sütunlara və hplc sisteminizdəki digər komponentlərə zərər verə bilər, artan texniki xidmət xərcləri və iş vaxtının azalmasına səbəb ola bilər. Düzgün nümunə hazırlığı sistem tıxanma və aşınma riskini azaldır.

Nümunə hazırlığının ilk addımı nümunənizi düzgün toplamaqdır. Buraya daxildir:

Təmiz qablardan istifadə edin:Həmişə çirklənməməsi üçün təmiz, inert qablardan istifadə edin. Şüşə və ya yüksək keyfiyyətli plastik qablar tövsiyə olunur.

Çirklənmədən çəkinin:Sebum və digər mənbələrdən çirklənmənin qarşısını almaq üçün əlcəklərdən və təmiz alətlərdən istifadə edin.

Düzgün etiketləmə:Qarışıqların qarşısını almaq və izleyiciliyi təmin etmək üçün nümunələri açıq şəkildə etiketləyin.

Nümunə homogenizasiya, çoxalma nəticələri üçün vacib olan homojenliyi təmin edir. Homogenizasiya texnikalarına aşağıdakılar daxildir:

Mexanik homogenizasiya: Bir qarışdırıcı və ya homogenizer istifadə edərək bərk və ya yarı bərk nümunələri qarışdırmaq.

Ultrasonik homogenləşmə:Maye nümunə daxilində hissəcikləri dağıtmaq üçün ultrasəsin tətbiqi.

Təhlillərin gözlənilən konsentrasiyasından asılı olaraq, nümunələrin seyreltilməməsi və ya cəmləşməsi lazım ola bilər. Buna nail olmaq olar:

Seyreltmə:Nümunəni mobil faza kimi eyni həlledici istifadə edərək istədiyiniz konsentrasiyaya qədər seyreltin.

Konsentrasiya:Təhlilçilər buxarlanma və ya bərk faz ekstraktı (spe) kimi texnikalardan istifadə edərək cəmlənə bilər.

Filtrasiya, HPLC sütunlarını tıxaya biləcək hissəcik maddələri çıxarmaq üçün vacibdir. Ümumi süzgəc metodlarına aşağıdakılar daxildir:

Membran filtrasiya:İstifadə etmək0.2μm və ya 0.45 mm filtrhissəcikləri çıxarmaq. Adətən polietlerulfon (pes) və ya neylon filtrləri istifadə olunur.

Prefiltrasiya:Yüksək hissəcik məzmunu olan nümunələr üçün, daha böyük bir məsaməli ölçülü filtr vasitəsilə prefiltrasiya tıxanmağın qarşısını ala bilər.


50-tez şpris filtrləri ilə bağlı tez-tez verilən suallar, bu məlumatlı məqaləni yoxlamağınızdan əmin olun: "Şpris filtri" mövzusu 50-tez verilən suallar

Analitatın deqradasiyasının qarşısını almaq üçün nümunənizi sabitləşdirməyi düşünün.

PH tənzimlənməsi:PH tənzimlənməsi müəyyən analitikləri sabitləşdirməyə kömək edə bilər. Məsələn, turşu birləşmələri deqradasiyanın qarşısını almaq üçün turşu tələb edə bilər.

Əlavələr:Stabilizatorlar və ya konservantlar əlavə etmək, saxlama və analiz zamanı nümunə bütövlüyünü qorumağa kömək edə bilər.

Nümunənizi həll etmək və HPLC sisteminizlə uyğunluğu təmin etmək üçün düzgün həlledici seçmək vacibdir. Aşağıdakıları nəzərdən keçirin:

Solvent polarity:Tam yayıla biləcək, həlledici analitiyanın polarite uyğun olmalıdır.

Mobil faza uyğunluğu: Potensial müdaxilələri minimuma endirmək üçün mobil fazaya uyğun bir həlledicidən istifadə edin.

7. Standartların hazırlanması

Kalibrləmə standartlarının hazırlanması bir nümunədə analitik ölçmək üçün vacibdir. Buraya daxildir:

Kalibrləmə əyrisinin hazırlanması:Kalibrləmə üçün bir kalibrləmə əyrisi yaratmaq üçün analitik bir sıra tanınmış konsentrasiyalar hazırlayın.

Eyni həlledicidən istifadə edin:Ardıcıllığı qorumaq üçün hər zaman nümunələriniz kimi eyni həlledici və şərtlərdən istifadə edərək standartlarınızı həmişə hazırlayın.

Standart əməliyyat prosedurlarını izləyin (SOPS):Ardıcıllığı və reprodukless təmin etmək üçün nümunə hazırlığı üçün SOPS-a əməl edin və yapışdırın.

Yüksək keyfiyyətli reagentlər və həlledicilərdən istifadə edin:Həmişə çirklənməni minimuma endirmək üçün hplc-dərəcəli həlledicilər və yüksək təmizlik reagentlərindən istifadə edin.

İş sahənizi təmiz saxlayın:Nümunə hazırlıq sahənizi təmizləyin və çirklənmə riskini azaltmaq üçün təşkil edildi.

Sənəddə hər şeyi:Nümunə hazırlıq prosedurlarınızın, o cümlədən standart protokollardan hər hansı bir sapmalarınızın ətraflı qeydlərini aparın.

Doğrulama üsulları:Etibarlı və çox nəticələnən nəticələrini təmin etmək üçün mütəmadi olaraq nümunə hazırlıq metodlarını təsdiqləyin.

Zəif zirvəsi forması:Peaks geniş və ya quyruqlu olarsa, bu, natamam ləğv və ya hissəciklərin varlığını göstərə bilər. Nümunənizin hərtərəfli qarışdırıldığını və süzülməsini təmin edin.

Ghost zirvələri:Ghost zirvələri həlledici və ya nümunədəki çirklər səbəb ola bilər, yüksək saflıq həlledicilərindən istifadə edin və bütün şüşə qabların və avadanlıqların təmiz olmasını təmin edin.

Aşağı həssaslıq:Həssaslıq azdırsa, hasilat metodunuzu optimallaşdırmağı və ya analitikinizin konsentrasiyasını artırmağı düşünün.

Sütun tıxanması:Tez-tez tıxanma, nümunənizin çox hissəcikləri ehtiva etdiyini və ya adekvat süzülməməsini göstərə bilər. Filtrasiya prosesinizi yenidən qiymətləndirin və əvvəlcədən filtrasiyanı nəzərdən keçirin.

Uyğun olmayan nəticələr:Nəticələrdəki dəyişiklik, uyğunsuz nümunə hazırlığından qaynaqlanır. Bütün prosedurları standartlaşdırın və nümunə hazırlığında iştirak edən işçilərin düzgün öyrədilməsini təmin edin.

Analitik tələblər artdıqca, laboratoriyalar səmərəliliyi və dəqiqliyini artırmaq üçün daha inkişaf etmiş nümunə hazırlıq üsullarını qəbul edirlər:

Spe, mürəkkəb matrislərdən analitiklərin seçmə çıxarılmasına imkan verən geniş istifadə olunan bir texnikadır. Çirklərin keçməsinə icazə verərkən hədəf analitikini qoruyan möhkəm adsorbent material vasitəsilə maye nümunəsi keçməyi əhatə edir.

LLE, iki imiscon maye içərisində həll olunmasına əsaslanan analitatları ayıran bir texnikadır. Bu üsul fərqli qütblər olan birləşmələrin ayrılmasında təsirli olur və tez-tez ekoloji və əczaçılıq analizində istifadə olunur.

Quechers, hasilatı və təmizləyici addımları bir prosesə birləşdirən yemək və təmizlənmə addımlarını bir prosesə birləşdirən və səmərəli və səmərəli hala gətirən yemək və ətraf mühit nümunələri hazırlamaq üçün məşhur bir üsuldur.

Nəqliyyat və reproduksiya avtomatlaşdırılmış nümunə hazırlığı sistemləri ilə əhəmiyyətli dərəcədə yaxşılaşdırıla bilər, bu da minimal insan müdaxiləsi ilə seyreltmə, filtrasiya və spe kimi tapşırıqları yerinə yetirə bilər, bununla da səhv riskini azaldır.


HPLC nümunəsi hazırlığı haqqında daha çox bilmək istəyirsinizsə, bu məqaləni yoxlayın: Ən yaxşı nəticələr üçün hplc nümunə hazırlıq həlləri

HPLC Nümunə hazırlığı, analitik nəticələrin düzgünlüyünə və etibarlılığına əhəmiyyətli dərəcədə təsir göstərə biləcək kritik bir addımdır. Müvafiq üsullardan istifadə edərək ən yaxşı təcrübələri izləyərək ümumi problemləri həll etməklə, laboratoriyalar, analitik ehtiyaclar inkişaf etdikcə inkişaf etmiş texnikalar və texnologiyalar qəbul edərək nümunə hazırlıq prosesini optimallaşdıra bilər. Avtomatlaşdırma, HPLC təhlillərinin səmərəliliyini və effektivliyini daha da yaxşılaşdıracaqdır. Düzgün nümunə hazırlığı yalnız nəticələrin keyfiyyətini artırmır, eyni zamanda uzunmüddətli etibarlılıq və performans təmin edən HPLC sistemini də qoruyur.