Axını mənimsəmək: HPLC Mobil Fazalarına Laboratoriya Veteranının Bələdçisi

Giriş

Mən sizin olduğunuz yerdə olmuşam - gecə saat 2-də monitora baxıram, dənizdə itmiş qayıq kimi əsas drifti izləyirəm və "HPLC doo-hickey"in sırf mənim ağlımı yoxlamaq üçün icad edilib-edilmədiyini düşünürəm. Yüksək performanslı maye xromatoqrafiyası (HPLC) ətrafında başınızı örtməyə çalışarkən çılğın hiss edirsinizsə, nəfəs alın. Bu, sadəcə bahalı hissələrin qutusu deyil; kimya və fizika arasında incə bir rəqsdir.

Laboratoriyada biz tez-tez mobil mərhələnin sistemin "həyat xətti" olduğunu söyləyirik. Onsuz, nümunəniz sadəcə bir injektorda oturur, heç yerə getmir. Bəs molekullarınızı detektora daşımaq üçün düzgün “qatar”ı necə seçirsiniz? İstirahət otağında qəhvə arxasında söhbət etdiyimiz kimi onu parçalayaq.

1. HPLC həqiqətən nədir?

Özündə HPLC ayrılma ilə bağlıdır. Bunu "tras"ın stasionar faza (sütun) və qaçışçıları itələyən "külək"in hplc mobil mərhələsi olduğu bir yarış kimi düşünün.

Sehr, müxtəlif molekulların fərqli "yaxınlıqlara" malik olması səbəbindən baş verir. Bəzi molekullar mobil fazanı sevir və sütunu böyüdür. Digərləri "yapışqandır" - onlar stasionar fazada əzilir və geridə qalırlar. Sürətdəki bu fərq xromatoqramınızda bu zirvələri yaradan şeydir.

2. Normal Faza və Əks Faza

Bu, adətən, hər kəsin saçını yolmağa başladığı yerdir. Təcrübəmdə bunu yadda saxlamağın ən asan yolunu qütblərə baxmaq olduğunu tapdım.

A. Normal Faza Xromatoqrafiyası

Bu, "köhnə məktəb" üsuludur. Normal faza xromatoqrafiyasında stasionar faza qütbdür - onu qütb molekulları üçün bir maqnit kimi düşünün. Burada istifadə etdiyimiz mobil faza qeyri-polyardır, adətən heksan və ya heptan kimi həlledicilərdir.

• Məntiq: Qütb "yapışqan" molekullar qütb sütunu tərəfindən tutulur. Qütb olmayan molekullar qeyri-qütblü mobil faza ilə tez yuyulur.

• Pro İpucu: Mobil fazanızın polaritesini artırsanız (bir az izopropanol əlavə etsəniz), nümunələriniz həqiqətən daha sürətli hərəkət edəcək.

B. Əks Faza Xromatoqrafiyası

Bu gün bu qızıl standartdır. Yəqin ki, laboratoriyada gördüyüm işlərin 90%-i əks fazalı xromatoqrafiyanı əhatə edir. Budur, skripti çeviririk. Sütun qeyri-qütbdür (yağ kimi hidrofobikdir), faza hərəkətli isə qütbdür (adətən su və metanol və ya asetonitril qarışığı).

• Məntiq: Su sevən (qütb) molekullar yağlı sütuna nifrət etdikləri üçün yaxınlaşırlar. Yağ sevən (qütb olmayan) molekullar yapışqan kimi sütuna yapışır.

• Biz onu niyə sevirik: Bu, proqnozlaşdırıla bilən, çox yönlüdür və idarə edilməsi daha asan olan su əsaslı həlledicilərdən istifadə edir.

3. Solvent keyfiyyətinin "Qızıl Qaydası"

Bir səbəbdən etiketlərdə "HPLC Qiyməti" görəcəksiniz. ACS dərəcəsi və ya daha az bir şey istifadə etməyi düşünməyin. Niyə? Çünki aşağı dərəcəli həlledicilərdə olan bu "kiçik" çirklər zamanla sütununuzda toplanaraq, qətnamənizi öldürəcək və qəribə xəyal zirvələri yaradacaq.

Həmişə Milli-Q (18,2 MΩ.cm) dərəcəli su istifadə edin. Əgər suyunuz "çirklidirsə", təməl xəttiniz dağ silsiləsi kimi görünəcək və bunun səbəbini anlamağa üç gün sərf edəcəksiniz.

4. Deqazasiya və filtrasiya: Performans Killerləri

Hava hplc mobil fazasının düşmənidir. Normal təzyiq altında hava həlledicilərinizdə həll olur. Lakin bu həlledici nasosa dəydikdən sonra o kiçik baloncuklar yoxlama klapanlarında və ya detektor hüceyrəsində sıxışa bilər.

• Nəticə: Axın sürətinin dəyişməsi, pulsasiya əsas xətləri və hərəkətdə saxlama müddətləri.

• Düzəliş: Əgər yüksək həssaslıq analizləri həyata keçirirsinizsə, quraşdırılmış deqazatorlardan və ya sonikasiya\/vakuum filtrasiyasından istifadə edin.

Filtrasiya Könüllü deyil. Hətta HPLC dərəcəli həlledicilərdə istehsal prosesindən və ya şüşə qapağından mikroskopik hissəciklər ola bilər. Həmişə rezervuarınıza toxunmazdan əvvəl 0,22µm və ya 0,45µm membrandan süzün. Bu, sütununuzu vaxtından əvvəl ölümdən xilas edə biləcək 5 dəqiqəlik bir işdir.

5. Tamponlar və Şüşə Tələ

Əks fazalı xromatoqrafiyada ionlaşan nümunələr üçün pH-ı sabit saxlamaq üçün tamponlardan istifadə edirik.

• İpucu: Əgər bu gün buferdən istifadə etmisinizsə, evə getməzdən əvvəl sistemi təmiz su\/üzvi qarışıq ilə yuyun. Bunu etməsəniz, bu duzlar kristallaşacaq və nasos möhürlərini parçalayacaq.

• Şüşə Tələ: Hplc mobil fazınızın pH > 8.0 olarsa, o, həqiqətən şüşə anbarlardan metal ionlarını süzə biləcəyini bilirdinizmi? Bu hallarda paslanmayan poladdan və ya xüsusi plastik qablara keçin.

Gəlin Ayrılığınızı Mükəmməl Edək

Mobil mərhələni düzgün əldə etmək HPLC-də döyüşün 80%-ni təşkil edir. Əgər "xalça" əsas xətləri, təzyiq sıçrayışları və ya uyğun olmayan nəticələrlə mübarizə aparırsansa, başqa bir günü təxmin etməklə boş yerə sərf etmə.

Bu dəqiq problemləri həll etmək üçün skamyada minlərlə saat sərf etdim. Layihənizi yoluna qaytarmaq üçün bir az “laboratoriyada sübut edilmiş” məsləhətləri bölüşməkdən həmişə məmnunam.

• WhatsApp: 86 18338832256

• E-poçt:boonemi@aijirenvial.com
  

İstinadlar

• Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2011). Müasir Maye Xromatoqrafiyasına Giriş. 3-cü nəşr. John Wiley & Sons. (HPLC ayırma mexanizmlərini başa düşmək üçün "Qızıl Standart").

• Dolan, J. W. (2002). "Mobil fazaya hazırlıq." LCGC Şimali Amerika, Problemlərin aradan qaldırılması seriyası. (Deqazasiya və filtrasiya üçün əsas praktik təlimat).

• Aparicio, R. (Red.). (2013). HPLC optimallaşdırma təlimatı. Elsevier. (Tərs fazalı xromatoqrafiyada həlledicinin polaritesi və tampon seçimi haqqında hərtərəfli məlumatlar).

• Agilent Technologies. "HPLC Sistem Problemlərini Giderme Bələdçisi: Ümumi Mobil Faza Səhvlərinin Qarşısının Alınması." Texniki Resurs Kitabxanası.

• Waters Korporasiyası. "Xromatoqrafiyanın Prinsipləri: Normal Faza və Əks Faza". Təhsil seriyası.

• Harmonizasiya üzrə Beynəlxalq Konfrans (ICH). Q2(R1) Analitik Prosedurların Qiymətləndirilməsi: Mətn və Metodologiya. (Pik ərazinin kəmiyyəti və saxlama müddətinin sabitliyi üçün standart).