Авалоданне патокам: кіраўніцтва для ветэранаў лабараторыі па мабільных фазах ВЭЖХ

Уводзіны

Я быў там, дзе вы знаходзіцеся, — глядзеў на манітор у 2 гадзіны ночы, назіраў, як базавая лінія дрэйфуе, як страчаная лодка ў моры, разважаючы, ці не была вынайдзеная «ВЭЖХ-ду-хікі» проста для праверкі майго розуму. Калі вы адчуваеце трызненне, спрабуючы заняцца высокаэфектыўнай вадкаснай храматаграфіяй (ВЭЖХ), удыхніце. Гэта не проста скрынка з дарагімі запчасткамі; гэта далікатны танец паміж хіміяй і фізікай.

У лабараторыі мы часта гаворым, што рухомая фаза - гэта "лінія жыцця" сістэмы. Без гэтага ваш узор проста знаходзіцца ў інжэктары і нікуды не ідзе. Але як выбраць правільны "цягнік", каб даставіць малекулы да дэтэктара? Давайце разбярэмся, як мы размаўляем за кавы ў пакоі адпачынку.

1. Што такое ВЭЖХ?

Па сваёй сутнасці ВЭЖХ - гэта падзел. Думайце пра гэта як пра гонку, дзе "дарожка" - гэта нерухомая фаза (слуп), а "вецер", які штурхае бегуноў, - гэта рухомая фаза ВЭЖХ.

Магія адбываецца таму, што розныя малекулы маюць рознае "сродства". Некаторыя малекулы любяць рухомую фазу і павялічваюць слупок. Іншыя «ліпкія» — ім падабаецца стацыянарная фаза і яны адстаюць. Гэтая розніца ў хуткасці стварае гэтыя пікі на храматаграме.

2. Нармальная фаза супраць зваротнай фазы

Звычайна тут усе пачынаюць вырываць валасы. За гады маёй практыкі я выявіў, што самы просты спосаб запомніць гэта, гледзячы на ​​палярнасць.

А. Нармальная фазавая храматаграфія

Гэта спосаб «старой школы». У звычайнай фазавай храматаграфіі стацыянарная фаза з'яўляецца палярнай - лічыце яе магнітам для палярных малекул. Мабільная фаза, якую мы тут выкарыстоўваем, непалярная, звычайна растваральнікі, такія як гексан або гептан.

• Логіка: палярныя "ліпкія" малекулы стрымліваюцца палярным слупом. Непалярныя малекулы хутка вымываюцца з непалярнай рухомай фазай.

• Прафесійная парада: калі вы павялічыце палярнасць вашай рухомай фазы (дадаўшы трохі ізапрапанолу), вашы ўзоры будуць рухацца хутчэй.

B. Храматаграфія з зваротнай фазай

Сёння гэта залаты стандарт. Верагодна, 90% працы, якую я раблю ў лабараторыі, звязана з храматаграфіяй са зваротнай фазай. Тут мы перагортваем сцэнар. Калонка непалярная (гідрафобная, як алей), а рухомая фаза палярная (звычайна сумесь вады і метанолу або ацэтанітрылу).

• Логіка: Водалюбівыя (палярныя) малекулы павялічваюць маштаб, таму што ненавідзяць масляністы слуп. Тлушчалюбівыя (непалярныя) малекулы прыліпаюць да калонкі, як клей.

• Чаму нам гэта падабаецца: ён прадказальны, універсальны і выкарыстоўвае растваральнікі на воднай аснове, якімі лягчэй кіраваць.

3. «Залатое правіла» якасці растваральнікаў

Вы нездарма ўбачыце на этыкетках надпіс «ВЭЖХ клас». Нават не думайце аб выкарыстанні класа ACS або чагосьці ніжэйшага. чаму? Таму што гэтыя "малюсенькія" прымешкі ў растваральніках ніжэйшага гатунку з цягам часу будуць назапашвацца на вашай калонцы, забіваючы вашу раздзяляльнасць і ствараючы дзіўныя пікі-прывіды.

Заўсёды выкарыстоўвайце ваду маркі Milli-Q (18,2 МОм.см). Калі ваша вада «брудная», ваша базавая лінія будзе выглядаць як горны хрыбет, і вы патраціце тры дні, каб высветліць, чаму.

4. Дэгазацыя і фільтраванне: забойцы прадукцыйнасці

Паветра - вораг мабільнай фазы ВЭЖК. Пры нармальным ціску паветра раствараецца ў вашых растваральніках. Але як толькі гэты растваральнік трапляе ў помпа, гэтыя малюсенькія бурбалкі могуць апынуцца ў пастцы зваротных клапанаў або ячэйкі дэтэктара.

• Вынік: ваганні хуткасці патоку, пульсацыйныя базавыя лініі і рух часу ўтрымання.

• Выпраўленне: выкарыстоўвайце ўбудаваныя дэгазатар або апрацоўку ультрагукам\/вакуумную фільтрацыю, калі вы выкарыстоўваеце высокаадчувальныя аналізы.

Фільтраванне не з'яўляецца абавязковым. Нават растваральнікі класа HPLC могуць мець мікраскапічныя часціцы з вытворчага працэсу або вечка бутэлькі. Заўсёды фільтруйце праз мембрану 0,22 мкм або 0,45 мкм, перш чым яна дакранецца да вашага рэзервуара. Гэта 5-хвіліннае заданне можа выратаваць вашу калонку ад заўчаснай смерці.

5. Буферы і шкляная пастка

У храматаграфіі са зваротнай фазай мы выкарыстоўваем буферы для падтрымання стабільнасці рН для іянізаваных узораў.

• Прафесійная парада: калі вы сёння выкарыстоўвалі буфер, прамыйце сістэму чыстай вадой\/арганічнай сумессю, перш чым ісці дадому. Калі вы гэтага не зробіце, гэтыя солі крышталізуюцца і разарвуць ушчыльнення помпы.

• Шкляная пастка: ці ведаеце вы, што калі рН вашай мабільнай фазы ВЭЖХ > 8,0, яна сапраўды можа вымываць іёны металу са шкляных рэзервуараў? У гэтых выпадках перайдзіце на ёмістасці з нержавеючай сталі або спецыялізаваныя пластыкавыя кантэйнеры.

Давайце зробім ваш разлуку ідэальным

Правільная рухомая фаза - гэта 80% бітвы ў ВЭЖХ. Калі вы змагаецеся з базавымі лініямі "махоркі", скокамі ціску або супярэчлівымі вынікамі, не марнуйце ні дня на здагадкі.

Я правёў тысячы гадзін на лаўцы, вырашаючы гэтыя дакладныя праблемы. Я заўсёды рады падзяліцца некалькімі "праверанымі ў лабараторыі" парадамі, каб вярнуць ваш праект у патрэбнае рэчышча.

• WhatsApp: 86 18338832256

• электронная пошта:boonemi@aijirenvial.com
  

Спасылкі

• Снайдэр, Л. Р., Кіркленд, Дж. Дж. і Долан, Дж. У. (2011). Уводзіны ў сучасную вадкасную храматаграфію. 3-е выданне. Джон Уайлі і сыны. («Залаты стандарт» для разумення механізмаў падзелу ВЭЖХ).

• Долан, Дж. У. (2002). «Падрыхтоўка мабільнай фазы». LCGC North America, серыя па ліквідацыі непаладак. (Асноўнае практычнае кіраўніцтва па дэгазацыі і фільтрацыі).

• Апарысіа, Р. (Рэд.). (2013). Кіраўніцтва па аптымізацыі ВЭЖХ. Elsevier. (Вычарпальныя дадзеныя аб палярнасці растваральніка і выбары буфера ў храматаграфіі са зваротнай фазай).

• Кампанія Agilent Technologies. «Кіраўніцтва па ліквідацыі непаладак сістэмы HPLC: пазбяганне распаўсюджаных памылак мабільнай фазы». Бібліятэка тэхнічных рэсурсаў.

• Карпарацыя Waters. "Прынцыпы храматаграфіі: нармальная фаза супраць зваротнай фазы". Адукацыйны серыял.

• Міжнародная канферэнцыя па гарманізацыі (ICH). Q2(R1) Праверка аналітычных працэдур: тэкст і метадалогія. (Стандарт для колькаснага вызначэння плошчы піку і стабільнасці часу ўтрымання).