Высокапрадукцыйная вадкасная храматаграфія (ВЭЖХ) і вадкасная храматаграфія-мас-спектраметрыя (LCMS)-гэта дзве магутныя аналітычныя метады, якія выкарыстоўваюцца ў розных абладках, у тым ліку фармацэўтычных прэпаратаў, навук аб навакольным асяроддзі і навуках аб жыцці. У той час як абодва метаду прадугледжваюць аддзяленне і аналіз злучэнняў, іх прынцыпы, функцыі і прыкладанні вельмі розныя. Гэты запіс у блогу будзе параўноўваць HPLC і LCMS, арыентуючыся на іх ключавыя адрозненні і перавагі кожнай тэхнікі.

Прынцып працы

HPLC

HPLC - гэта храматаграфічная методыка, якая аддзяляе злучэнні на аснове іх узаемадзеяння са стацыянарнымі і мабільнымі фазамі. У HPLC вадкасць мабільнай фазы запампоўваецца праз калону, запоўненую нерухомай фазай, якая звычайна складаецца з дробных часціц крэмнія або палімераў. Калі ў сістэму ўводзіцца ўзорная сумесь, кампаненты падзелены на аснове іх сродства да стацыянарнай фазы. Злучэнні, якія больш моцна ўзаемадзейнічаюць з нерухомай фазай элюіруе павольней, у той час як злучэнні, якія больш моцна ўзаемадзейнічаюць. Затым аддзеленыя злучэнні выяўляюцца з выкарыстаннем розных дэтэктараў, такіх як ультрафіялетавыя VIS, флуарэсцэнцыя або дэтэктары праламлення.

Хочаце даведацца больш пра прыкладанні флаконаў храматаграфіі, калі ласка, праверце гэты артыкул:15 прыкладанняў флаконаў храматаграфіі ў розных галінах

LCMS

LCMS спалучае ў сабе магчымасці падзелу ВЭЖХ з магчымасцямі масавага аналізу масавай спектраметрыі. У LCMS узоры спачатку падзелены з дапамогай ВЭЖХ, як і ў звычайным ВЭЖХ. Аднак, замест таго, каб выявіць звычайны дэтэктар, элюіраваныя злучэнні ўводзяцца ў мас -спектраметр. Масавы спектрометр іянізуе злучэнні і вымярае іх суадносіны масы да зарадкі, забяспечваючы падрабязную інфармацыю пра малекулярную масу і структуру аналіту. Такое спалучэнне падзелу і мас -спектраметрыі забяспечвае вялікую адчувальнасць і спецыфіку, чым толькі ВЭЖХ.

Механізм падзелу

HPLC:HPLC выкарыстоўвае высокі ціск, каб націснуць вадкасць мабільнай фазы праз запакаваную калонку, якая змяшчае стацыянарную фазу. Злучэнні падзелены на аснове іх дыферэнцыяльнага ўзаемадзеяння са стацыянарнай фазай, што прыводзіць да дакладнага і эфектыўнага падзелу.

LCMS:LCMS спалучае ў сабе фізічныя магчымасці аддзялення ВЭЖХ з магчымасцямі мас -спектраметрыі мас -спектраметрыі (МС). Кампанент вадкаснай храматаграфіі аддзяляе злучэнні, у той час як мас-спектраметр вымярае суадносіны масы і зараду іянізаваных відаў.

Адчувальнасць і селектыўнасць

HPLC:HPLC мае добрую адчувальнасць і селектыўнасць, асабліва ў спалучэнні з сучаснымі дэтэктарамі, такімі як ультрафіялетавыя VIS, флуарэсцэнцыя або дэтэктары масіва дыёда. Аднак толькі ВЭЖК можа не забяспечыць належнай спецыфікі для складаных узораў.

LCMS:LCMS мае цудоўную адчувальнасць і селектыўнасць у параўнанні з ВЭЖХ. Масавыя спектраметры могуць дакладна вызначыць і колькасна вызначыць злучэнні на аснове іх унікальных суадносін масы і заражэння, нават у складаных матрыцах. Гэта робіць LCMS асабліва карысным для аналізу слядоў і пацверджання асобы невядомых рэчываў.

Падрыхтоўка ўзору

HPLC:Падрыхтоўка ўзору для ВЭЖХ звычайна ўключае развядзенне, фільтрацыю або простыя метады экстракцыі. Узоры не павінны выпарацца, таму ВЭЖК падыходзіць для шырокага спектру злучэнняў, у тым ліку палярных і непалаторных рэчываў.

LCMS:Падрыхтоўка ўзору для LCMS падобная на тое, што для ВЭЖХ, але могуць спатрэбіцца дадатковыя этапы для забеспячэння сумяшчальнасці з масавым спектраметрам. Напрыклад, для павышэння іянізацыі і прадухілення падаўлення іёнаў можа спатрэбіцца лятучыя буферы або дабаўкі.

Прыкладанне

HPLC:ВЭЖК шырока выкарыстоўваецца для аналізу фармацэўтычных прэпаратаў, прадуктаў харчавання і навакольнага асяроддзя. Гэта асабліва эфектыўна для падзелу і колькаснай ацэнкі злучэнняў у складаных сумесях, такіх як прымешкі лекаў, харчовыя дабаўкі і рэшткі пестыцыдаў.

LCMS:LCMS мае шырокі спектр прыкладанняў, у тым ліку:

Фармацэўтычны аналіз: выкарыстоўваецца ў выяўленні наркотыкаў, распрацоўцы і кантролі якасці.

Пратэаміка і метабаламіка: выкарыстоўваецца для выяўлення і колькаснай ацэнкі бялкоў і метабалітаў у біялагічных узорах.

Аналіз навакольнага асяроддзя: выкарыстоўваецца для выяўлення забруджвальных рэчываў у вадзе, глебе і паветра.

Цікава пра ролю сертыфікаваных флаконаў ВЭЖХ у забеспячэнні дакладнага аналізу выбаркі? Прачытайце гэты артыкул: Важнасць сертыфікаваных флаконаў HPLC для дакладнага аналізу выбаркі

Выснова

HPLC і LCMS - гэта магутныя аналітычныя метады з уласнымі сіламі і абмежаваннямі. Выбар паміж імі залежыць ад канкрэтных патрабаванняў аналізу, такіх як адчувальнасць, селектыўнасць, складанасць выбаркі і наяўныя рэсурсы.

ВЭЖК - добры выбар для звычайнага аналізу вядомых злучэнняў у адносна простых матрыцах, дзе кошт і прастата ў выкарыстанні з'яўляюцца важнымі фактарамі. З іншага боку, LCMS-гэта пераважная методыка аналізу складаных узораў, выяўленне невядомых злучэнняў і дасягненне выяўлення ультра-трасе.

Па меры таго, як тэхналогія працягвае прасоўвацца, інтэграцыя ВЭЖХ і LCMS будзе гуляць усё больш важную ролю ў задавальненні развіваюцца патрэбаў аналітычнай хіміі і забеспячэння якасных вынікаў у розных дадатках.

Папярэдні:

Канчатковае кіраўніцтва да 0,45 мікронных шпрыц -фільтраў для вас

Далей:

Усё, што вам трэба ведаць пра падрыхтоўку ўзораў Headspace GC