Изчерпателно ръководство за предварителна обработка на проби за HPLC – филтриране, екстракция и дериватизация
Новини
категории
ЗАПИТВАНЕ

HPLC предварителна обработка на проби – Ръководство стъпка по стъпка

21 октомври 2025 г
ЕТИКЕТИ:

Примерен преглед на предварителната обработка

Предварителната обработка на пробата включва всички операции преди инжектирането. Освен претегляне, разтваряне и разреждане, това включва и следните стъпки:

  • Филтриране
  • Екстракция
  • Дериватизация (дериватизация преди колона)
  • Течна хроматография (колонна хроматография с ниско налягане)

Предварителната обработка може да се извърши ръчно или автоматизирано. Запознати ли сте с предварителната обработка на пробите?


Дериватизация

Някои проби все още не могат да бъдат директно инжектирани след предварителна обработка. Необходима е дериватизация, за да се направят съединения без UV абсорбция или флуоресценция, откриваеми от UV или флуоресцентни детектори.

  • Подобрява чувствителността
  • Подобрява разделянето (промяна на качеството)

Възможните проблеми включват загуба на проба, замърсяване, непълни реакции или множество странични продукти, които могат да повлияят на точността или да въведат грешки.

Филтриране на проби

LC пробите трябва да бъдат еднородни и без частици; частиците могат да повредят инжектора или да блокират колоната. Стъпките включват:

  • Разклатете пробата преди инжектиране и проверете за частици, мътност или емулсии
  • Ако се наблюдават частици, филтрирайте пробата с помощта на мембрана, която може да задържи частици ≥0,15 μm

Потенциални проблеми: замърсяване на пробата, концентрация на компоненти, намаляващи адсорбцията, и изпаряване на разтворителя, причиняващи грешки.

Методи за извличане

Екстракцията разделя аналитите от ко-разтворителите или премахва интерфериращите вещества (напр. протеини). Органичните разтворители трябва да са нискотоксични, летливи, с ниско съдържание на примеси и да разтварят добре пробата.

Обичайни разтворители: диетилов етер, етилацетат, дихлорометан, хлороформ, бензен или смеси.

След екстракция пробите могат да бъдат инжектирани директно или концентрирани, за да се увеличи концентрацията и чувствителността на аналита.

Екстракция на водоразтворима проба

  1. Киселинни компоненти и соли: извличане на примеси с органичен разтворител, настройване на киселинност, след това извличане или инжектиране; или изсушете под N₂ и разтворете в подходящ разтворител преди инжектиране.
  2. Основни компоненти и соли: извличане на примеси с органичен разтворител, коригиране до основно, след това извличане или инжектиране; или изсушете под N₂ и разтворете в подходящ разтворител преди инжектиране.
  3. Неутрални компоненти: екстрахирайте примесите с органичен разтворител, след което анализирайте директно чрез хроматография с обърната фаза.


Екстракция на мастноразтворими проби

Екстрахирайте с органичен разтворител или инжектирайте директно; или изсушете под N₂ и разтворете в подходящ разтворител преди инжектиране.


Източници на замърсяване

Потенциални източници на замърсяване в анализа:

Тип замърсяване

Източник

Мерки за превенция

Екологични

Вредни газове, прах, аерозоли

Поддържайте инструменталната стая изолирана, чиста; инсталирайте климатик; контрол на влажността <70%; предотвратяване на влага, корозия, вибрации

Контейнери

Стъклена, керамична, кварцова, пластмасова лабораторна посуда

Изберете подходящи контейнери за тип проба; почистете старателно

Реактиви

Реагенти без хроматографски клас

Използвайте реактиви с хроматографски клас, висока чистота или аналитичен клас


Приготвяне на стандартен разтвор

  • Първо пригответе вътрешен стандартен разтвор; използвайте една и съща партида в стандарти и проби, за да намалите грешките
  • Веществата трябва да са хроматографски и стабилни
  • Съхранявайте стандартните разтвори в кафяви бутилки при ниска температура
  • За витамини използвайте кафяви мерителни колби или предпазете от светлина


Често срещани проблеми при предварителната обработка на пробите и разтворите

проблем

причина

Решение

Несвързани пикове в хроматограмата

Замърсяване на филтъра

  1. Накиснете филтъра в разтворителя на пробата и инжектирайте теста

  2. Променете типа филтър

  3. Използвайте алтернативни техники за почистване

Нисък пиков отговор (особено проби с ниска концентрация)

Адсорбция върху повърхността на филтъра

  1. Променете типа филтър

  2. Обработете всички проби при еднакви условия

  3. Използвайте алтернативни техники за почистване

Ниско възстановяване

Непълно извличане

  1. Увеличете времето за екстракция, използвайте горещ разтворител

  2. Регулирайте метода на почистване

Разширени пикове, скъсен живот на колоната

Намеса и замърсяване на пробата

Подобрете метода на почистване

Лоша прецизност

Непълно възстановяване

  1. Оптимизирайте или заменете дериватизация, разделяне, екстракция или други условия

  2. Използвайте автоматизирано управление, за да подобрите прецизността

Запитване