Изборът на правилния буфер за вашата HPLC мобилна фаза е от решаващо значение за постигането на оптимално разделяне и анализ на вашия проби. Буферите помагат да се поддържа стабилно рН, което е от съществено значение за контролиране на състоянието на йонизация на вашите аналити, като по този начин се отразява на тяхното време за задържане и пикова форма. По -долу е подробен преглед как да изберете най -добрия буфер за вашето HPLC приложение.

Знаете ли за подготовката на пробата на HPLC? Щракнете върху тази статия, за да научите повече: „Всичко, което трябва да знаете за подготовката на пробата на HPLC“

Значение на избора на буфер

Буферът е разтвор, чието рН не се променя след добавяне на малко количество киселина или основа. Въз основа на състава им буферите могат да бъдат класифицирани като кисели или основни. Ефективността на буфера се определя от неговия PKA, който в идеалния случай трябва да бъде в рамките на р от рН на желания PH на мобилната фаза за оптимален буфериращ капацитет.

Основни фактори, които трябва да се вземат предвид

1.Ph диапазон: pH на подвижната фаза трябва да бъде най -малко 2 pH единици от PKA на аналита. Това помага да се потисне йонизацията на киселинни или основни аналити, като се увеличи максимално тяхното задържане в колоната. Например, ако аналитът е слаба киселина с PKA 4,5, използвайки подвижна фаза с рН около 2.0, би го запазило в неионизирано състояние, засилвайки задържането.

2. Буфер Тип: Общите буфери, използвани в HPLC, включват:

Фосфатни буфери: Ефективни в диапазона на pH от 2,0 до 8,0, фосфатните буфери се използват широко поради тяхната стабилност и съвместимост с много аналити. Те са особено подходящи за LC-UV приложения.

Ацетатни буфери: Те също са популярни за LC-UV анализи и могат да се използват в подобни диапазони на рН като фосфатни буфери.

Летливи буфери: За LC-MS приложения се предпочитат летливи буфери като формат, ацетат и амониев бикарбонат, тъй като те могат лесно да бъдат отстранени по време на процеса на масспектрометрия.

3. Концентрация на буфер: Типичната начална концентрация за буфери в HPLC е между 25-50 mM. По -високите концентрации могат да подобрят пиковата форма и ефективността, но могат също да доведат до валежи, когато се смесват с органични разтворители. Препоръчително е да се поддържа концентрацията на буфера под 25 mm, за да се избегнат усложнения.

4. МИМИЧНА ЧИСТОТА: Винаги използвайте хроматографски буфери с висока чист, за да предотвратите замърсяване и да осигурите надеждни резултати. Примесите могат да доведат до неочаквани взаимодействия и променливост в времената на задържане.

Температурни ефекти: Температурата може да повлияе на pH на буферните разтвори. Важно е да се приготвят и съхраняват буфери при постоянна температура, за да се поддържа тяхната ефективност.

Искате да знаете 50 отговора за флаконите HPLC, моля, проверете тази статия: 50 най -често задавани въпроси относно флаконите HPLC

Практически съвети за подготовка на буфер

Метод на приготвяне: Буферите могат да се приготвят чрез смесване на еквимоларни количества от техните кисели и основни компоненти или чрез титруване на основен разтвор с киселина. Избягвайте да регулирате pH след добавяне на органични разтворители, тъй като това може да доведе до непоследователни резултати.

Свежи разтвори: Редовно приготвяйте пресни буферни разтвори, за да сведете до минимум растежа на микробите и разграждането на компонентите, което може да повлияе на хроматографските показатели.

Избягване на корозия: Някои буфери, като цитрат, могат да корозират компоненти от неръждаема стомана на HPLC системи. Осигурете задълбочено промиване на системата след използване на такива буфери, за да предотвратите повреда.

Заключение

Изборът на правилния буфер за вашата HPLC мобилна фаза е от решаващо значение за постигането на надеждни и възпроизводими резултати. Помислете за рН, буфер тип, концентрация и чистота при избора. Следвайки тези указания, можете да оптимизирате вашия HPLC метод за ефективно разделяне и анализиране на вашите проби.

Искате да знаете цената на флаконите HPLC, моля, проверете тази статия: Цена на флаконите с HPLC: 50 най -често задавани въпроси

Предишни:

Как правилно да използвате тръбите за изпитване на треска за тестване на качеството на водата?

Следваща:

Как да избегнем пробив на филтъра във филтри за спринцовка