HPLC Решения за подготовка на проби за най -добри резултати

Четири стъпки за подготовка на пробата HPLC

Стъпка 1. Анализ на водни разтвори

Стъпка 2. Подготовка на стандартите

Подготовката на стандарти за идентифициране и количествено определяне на съединението може да бъде досаден и отнемащ време процес. Точно претеглянето на твърдо вещество, така че да може да се използва предварително определен обем на разтворител, е трудно и отпадъците поради грешка могат да бъдат скъпи - особено при работа с фармацевтични продукти. Други фактори като температура допълнително усложняват стандартната подготовка. Температурните колебания променят плътността на разтворителя и допринасят за драматични разлики в концентрацията.



Използването на баланс, който дава възможност за точност на претегляне до няколко десетични знака и автоматизирането на процеса чрез свързване на баланса с дозатор за разтворител гарантира най -високата точност. Използването на софтуер като YAPP16 Дозиране Q-App позволява автоматични изчисления и гравиметрично наблюдение на измерените стойности. Документирането на температурата и плътността на разтворителя също осигурява високо точни концентрации, особено при получаване на стандарти в следващите дни. Директният трансфер на данни от приложението YAPP16 за претегляне към Thermo Scientific ™ ChromeLeon ™ 7.2 Хроматографска система за данни (CDS) е опция за обработка на данни без хартия с пълна цялост на данните.

Стъпка 3. Върнете се към основите с добро пипетиране

Значението на точната и прецизна пипетиране твърде често се пренебрегва и се приема за даденост. Нивото на умения и опит на потребителя може да има значителни последици за чувствителни анализи като HPLC. Изборът на правилната пипета може да намали човешката грешка и свързаните с тях разходи за пропилени разтворители.



Механичните пипети с заключване на силата на звука предлагат просто решение за предотвратяване на случайни промени в обема, докато по -сложните електронни пипети премахват променливостта на потребителите, за да доставят постоянно точни обеми. Съветът на пипетата също е важен детайл, който трябва да се вземе предвид за HPLC анализи. Най -добрите съвети за задържане са най -добри при работа с разтворители с различни вискозитети, тъй като те максимизират възстановяването на пробата. Замърсяването с пробата може да възникне и в резултат на извличане от върха на пипетата. Като такива, съветите с висока химическа резистентност запазват целостта на пробата.

Стъпка 4. Филтър за точност и дълголетие

Полагането на допълнителни грижи за филтриране на проби преди анализа подобрява надеждността и може да удължи живота на колоната HPLC чрез предотвратяване на ефектите за запушване. Филтрите за спринцовка са прост, бърз разтвор за филтриране на проби преди колоната хроматография. Както при върховете на пипетата, разтворителите, използвани в HPLC, налагат специфични филтри за предотвратяване на извличане и замърсяване на пробата.

Целулозните мембрани са устойчиви на диметил сулфоксид (DMSO), амиди, кетони, естер и етер. За особено суровите разтворители мембраните без покритие (PTFO) предотвратяват извличането и замърсяването на пробата. Филтрацията на пробата става много отнемаща време, когато броят на извадката се увеличи. Мултипробните филтриращи единици, като например филтрационната система Claristep®, могат да обработват проби без спринцовки и подготовка за бързо пробиване, без да жертват качеството.

Пет проблема, които трябва да обърнете внимание на！

1. Кои са най -големите проблеми с подготовката на пробата, пред които са изправени лабораториите?

Лабораториите са под все по -голям натиск по отношение на времето и разходите, често се занимават не само с голям брой проби, но и с проби с различни натури. Подготовката на пробата е област, в която фините разлики между типовете проби или методите за подготовка на пробата и използваните материали могат да повлияят на получените резултати. Осигуряването на съвместимост между материалите във филтрационното устройство и разтворителя може да сведе до минимум проблемите; Например, нивата на екстрактируеми съединения, които могат да пречат на откриването на аналити.

2. Какво се случва, когато подготовката на пробата се обърка?

Преди аналитичните приложения с високоефективна течна хроматография (HPLC), пробите се получават по различни методи, всички от които имат потенциал да повлияят на аналитичните резултати, като засягат пробата, инжектирана в системата. Неефективната подготовка на пробата може да доведе до намаляване на живота на колоните, повишени изисквания за обслужване на компоненти, потенциален престой на инструментариума, намаляване на ефективността и възпроизводимостта на хроматографското разделяне и много други проблеми.

3. На пръв поглед филтрацията изглежда като прост процес ...

Въпреки че филтрацията е привидно малка част от голям работен процес, въздействието на избора на правилния филтър за дадено приложение може да бъде значително. Например, методите, които не премахват достатъчно частици, могат да доведат до блокиране на колони. Неподходящият избор на устройства за подготовка на проби при определени обстоятелства може да освободи екстрактируеми съединения в пробата, да свърже аналитите от интерес или да въведе грешки чрез загуба на проба - всички влияещи на качеството и възпроизводимостта на наблюдаваните резултати. Ако сте уверени, че вашите филтриращи консумативи не допринасят за грешки, които изискват преработка или разследвания на коренните причини, ще спестите пари и ще си дадете спокойствие.

4. Кои са най -често срещаните приготвяния „проваля“?

Изборът на неправилна филтърна мембрана е един проблем, който виждаме много. Проблемите могат да се появят като външни пикове от екстракти, които могат да пречат на откриването на интересните аналити. Несъвместимостта на филтърните среди с проба или разтворител по отношение на химическата резистентност не се ограничава единствено до ефектите на разтваряне върху филтърната среда. Разтворителите могат да причинят леко подуване на материалите на полимерната мембрана, когато не са напълно съвместими, което от своя страна може да повлияе на работата на филтрацията, което води до неефективно почистване на пробите. Един от начините за справяне с този проблем е чрез избор на мембрана, която е широко съвместима както с водни, така и с органични разтворители. За типична подготовка на пробата HPLC, спринцовката и безпричинните филтри, съдържащи регенерирани целулозни мембрани, са добър вариант поради тяхната широка съвместимост на разтворителя.

Използването на филтърно устройство, което е по -голямо, отколкото е необходимо за подготвения обем, е друга често срещана клопка. Използването на твърде големи филтърни устройства означава, че малките количества от пробата ще останат във филтъра, дори след като се вземат предпазни мерки, за да се изгонят колкото е възможно повече.

5. Какви са предимствата на сериозно предприемането на стъпката на филтриране?

Основна цел на повечето лаборатории, ангажирани с аналитични тестове, е да се разработят последователни процеси, които са в основата на последователните резултати - и които изискват последователно филтриране. Изборът на филтрационно устройство с правилния размер на порите и характеристиките на задържане помага да се осигури ефективно премахване на частици, докато изборът на подходящ размер и дизайн на филтърната единица може да помогне за минимизиране на загубата на проба. Добрата филтрация също помага за защита на колоната и потенциално разширява живота на инжектора и колоната.

Заключение

HPLC е ценна техника за науката за живота и биофармацевтичните изследвания, тъй като дава точни, възпроизводими резултати. Тази точност зависи от целостта на пробата HPLC и най-добрият начин да се осигурят висококачествени проби е да започнете с най-добрите инструменти. С разтвори за ултравидна вода, стандартна подготовка, пипети, съвети и филтри, линията за подготовка на пробата HPLC отчита всеки детайл. Автоматизираните решения и софтуер също помагат за оптимизиране на подготовката на пробите за доставяне на чисти проби за чисти резултати.

Още дискусии за решения за подготовка на HPLC са добре дошли!