Algunes mostres encara no es poden injectar directament després del pretractament. La derivatització és necessària per fer que els compostos sense absorció UV o fluorescència siguin detectables per detectors d'UV o fluorescència.

Millora la sensibilitat
Millora la separació (canvi de qualitat)

Els possibles problemes inclouen la pèrdua de mostres, la contaminació, les reaccions incompletes o diversos subproductes, que poden afectar la precisió o introduir errors.

Filtració de mostres

Les mostres de LC han de ser uniformes i lliures de partícules; les partícules poden danyar l'injector o bloquejar la columna. Els passos inclouen:

Agiteu la mostra abans de la injecció i comproveu si hi ha partícules, terbolesa o emulsions
Si s'observen partícules, filtreu la mostra amb una membrana que pugui retenir partícules ≥0,15 μm

Problemes potencials: contaminació de la mostra, concentració de components que redueixen l'adsorció i evaporació del dissolvent que causa errors.

Mètodes d'extracció

L'extracció separa els analits dels codisolvents o elimina les substàncies interferents (per exemple, les proteïnes). Els dissolvents orgànics han de ser de baixa toxicitat, volàtils, baixos en impureses i dissoldre bé la mostra.

Dissolvents habituals: èter dietílic, acetat d'etil, diclorometà, cloroform, benzè o mescles.

Després de l'extracció, les mostres es poden injectar directament o concentrar-se per augmentar la concentració i la sensibilitat de l'analit.

Extracció de mostres solubles en aigua

Components àcids i sals: extreu les impureses amb dissolvent orgànic, ajusteu-les a l'àcid, després extreu-les o injecteu-les; o assecar sota N₂ i dissoldre en dissolvent adequat abans de la injecció.
Components bàsics i sals: extreure les impureses amb dissolvent orgànic, ajustar al bàsic, després extreure o injectar; o assecar sota N₂ i dissoldre en dissolvent adequat abans de la injecció.
Components neutres: extreu les impureses amb dissolvent orgànic i analitzeu-les directament per cromatografia en fase inversa.

Extracció de mostres solubles en greixos

Extraure amb dissolvent orgànic o injectar directament; o assecar sota N₂ i dissoldre en dissolvent adequat abans de la injecció.

Fonts de contaminació

Fonts potencials de contaminació en l'anàlisi:

Tipus de contaminació	Font	Mesures de prevenció
Ambiental	Gasos nocius, pols, aerosols	Mantenir la sala d'instruments aïllada, neta; instal·lar AC; controlar la humitat <70%; prevenir la humitat, la corrosió, la vibració
Contenidors	Vidre, ceràmica, quars, material de laboratori de plàstic	Seleccioneu els contenidors adequats per tipus de mostra; netejar a fons
Reactius	Reactius no de grau cromagràfic	Utilitzeu reactius de grau cromatografia, d'alta puresa o de grau analític

Preparació de la solució estàndard

Prepareu primer la solució estàndard interna; Utilitzeu el mateix lot en estàndards i mostres per reduir els errors
Les substàncies han de ser de grau cromatografia i estables
Emmagatzemeu les solucions estàndard en ampolles marrons a baixa temperatura
Per a les vitamines, utilitzeu matràs aforats marrons o protegiu de la llum

Problemes comuns en el pretractament i solucions de mostres

Problema	Causa	Solució
Pics no relacionats en el cromatograma	Contaminació del filtre	Remullar el filtre en dissolvent de mostra i prova d'injecció Canvia el tipus de filtre Utilitzeu tècniques de neteja alternatives
Resposta pic baixa (especialment mostres de baixa concentració)	Adsorció a la superfície del filtre	Canvia el tipus de filtre Processar totes les mostres en les mateixes condicions Utilitzeu tècniques de neteja alternatives
Recuperació baixa	Extracció incompleta	Augmentar el temps d'extracció, utilitzar dissolvent calent Ajusteu el mètode de neteja
Cims ampliats, vida útil de la columna escurçada	Interferència de la mostra i contaminació	Millorar el mètode de neteja
Poca precisió	Recuperació incompleta	Optimitzar o substituir la derivatització, la separació, l'extracció o altres condicions Utilitzeu la manipulació automatitzada per millorar la precisió

Efectes de l'exposició a la llum i la temperatura extremadament alta\/baixa sobre l'estabilitat de la mostra: teoria i metodologia

Següent:

Tornar a la llista