Pretrattamentu di Campioni HPLC - Guida Passu à Passu

Panoramica di pretrattamentu di mostra

U pretrattamentu di mostra include tutte e operazioni prima di l'iniezione. In più di pisà, dissolve è diluzione, implica ancu i seguenti passi:

• A filtrazione
• Estrazione
• Derivatizazione (derivazione pre-colonna)
• Cromatografia liquida (cromatografia di colonna à bassa pressione)

U pretrattamentu pò esse realizatu manualmente o automatizatu. Sò familiarizatu cù u pretrattamentu di mostra?

Derivatizazione

Certi campioni ùn ponu ancu esse direttamente injected dopu u pretrattamentu. A derivatizazione hè necessaria per fà cumposti senza assorbimentu UV o fluorescenza detectable da UV o detectors di fluorescenza.

• Migliora a sensibilità
• Aumenta a separazione (cambiamentu di qualità)

I prublemi pussibuli includenu a perdita di mostra, a contaminazione, reazzioni incomplete, o parechji sottoprodotti, chì ponu influenzà l'accuratezza o intruduce errori.

Filtrazione di mostra

I campioni LC devenu esse uniformi è senza particelle; particeddi ponu dannà l'iniettore o bluccà a colonna. I passi includenu:

• Agite a mostra prima di l'iniezione è verificate per particelle, turbidità o emulsioni
• Se si osservanu particelle, filtrà a mostra cù una membrana chì pò ritene particelle ≥0.15μm

Problemi potenziali: contaminazione di campioni, adsorzione chì riduce a cuncentrazione di cumpunenti, è evaporazione di solventi chì causanu errori.

I metudi di estrazione

L'estrazione separa l'analiti da i co-solventi o elimina i sustanzi interferenti (per esempiu, proteine). I solventi organici duveranu esse di bassa toxicità, volatile, pocu in impurità, è dissolve bè a mostra.

Solventi cumuni: etere dietile, acetato di etile, diclorometano, cloroformu, benzene, o mischi.

Dopu l'estrazione, i campioni ponu esse injected direttamente o cuncentrati per aumentà a cuncentrazione di l'analite è a sensibilità.

Estrazione di campioni solubili in acqua

1. Cumpunenti acidi è sali: estratti impurità cù solventi organici, aghjustate à l'acidu, poi estratti o inject; o secca sottu N₂ è dissolve in un solvente adattatu prima di l'iniezione.
2. Cumpunenti basi è sali: estratti impurità cù solventi organici, aghjustate à basi, poi estratti o inject; o secca sottu N₂ è dissolve in un solvente adattatu prima di l'iniezione.
3. Cumpunenti neutrali: estratti impurità cù solventi organici, poi analizà direttamente per cromatografia in fase inversa.

Estrazione di campioni solubili in grassu

Estratte cù solvente urgànicu o inject direttamente; o secca sottu N₂ è dissolve in un solvente adattatu prima di l'iniezione.

Fonti di cuntaminazione

Fonti potenziali di contaminazione in analisi:

Preparazione di suluzione standard

• Preparate a suluzione standard interna prima; aduprà u listessu batch in standard è campioni per riduce l'errori
• Sustanze deve esse di qualità cromatografia è stabile
• Stoccate suluzioni standard in buttigli marroni à bassa temperatura
• Per vitamini, aduprate fiaschi volumetrichi marroni o prutegge da a luce

Prublemi cumuni in Sample Pretreatment è Soluzioni