Některé vzorky stále nelze po předúpravě přímo injektovat. Derivatizace je nutná k výrobě sloučenin bez UV absorpce nebo fluorescence detekovatelné UV nebo fluorescenčními detektory.

Zlepšuje citlivost
Zlepšuje separaci (změna kvality)

Mezi možné problémy patří ztráta vzorku, kontaminace, neúplné reakce nebo více vedlejších produktů, které mohou ovlivnit přesnost nebo způsobit chyby.

Filtrace vzorku

LC vzorky musí být jednotné a bez částic; částice mohou poškodit injektor nebo zablokovat kolonu. Mezi kroky patří:

Před nástřikem vzorek protřepejte a zkontrolujte, zda neobsahuje částice, zákal nebo emulze
Pokud jsou pozorovány částice, přefiltrujte vzorek pomocí membrány, která dokáže zadržet částice ≥0,15μm

Možné problémy: kontaminace vzorku, adsorpce snižující koncentraci složek a odpařování rozpouštědla způsobující chyby.

Extrakční metody

Extrakce odděluje analyty od ko-rozpouštědel nebo odstraňuje interferující látky (např. proteiny). Organická rozpouštědla by měla být málo toxická, těkavá, s nízkým obsahem nečistot a měla by dobře rozpouštět vzorek.

Běžná rozpouštědla: diethylether, ethylacetát, dichlormethan, chloroform, benzen nebo směsi.

Po extrakci mohou být vzorky injikovány přímo nebo koncentrovány pro zvýšení koncentrace analytu a citlivosti.

Extrakce vzorků rozpustných ve vodě

Kyselé složky a soli: extrahujte nečistoty organickým rozpouštědlem, upravte na kyselé a poté extrahujte nebo injektujte; nebo se suší pod N2 a před injekcí se rozpustí ve vhodném rozpouštědle.
Základní složky a soli: extrahujte nečistoty organickým rozpouštědlem, upravte na zásadité, poté extrahujte nebo injektujte; nebo se suší pod N2 a před injekcí se rozpustí ve vhodném rozpouštědle.
Neutrální složky: extrahujte nečistoty organickým rozpouštědlem, poté analyzujte přímo chromatografií na reverzní fázi.

Extrakce vzorků rozpustných v tucích

Extrahujte organickým rozpouštědlem nebo injektujte přímo; nebo se suší pod N2 a před injekcí se rozpustí ve vhodném rozpouštědle.

Zdroje kontaminace

Možné zdroje kontaminace v analýze:

Typ znečištění	Zdroj	Preventivní opatření
Environmentální	Škodlivé plyny, prach, aerosoly	Udržujte přístrojovou místnost izolovanou, čistou; nainstalovat AC; kontrola vlhkosti <70 %; zabraňuje vlhkosti, korozi, vibracím
Kontejnery	Skleněné, keramické, křemenné, plastové laboratorní nádobí	Vyberte vhodné nádoby pro každý typ vzorku; důkladně vyčistit
Reagencie	Činidla jiné než chromatografické kvality	Používejte činidla chromatografické, vysoce čisté nebo analytické kvality

Příprava standardního roztoku

Nejprve připravte roztok vnitřního standardu; použijte stejnou dávku v normách a vzorcích, abyste snížili chyby
Látky musí být chromatografické a stabilní
Standardní roztoky skladujte v hnědých lahvičkách při nízké teplotě
Na vitamíny použijte hnědé odměrné baňky nebo chraňte před světlem

Běžné problémy při předúpravě vzorků a jejich řešení

Problém	Příčina	Řešení
Nesouvisející píky v chromatogramu	Znečištění filtru	Namočte filtr do rozpouštědla vzorku a zkušební nástřik Změňte typ filtru Používejte alternativní techniky čištění
Nízká špičková odezva (zejména vzorky s nízkou koncentrací)	Adsorpce na povrchu filtru	Změňte typ filtru Všechny vzorky zpracujte za stejných podmínek Používejte alternativní techniky čištění
Nízká výtěžnost	Neúplná extrakce	Prodlužte dobu extrakce, použijte horké rozpouštědlo Upravte způsob čištění
Rozšířené píky, zkrácená životnost kolony	Rušení a kontaminace vzorku	Zlepšit způsob čištění
Špatná přesnost	Neúplné zotavení	Optimalizujte nebo nahraďte derivatizaci, separaci, extrakci nebo jiné podmínky Pro zvýšení přesnosti použijte automatizovanou manipulaci

Předchozí:

Extrémně vysoké\/Vlivy nízké teploty a vystavení světlu na stabilitu vzorku: Teorie a metodolog

další:

Zpět na seznam