Výběr správné vyrovnávací paměti pro mobilní fázi HPLC je rozhodující pro dosažení optimálního separace a analýzy vašeho vzorky. Pufry pomáhají udržovat stabilní pH, které je nezbytné pro kontrolu ionizačního stavu vašich analytů, což ovlivňuje jejich retenční dobu a tvar píku. Níže je podrobný přehled o tom, jak vybrat nejlepší vyrovnávací paměť pro vaši aplikaci HPLC.

Víte o přípravě vzorku HPLC? Kliknutím na tento článek se dozvíte více: „Všechno, co potřebujete vědět o přípravě vzorku HPLC“

Důležitost výběru vyrovnávací paměti

Pufr je roztok, jehož pH se po přidání malého množství kyseliny nebo báze nemění. Na základě jejich složení lze pufry klasifikovat jako kyselé nebo základní. Účinnost pufru je určena jeho PKA, která by v ideálním případě měla být v rámci ± 1 pH jednotky požadované mobilní fázové pH pro optimální vyrovnávací kapacitu.

Klíčové faktory, které je třeba zvážit

1.ph rozmezí: pH mobilní fáze by mělo být nejméně 2 jednotky pH od PKA analytu. To pomáhá potlačit ionizaci kyselých nebo základních analytů, maximalizuje jejich retenci ve sloupci. Například, pokud je analyt slabou kyselinou s PKA 4,5, použití mobilní fáze s pH kolem 2,0 by ji udržovalo v neionizovaném stavu a zvýšilo by se udržení.

2.Buffer Typ: Běžné vyrovnávací paměti používané v HPLC zahrnují:

Fosfátové pufry: Efektivní v rozmezí pH 2,0 až 8,0 se fosfátové pufry široce používají kvůli jejich stabilitě a kompatibilitě s mnoha analyty. Jsou zvláště vhodné pro aplikace LC-UV.

Acetátové pufry: Jsou také oblíbené pro testy LC-UV a lze je použít v podobných rozsazích pH jako fosfátové pufry.

Volatilní pufry: U aplikací LC-MS jsou preferovány těkavé pufry, jako je formát, acetát a hydrogenuhličitan amonný, protože je lze snadno odstranit během procesu hmotnostní spektrometrie.

3.Buffer koncentrace: Typická počáteční koncentrace pro pufry v HPLC je mezi 25-50 mm. Vyšší koncentrace mohou zlepšit tvar a účinnost píku, ale mohou také vést k srážení, když jsou smíchány s organickými rozpouštědly. Je vhodné udržovat koncentraci vyrovnávací paměti pod 25 mm, aby se zabránilo komplikacím.

4. Chemická čistota: Vždy používejte vysoce čisté chromatografické pufry, abyste zabránili kontaminaci a zajistili spolehlivé výsledky. Nečistoty mohou vést k neočekávaným interakcím a variabilitě v době retenční.

Teplotní účinky: Teplota může ovlivnit pH roztoků pufru. Je důležité připravit a ukládat vyrovnávací paměti při konzistentní teplotě, aby se udržela jejich účinnost.

Chcete vědět 50 odpovědí na lahvičky HPLC, zkontrolujte tento článek: 50 nejčastěji kladených otázek na lahvičky HPLC

Praktické tipy pro přípravu vyrovnávací paměti

Metoda přípravy: pufry mohou být připraveny smícháním ekvimolárních množství jejich kyselých a základních složek nebo titrací základního roztoku s kyselinou. Vyvarujte se nastavení pH po přidání organických rozpouštědel, protože to může vést k nekonzistentním výsledkům.

Čerstvá řešení: Pravidelně připravujte čerstvé roztoky pufru, abyste minimalizovali mikrobiální růst a degradaci složek, které mohou ovlivnit chromatografický výkon.

Vyhýbání se korozi: Některé pufry, jako je citrát, mohou korodovat komponenty nerezové oceli systémů HPLC. Po použití takových vyrovnávacích pamětí zajistěte důkladné propláchnutí systému, abyste zabránili poškození.

Závěr

Výběr správné vyrovnávací paměti pro mobilní fázi HPLC je rozhodující pro dosažení spolehlivých a reprodukovatelných výsledků. Při výběru zvažte pH, typ pufru, koncentraci a čistotu. Dodržováním těchto pokynů můžete optimalizovat metodu HPLC pro efektivní oddělení a analýzu vzorků.

Chcete znát cenu lahviček HPLC, zkontrolujte prosím tento článek: HPLC Vials Cena: 50 nejčastěji kladených otázek

Předchozí:

Jak správně používat testovací trubice COD pro testování kvality vody?

Další:

Jak se vyhnout průlomu filtru ve filtrech stříkaček