Vysoce výkonná kapalinová chromatografie (HPLC) a kapalinová chromatografie-hmotnost spektrometrie (LCMS) jsou dvě výkonné analytické techniky, které se používají v různých oborech, včetně léčiv, environmentálních věd a životních věd. Zatímco obě metody zahrnují oddělení a analýzu sloučenin, jejich principy, funkce a aplikace jsou velmi odlišné. Tento blogový příspěvek porovná HPLC a LCMS se zaměřením na jejich klíčové rozdíly a výhody každé techniky.

Princip provozu

HPLC

HPLC je chromatografická technika, která odděluje sloučeniny založené na jejich interakcích se stacionárními a mobilními fázemi. V HPLC je kapalná mobilní fáze čerpána sloupcem naplněnou stacionární fází, která se obvykle skládá z malých částic oxidu křemičitého nebo polymeru. Když je do systému zavedena směs vzorku, komponenty jsou odděleny na základě jejich afinity ke stacionární fázi. Sloučeniny, které silněji interagují se stacionární fází, elují pomaleji, zatímco sloučeniny, které interagují méně silně elují rychleji. Oddělené sloučeniny jsou poté detekovány pomocí různých detektorů, jako jsou UV-vis, fluorescence nebo detektory indexu lomu.

Chcete se dozvědět více o aplikacích chromatografických lahviček, zkontrolujte tento článek:15 aplikací chromatografických lahviček v různých polích

LCMS

LCMS kombinuje separační schopnosti HPLC s schopnostmi hmotnostní analýzy hmotnostní spektrometrie. V LCM jsou vzorky nejprve odděleny pomocí HPLC, stejně jako v konvenčních HPLC. Namísto detekování konvenčním detektorem jsou však eluované sloučeniny zavedeny do hmotnostního spektrometru. Hmotnostní spektrometr ionizuje sloučeniny a měří jejich poměr jejich hmotnosti k náboji a poskytuje podrobné informace o molekulové hmotnosti a struktuře analytu. Tato kombinace separace a hmotnostní spektrometrie poskytuje větší citlivost a specificitu než samotný HPLC.

Separační mechanismus

HPLC:HPLC používá vysoký tlak k prosazení kapalné mobilní fáze skrz zabalený sloupec obsahující stacionární fázi. Sloučeniny jsou odděleny na základě jejich diferenciálních interakcí se stacionární fází, což vede k přesným a účinným separacím.

LCMS:LCMS kombinuje schopnosti fyzické separace HPLC s schopnostmi hmotnostní spektrometrie hmotnostní spektrometrie (MS). Kapalná chromatografická složka odděluje sloučeniny, zatímco hmotnostní spektrometr měří poměr hmotnosti k nabití ionizovaného druhu.

Citlivost a selektivita

HPLC:HPLC má dobrou citlivost a selektivitu, zejména v kombinaci s pokročilými detektory, jako jsou UV-vis, fluorescence nebo detektory diodového pole. Samotná HPLC však nemusí poskytnout přiměřenou specificitu pro komplexní vzorky.

LCMS:LCMS má vynikající citlivost a selektivitu ve srovnání s HPLC. Hmotnostní spektrometry mohou přesně identifikovat a kvantifikovat sloučeniny na základě jejich jedinečných poměrů hmotnosti k náboji, a to i ve složitých matricích. Díky tomu je LCM obzvláště užitečnými pro analýzu stopových sloučenin a potvrzení identity neznámých látek.

Příprava vzorku

HPLC:Příprava vzorku na HPLC obvykle zahrnuje ředění, filtraci nebo jednoduché extrakční techniky. Vzorky nemusí být odpařeny, takže HPLC je vhodný pro širokou škálu sloučenin, včetně polárních a netěkavých látek.

LCMS:Příprava vzorku na LCMS je podobná přípravě pro HPLC, ale pro zajištění kompatibility s hmotnostním spektrometrem mohou být vyžadovány další kroky. Například pro zvýšení ionizace a zabránění potlačení iontů mohou být vyžadovány těkavé pufry nebo přísady.

Aplikace

HPLC:HPLC se široce používá pro analýzu léčiv, potravin a environmentálních vzorků. Je zvláště účinný pro oddělení a kvantifikaci sloučenin ve složitých směsích, jako jsou nečistoty léčiva, potravinářské přísady a zbytky pesticidů.

LCMS:LCMS má širokou škálu aplikací, včetně:

Farmaceutická analýza: Používá se při objevování, vývoji a kontrole kvality.

Proteomika a metabolomika: Používá se k identifikaci a kvantifikaci proteinů a metabolitů v biologických vzorcích.

Environmentální analýza: Používá se k detekci stopových kontaminantů ve vzorcích vody, půdy a vzduchu.

Zajímá vás role certifikovaných lahviček HPLC při zajišťování přesné analýzy vzorků? Přečtěte si tento článek: Důležitost certifikovaných lahviček HPLC pro přesnou analýzu vzorků

Závěr

HPLC a LCM jsou silné analytické techniky s vlastními silnými stránkami a omezeními. Volba mezi nimi závisí na specifických požadavcích analýzy, jako je citlivost, selektivita, složitost vzorku a dostupné zdroje.

HPLC je dobrou volbou pro rutinní analýzu známých sloučenin v relativně jednoduchých maticích, kde náklady a snadnost použití jsou důležitými faktory. LCMS, na druhé straně, je preferovanou technikou pro analýzu komplexních vzorků, identifikaci neznámých sloučenin a dosažení detekce úrovně ultra stopy.

Jak technologie neustále postupuje, integrace HPLC a LCMS bude hrát stále důležitější roli při plnění vyvíjejících se potřeb analytické chemie a zajištění vysoce kvalitních výsledků napříč různými aplikacemi.

Předchozí:

Konečný průvodce filtry stříkačky 0,45 mikronů pro vás

Další:

Vše, co potřebujete vědět o přípravě vzorku hlavy GC