Omfattende vejledning til HPLC prøveforbehandling – filtrering, ekstraktion og derivatisering
Nyheder
Hjem > Faq
kategorier
FORESPØRGSEL

HPLC prøveforbehandling – trin-for-trin guide

21. oktober 2025
TAGS:

Oversigt over prøveforbehandling

Prøveforbehandling omfatter alle operationer før injektion. Udover vejning, opløsning og fortynding involverer det også følgende trin:

  • Filtrering
  • Udvinding
  • Derivatisering (præ-kolonne derivatisering)
  • Væskekromatografi (lavtrykssøjlekromatografi)

Forbehandling kan udføres manuelt eller automatiseret. Er du bekendt med prøveforbehandling?


Derivatisering

Nogle prøver kan stadig ikke injiceres direkte efter forbehandling. Derivatisering er påkrævet for at gøre forbindelser uden UV-absorption eller fluorescens detekterbare af UV- eller fluorescensdetektorer.

  • Forbedrer følsomheden
  • Forbedrer adskillelse (kvalitetsændring)

Mulige problemer omfatter prøvetab, kontaminering, ufuldstændige reaktioner eller flere biprodukter, som kan påvirke nøjagtigheden eller indføre fejl.

Prøvefiltrering

LC-prøver skal være ensartede og partikelfrie; partikler kan beskadige injektoren eller blokere søjlen. Trin omfatter:

  • Ryst prøven før injektion og kontroller for partikler, uklarhed eller emulsioner
  • Hvis der observeres partikler, filtreres prøven ved hjælp af en membran, der kan tilbageholde ≥0,15μm partikler

Potentielle problemer: prøvekontamination, adsorptionsreducerende komponentkoncentration og opløsningsmiddelfordampning, der forårsager fejl.

Ekstraktionsmetoder

Ekstraktion adskiller analytter fra co-opløsningsmidler eller fjerner forstyrrende stoffer (f.eks. proteiner). Organiske opløsningsmidler skal have lav toksicitet, flygtige, lave urenheder og opløse prøven godt.

Almindelige opløsningsmidler: diethylether, ethylacetat, dichlormethan, chloroform, benzen eller blandinger.

Efter ekstraktion kan prøver injiceres direkte eller koncentreres for at øge analytkoncentrationen og følsomheden.

Vandopløselig prøveekstraktion

  1. Sure komponenter og salte: ekstraher urenheder med organisk opløsningsmiddel, juster til sur, ekstraher eller injicer derefter; eller tør under N2 og opløs i passende opløsningsmiddel før injektion.
  2. Basiskomponenter og salte: ekstraher urenheder med organisk opløsningsmiddel, juster til basisk, ekstraher eller injicer derefter; eller tør under N2 og opløs i passende opløsningsmiddel før injektion.
  3. Neutrale komponenter: ekstraher urenheder med organisk opløsningsmiddel, analyser derefter direkte ved omvendt fase-kromatografi.


Fedtopløselig prøveekstraktion

Ekstraher med organisk opløsningsmiddel eller injicer direkte; eller tør under N2 og opløs i passende opløsningsmiddel før injektion.


Forureningskilder

Potentielle kilder til forurening i analyse:

Forureningstype

Kilde

Forebyggende foranstaltninger

Miljømæssige

Skadelige gasser, støv, aerosoler

Hold instrumentrummet isoleret, rent; installere AC; kontrol fugtighed <70%; forhindre fugt, korrosion, vibrationer

Containere

Glas, keramik, kvarts, plastik labware

Vælg passende beholdere pr. prøvetype; rengøres grundigt

Reagenser

Ikke-kromatografiske reagenser

Brug reagenser af kromatografikvalitet, høj renhed eller analytisk kvalitet


Forberedelse af standardløsning

  • Forbered først intern standardopløsning; brug samme batch i standarder og prøver for at reducere fejl
  • Stoffer skal være kromatografiske og stabile
  • Opbevar standardopløsninger i brune flasker ved lav temperatur
  • Til vitaminer, brug brune målekolber eller beskyt mod lys


Almindelige problemer i prøveforbehandling og -løsninger

Problem

Årsag

Løsning

Ikke-relaterede toppe i kromatogram

Filterforurening

  1. Sæt filteret i blød i prøveopløsningsmiddel og testinjektion

  2. Skift filtertype

  3. Brug alternative rengøringsteknikker

Lav spidsrespons (især prøver med lav koncentration)

Adsorption på filteroverfladen

  1. Skift filtertype

  2. Behandl alle prøver under samme betingelser

  3. Brug alternative rengøringsteknikker

Lav restitution

Ufuldstændig ekstraktion

  1. Øg ekstraktionstiden, brug varmt opløsningsmiddel

  2. Juster rengøringsmetoden

Udvidede toppe, forkortet kolonnelevetid

Prøveinterferens og kontaminering

Forbedre rengøringsmetoden

Dårlig præcision

Ufuldstændig genopretning

  1. Optimer eller erstat derivatisering, separation, ekstraktion eller andre forhold

  2. Brug automatiseret håndtering for at forbedre præcisionen

Forespørgsel