High-performance væskekromatografi (HPLC) og væskekromatografimassespektrometri (LCMS) er to kraftfulde analytiske teknikker, der bruges inden for forskellige felter, herunder farmaceutiske stoffer, miljøvidenskab og livsvidenskab. Mens begge metoder involverer adskillelse og analyse af forbindelser, er deres principper, funktioner og applikationer meget forskellige. Dette blogindlæg vil sammenligne HPLC og LCMS med fokus på deres vigtigste forskelle og fordelene ved hver teknik.

Princip om drift

HPLC

HPLC er en kromatografisk teknik, der adskiller forbindelser baseret på deres interaktion med de stationære og mobile faser. I HPLC pumpes en flydende mobilfase gennem en søjle fyldt med en stationær fase, som normalt er sammensat af små partikler af silica eller polymerer. Når en prøveblanding introduceres i systemet, adskilles komponenterne baseret på deres tilknytning til den stationære fase. Forbindelser, der interagerer stærkere med den stationære fase, elueres langsommere, mens forbindelser, der interagerer mindre stærkt, elueres hurtigere. De adskilte forbindelser detekteres derefter ved hjælp af en række detektorer, såsom UV-VIS, fluorescens eller brydningsindeksdetektorer.

Vil du vide mere om anvendelsen af kromatografihætteglas. Kontroller denne artikel:15 Anvendelser af kromatografihætteglas på forskellige felter

LCMS

LCMS kombinerer separationsfunktionerne for HPLC med masseanalysekapaciteterne for massespektrometri. I LCM'er adskilles prøver først ved hjælp af HPLC, ligesom i konventionel HPLC. I stedet for at blive detekteret af en konventionel detektor indføres de eluerede forbindelser imidlertid i et massespektrometer. Massespektrometeret ioniserer forbindelserne og måler deres masse-til-ladningsforhold, hvilket giver detaljerede oplysninger om molekylvægten og strukturen af analytten. Denne kombination af adskillelse og massespektrometri tilvejebringer større følsomhed og specificitet end HPLC alene.

Adskillelsesmekanisme

HPLC:HPLC bruger højt tryk til at skubbe en flydende mobil fase gennem en pakket søjle indeholdende en stationær fase. Forbindelser adskilles baseret på deres differentielle interaktioner med den stationære fase, hvilket resulterer i præcise og effektive adskillelser.

LCMS:LCMS kombinerer HPLC's fysiske adskillelsesfunktioner med massespektrometri -kapaciteterne for massespektrometri (MS). Væskekromatografikomponenten adskiller forbindelserne, mens massespektrometeret måler masse-til-ladningsforholdet for de ioniserede arter.

Følsomhed og selektivitet

HPLC:HPLC har god følsomhed og selektivitet, især når de kombineres med avancerede detektorer, såsom UV-VIS, fluorescens eller diodarray-detektorer. Imidlertid giver HPLC alene muligvis ikke tilstrækkelig specificitet for komplekse prøver.

LCMS:LCMS har overlegen følsomhed og selektivitet sammenlignet med HPLC. Massespektrometre kan nøjagtigt identificere og kvantificere forbindelser baseret på deres unikke masse-til-ladningsforhold, selv i komplekse matrixer. Dette gør LCM'er særlig nyttige til analyse af sporforbindelser og bekræftelse af identiteten af ukendte stoffer.

Prøveforberedelse

HPLC:Prøveforberedelse til HPLC involverer typisk fortynding, filtrering eller enkle ekstraktionsteknikker. Prøver behøver ikke fordampes, så HPLC er velegnet til en lang række forbindelser, herunder polære og ikke -flygtige stoffer.

LCMS:Prøveforberedelse til LCM'er svarer til det for HPLC, men der kan være behov for yderligere trin for at sikre kompatibilitet med massespektrometeret. For eksempel kan flygtige buffere eller tilsætningsstoffer være påkrævet for at forbedre ionisering og forhindre ionundertrykkelse.

Applikationer

HPLC:HPLC er vidt brugt til analyse af lægemidler, fødevarer og miljøprøver. Det er især effektivt til at adskille og kvantificere forbindelser i komplekse blandinger, såsom medikamentforurening, fødevaretilsætningsstoffer og pesticidrester.

LCMS:LCMS har en bred vifte af applikationer, herunder:

Farmaceutisk analyse: Brugt i lægemiddelopdagelse, udvikling og kvalitetskontrol.

Proteomik og metabolomik: bruges til at identificere og kvantificere proteiner og metabolitter i biologiske prøver.

Miljøanalyse: Bruges til at detektere sporforurenende stoffer i vand, jord og luftprøver.

Er du nysgerrig efter rollen som certificerede HPLC -hætteglas for at sikre nøjagtig prøveanalyse? Læs denne artikel: Betydningen af certificerede HPLC -hætteglas til nøjagtig prøveanalyse

Konklusion

HPLC og LCMS er begge kraftfulde analytiske teknikker med deres egne styrker og begrænsninger. Valget mellem de to afhænger af de specifikke krav i analysen, såsom følsomhed, selektivitet, prøvekompleksitet og tilgængelige ressourcer.

HPLC er et godt valg til rutinemæssig analyse af kendte forbindelser i relativt enkle matrixer, hvor omkostninger og brugervenlighed er vigtige faktorer. LCMS er på den anden side den foretrukne teknik til analyse af komplekse prøver, identificering af ukendte forbindelser og opnåelse af detektion af ultra-sporniveau.

Efterhånden som teknologien fortsætter med at gå videre, vil integrationen af HPLC og LCMS spille en stadig vigtigere rolle i at imødekomme de udviklende behov for analytisk kemi og sikre resultater af høj kvalitet på tværs af forskellige anvendelser.

Tidligere:

Den ultimative guide til 0,45 mikron sprøjtefiltre til dig

Næste:

Alt hvad du har brug for at vide om hovedrummet GC -prøveforberedelse