Προεπεξεργασία δειγμάτων HPLC – Οδηγός βήμα προς βήμα

Επισκόπηση δείγματος προεπεξεργασίας

Η προεπεξεργασία του δείγματος περιλαμβάνει όλες τις εργασίες πριν από την ένεση. Εκτός από τη ζύγιση, τη διάλυση και την αραίωση, περιλαμβάνει επίσης τα ακόλουθα βήματα:

• Διήθηση
• Εκχύλιση
• Παραγωγοποίηση (παραγωγοποίηση πριν από τη στήλη)
• Υγρή χρωματογραφία (χρωματογραφία στήλης χαμηλής πίεσης)

Η προεπεξεργασία μπορεί να πραγματοποιηθεί χειροκίνητα ή αυτοματοποιημένα. Είστε εξοικειωμένοι με την προεπεξεργασία δειγμάτων;

Παραγωγοποίηση

Ορισμένα δείγματα εξακολουθούν να μην μπορούν να εγχυθούν απευθείας μετά την προεπεξεργασία. Απαιτείται παραγωγοποίηση για να γίνουν ενώσεις χωρίς απορρόφηση υπεριώδους ακτινοβολίας ή φθορισμό ανιχνεύσιμες από ανιχνευτές υπεριώδους ακτινοβολίας ή φθορισμού.

• Βελτιώνει την ευαισθησία
• Βελτιώνει τον διαχωρισμό (αλλαγή ποιότητας)

Πιθανά ζητήματα περιλαμβάνουν απώλεια δείγματος, μόλυνση, ημιτελείς αντιδράσεις ή πολλά υποπροϊόντα, τα οποία μπορεί να επηρεάσουν την ακρίβεια ή να δημιουργήσουν σφάλματα.

Διήθηση δειγμάτων

Τα δείγματα LC πρέπει να είναι ομοιόμορφα και χωρίς σωματίδια. σωματίδια μπορεί να καταστρέψουν τον εγχυτήρα ή να μπλοκάρουν τη στήλη. Τα βήματα περιλαμβάνουν:

• Ανακινήστε το δείγμα πριν από την ένεση και ελέγξτε για σωματίδια, θολότητα ή γαλακτώματα
• Εάν παρατηρηθούν σωματίδια, φιλτράρετε το δείγμα χρησιμοποιώντας μια μεμβράνη που μπορεί να συγκρατήσει σωματίδια ≥0,15μm

Πιθανά ζητήματα: μόλυνση δείγματος, συγκέντρωση συστατικών που μειώνει την προσρόφηση και σφάλματα που προκαλούν εξάτμιση διαλύτη.

Μέθοδοι Εκχύλισης

Η εκχύλιση διαχωρίζει τις αναλυόμενες ουσίες από τους συνδιαλύτες ή αφαιρεί παρεμβαλλόμενες ουσίες (π.χ. πρωτεΐνες). Οι οργανικοί διαλύτες πρέπει να είναι χαμηλής τοξικότητας, πτητικούς, χαμηλής περιεκτικότητας σε ακαθαρσίες και να διαλύουν καλά το δείγμα.

Κοινοί διαλύτες: διαιθυλαιθέρας, οξικός αιθυλεστέρας, διχλωρομεθάνιο, χλωροφόρμιο, βενζόλιο ή μείγματα.

Μετά την εκχύλιση, τα δείγματα μπορούν να εγχυθούν απευθείας ή να συμπυκνωθούν για να αυξηθεί η συγκέντρωση και η ευαισθησία της αναλυόμενης ουσίας.

Υδατοδιαλυτή εξαγωγή δειγμάτων

1. Όξινα συστατικά και άλατα: εκχύλιση ακαθαρσιών με οργανικό διαλύτη, προσαρμογή σε όξινο και μετά εκχύλιση ή έγχυση. ή ξηραίνεται υπό N2 και διαλύεται σε κατάλληλο διαλύτη πριν από την έγχυση.
2. Βασικά συστατικά και άλατα: εκχύλιση ακαθαρσιών με οργανικό διαλύτη, προσαρμογή σε βασικό και μετά εκχύλιση ή έγχυση. ή ξηραίνεται υπό N2 και διαλύεται σε κατάλληλο διαλύτη πριν από την έγχυση.
3. Ουδέτερα συστατικά: εκχυλίστε τις ακαθαρσίες με οργανικό διαλύτη και στη συνέχεια αναλύστε απευθείας με χρωματογραφία αντίστροφης φάσης.

Εκχύλιση Λιποδιαλυτού Δείγματος

Εκχύλιση με οργανικό διαλύτη ή έγχυση απευθείας. ή ξηραίνεται υπό N2 και διαλύεται σε κατάλληλο διαλύτη πριν από την έγχυση.

Πηγές μόλυνσης

Πιθανές πηγές μόλυνσης στην ανάλυση:

Προετοιμασία τυπικού διαλύματος

• Προετοιμάστε πρώτα το διάλυμα εσωτερικού προτύπου. χρησιμοποιήστε την ίδια παρτίδα σε πρότυπα και δείγματα για να μειώσετε τα σφάλματα
• Οι ουσίες πρέπει να είναι βαθμού χρωματογραφίας και σταθερές
• Αποθηκεύστε τα πρότυπα διαλύματα σε καφέ μπουκάλια σε χαμηλή θερμοκρασία
• Για βιταμίνες, χρησιμοποιήστε καφέ ογκομετρικές φιάλες ή προστατέψτε από το φως

Κοινά προβλήματα στην προεπεξεργασία δειγμάτων και λύσεις