El pretratamiento de la muestra incluye todas las operaciones antes de la inyección. Además de pesar, disolver y diluir, también implica los siguientes pasos:

Filtración
Extracción
Derivatización (derivatización previa a la columna)
Cromatografía líquida (cromatografía en columna de baja presión)

El pretratamiento se puede realizar de forma manual o automática. ¿Está familiarizado con el pretratamiento de muestras?

derivatización

Algunas muestras aún no se pueden inyectar directamente después del tratamiento previo. La derivatización es necesaria para producir compuestos sin absorción de UV o fluorescencia detectables mediante detectores de UV o fluorescencia.

Mejora la sensibilidad
Mejora la separación (cambio de calidad)

Los posibles problemas incluyen pérdida de muestras, contaminación, reacciones incompletas o múltiples subproductos, que pueden afectar la precisión o introducir errores.

Filtración de muestras

Las muestras de LC deben ser uniformes y libres de partículas; Las partículas pueden dañar el inyector o bloquear la columna. Los pasos incluyen:

Agite la muestra antes de la inyección y verifique si hay partículas, turbidez o emulsiones.
Si se observan partículas, filtre la muestra utilizando una membrana que pueda retener partículas de ≥0,15 μm.

Posibles problemas: contaminación de la muestra, adsorción que reduce la concentración de componentes y evaporación del disolvente que provoca errores.

Métodos de extracción

La extracción separa los analitos de los cosolventes o elimina sustancias que interfieren (p. ej., proteínas). Los disolventes orgánicos deben ser de baja toxicidad, volátiles, bajos en impurezas y disolver bien la muestra.

Disolventes comunes: éter dietílico, acetato de etilo, diclorometano, cloroformo, benceno o mezclas.

Después de la extracción, las muestras se pueden inyectar directamente o concentrar para aumentar la concentración y la sensibilidad del analito.

Extracción de muestras solubles en agua

Componentes ácidos y sales: extraiga las impurezas con disolvente orgánico, ajústelas a ácido y luego extraiga o inyecte; o secar bajo N₂ y disolver en un disolvente apropiado antes de la inyección.
Componentes básicos y sales: extraer impurezas con solvente orgánico, ajustar a básico, luego extraer o inyectar; o secar bajo N₂ y disolver en un disolvente apropiado antes de la inyección.
Componentes neutros: extraiga las impurezas con disolvente orgánico y luego analícelas directamente mediante cromatografía de fase inversa.

Extracción de muestras liposolubles

Extraer con disolvente orgánico o inyectar directamente; o secar bajo N₂ y disolver en un disolvente apropiado antes de la inyección.

Fuentes de contaminación

Posibles fuentes de contaminación en análisis:

Tipo de contaminación	Fuente	Medidas de Prevención
Ambiental	Gases nocivos, polvo, aerosoles.	Mantener la sala de instrumentos aislada y limpia; instalar aire acondicionado; controlar la humedad <70%; Previene la humedad, la corrosión y las vibraciones.
Contenedores	Material de laboratorio de vidrio, cerámica, cuarzo y plástico.	Seleccionar contenedores apropiados por tipo de muestra; limpiar a fondo
reactivos	Reactivos de grado no cromatográfico	Utilice reactivos de calidad cromatográfica, de alta pureza o de calidad analítica.

Preparación de solución estándar

Prepare primero la solución de estándar interno; Utilice el mismo lote en estándares y muestras para reducir errores.
Las sustancias deben ser de grado cromatográfico y estables.
Almacene las soluciones estándar en botellas marrones a baja temperatura.
Para las vitaminas utilizar matraces aforados de color marrón o proteger de la luz.

Problemas comunes en el pretratamiento y las soluciones de muestras

problema	causa	Solución
Picos no relacionados en el cromatograma	Contaminación del filtro	Remoje el filtro en disolvente de muestra y pruebe la inyección. Cambiar tipo de filtro Utilice técnicas de limpieza alternativas
Respuesta de pico bajo (especialmente muestras de baja concentración)	Adsorción en la superficie del filtro.	Cambiar tipo de filtro Procese todas las muestras en las mismas condiciones. Utilice técnicas de limpieza alternativas
Baja recuperación	extracción incompleta	Aumente el tiempo de extracción, use solvente caliente Ajustar el método de limpieza
Picos ampliados, vida útil de la columna más corta	Interferencia y contaminación de la muestra.	Mejorar el método de limpieza.
Poca precisión	Recuperación incompleta	Optimizar o reemplazar la derivatización, separación, extracción u otras condiciones. Utilice el manejo automatizado para mejorar la precisión

Efectos extremadamente altos/bajos de la temperatura y la exposición a la luz sobre la estabilidad de la muestra: teoría y metodología

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