Proovide ettevalmistamine on kriitiline samm vedelikkromatograafia-massi spektromeetria (LC-MS) protsessis, mõjutades analüütiliste tulemuste täpsust ja usaldusväärsust. Proovide ettevalmistamise peamine eesmärk on keerukatest maatriksitest eraldada, puhastada ja kontsentreerida, tagades, et need ühilduvad LC-MS analüüsiga. See samm on kriitilise tähtsusega võimalike sekkumiste kõrvaldamiseks, mis võivad mõjutada andmete kvaliteeti. Nõuetekohane valimi ettevalmistamine parandab analüüsi tundlikkust ja spetsiifilisust, mis on hädavajalik erinevates valdkondades, näiteks proteoomika, metaboomika, farmatseutilise analüüsi ja keskkonnatestide kasutamiseks.

Proovide ettevalmistamise peamised eesmärgid:

Sekkumiste eemaldamine: kõrvaldage ained, mis võivad häirida sihtanalüütide tuvastamist.

Analüütide kontsentratsioon: suurendage analüütide kontsentratsiooni, et parandada avastamispiire.

Ühilduvus: valmistage proovid ette, et neid saaks LC-MS-süsteemide abil tõhusalt analüüsida.

Kas soovite rohkem teada saada HPLC näidise ettevalmistamise kohta, palun kontrollige seda artiklit: HPLC proovide ettevalmistamise lahendused parimate tulemuste saamiseks

LC-MS proovi ettevalmistamise tavalised tehnikad

LC-MS proovide valmistamisel kasutatakse tavaliselt mitmeid tehnikaid. Igal meetodil on oma eelised ja see valitakse analüüsi konkreetsete nõuete põhjal.

1. tahke faasi ekstraheerimine (SPE)

SPE -d kasutatakse laialdaselt vedelatest proovidest analüütide isoleerimiseks. See tehnika hõlmab proovi läbiviimist tahke statsionaarse faasi kaudu, mis säilitab sihtanalüüdid selektiivselt, võimaldades samal ajal teistel komponentidel läbida. SPE on eriti efektiivne keerukate maatriksite, näiteks veri või uriini jaoks ja pakub mitmeid eeliseid:

Kõrged taastumiskiirused: SPE annab tavaliselt vedeliku-vedeliku ekstraheerimisega võrreldes kõrgemad taastumise määrad.

Automaatika ühilduvus: meetodit saab hõlpsasti automatiseerida, suurendades läbilaskevõimet ja tõhusust.

2. valgu sademed

Valkude sadestumine on lihtne, kuid tõhus meetod valkude eemaldamiseks bioloogilistest proovidest. See tehnika on eriti oluline, kui analüüsida kõrge proteiinisisaldusega proovide, näiteks plasma või seerumiga. Valkude sadestades lihtsustab see meetod maatriksit ja vähendab häireid järgmistes analüüsides.

Kiire ja tõhus: see võimaldab proovide kiiret töötlemist, säilitades samal ajal hea taastumise määra.

Lle eraldab analüüdid nende lahustuvuse põhjal kahes sissetubmatus vedelikus - tavaliselt vesifaas ja orgaaniline lahusti. See tehnika on kasulik mittepolaarsete või mõõdukalt polaarsete ühendite ekstraheerimiseks keerukatest vesimaade maatriksitest.

Mitmekülgne rakendus: LLE saab kohandada erinevate proovimahtude ja tüüpide jaoks, muutes selle sobivaks mitmesuguste rakenduste jaoks.

4. derivatiseerimine

Derivatiseerimine hõlmab keemiliselt modifitseerimist analüüte, et suurendada nende tuvastatavust LC-MS analüüsis. See protsess parandab selliseid omadusi nagu volatiilsus ja ionisatsiooni efektiivsus, muutes selle eriti kasulikuks madala loomupärase tuvastatavusega ühendite jaoks.

Tõhustatud tundlikkus: derivatiseerimine võib oluliselt suurendada analüüside tundlikkust ja selektiivsust konkreetsete ühendklasside, näiteks aminohapete või steroidide jaoks.

Kas soovite rohkem teada saada kromatograafia viaalide rakenduste kohta, kontrollige seda artiklit: 15 kromatograafia viaalide rakendust erinevates valdkondades

Proovide ettevalmistamise meetodi valimine mõjutavad tegurid

Sobiva valimi ettevalmistamise tehnika valimine nõuab mitmete tegurite arvestamist:

Analüüdi keemia: analüütide polaarsuse, laengu ja stabiilsuse mõistmine on ülioluline.

Proovi maht ja keerukus: proovi maatriksi mahupiirangud ja keerukus võivad dikteerida, millised meetodid on teostatavad.

Tundlikkuse nõuded: erinevatel rakendustel võivad olla erinevad tundlikkuse vajadused, mis mõjutavad meetodi valikut.

Laboriressursid: automatiseerimiseks või käsitsi töötlemiseks mõeldud seadmete kättesaadavus võib mõjutada tehnika valikut.

Parimad tavad valimi tõhusaks ettevalmistamiseks

LC-MS analüüsi optimaalsete tulemuste saavutamiseks on valimi ettevalmistamise ajal parimate tavade järgimine hädavajalik:

Standardimine: arendage välja standardiseeritud protokollid, et tagada analüüside järjepidevus.

Valideerimine: nende usaldusväärsuse ja täpsuse kinnitamiseks kinnitage regulaarselt meetodeid.

Minimeerige proovide käitlemist: vähendage manipulatsioonide arvu kaotuse või saastumise vältimiseks.

Kasutage kvaliteetseid reagente: kasutage kvaliteetseid reagente, et vältida proovidesse lisandite sisestamist.

Dokumentide protseduurid: pidage kõigi protseduuride üksikasjalikke andmeid tõrkeotsingu ja meetodi optimeerimise hõlbustamiseks.

Järeldus

Valimi tõhus ettevalmistamine on LC-MS eduka analüüsi jaoks oluline. Mõistes mitmesuguseid tehnikaid, näiteks SPE, valgu sademeid, LLE ja derivatiseerumist, saavad analüütikud valida oma erinõuete jaoks kõige sobivama meetodi. Lisaks parandab parimate tavade järgimine andmete kvaliteeti ja tagab usaldusväärsed tulemused erinevate rakenduste jaoks teadusuuringute ja tööstuse seadetes.

Kokkuvõtteks võib valimi ettevalmistamise tehnikate valdamine mitte ainult parandada analüütilist jõudlust, vaid anda ka olulise panuse arengusse sellistes valdkondades nagu kliiniline diagnostika, ravimite väljatöötamine ja keskkonnaseire.

Avage õige kromatograafia viaali ettevalmistamise saladused täpseks ja usaldusväärseks analüüsiks vaid 6 lihtsa etapi korral.Lugege tehnika valdamiseks! 6 sammu kromatograafia viaalide analüüsimiseks

Eelmine:

LCMS vs GCMS: milline tehnika on teie uurimistöö jaoks parim?

Järgmine:

Mis on TOC viaal ja selle tähtsus kromatograafias?