Põhjalik juhend HPLC proovide eeltöötlemiseks – filtreerimine, ekstraheerimine ja derivatiseerimine
Uudised
Kodu > KKK
kategooriad
PÄRING

HPLC proovide eeltöötlus – samm-sammuline juhend

21. oktoober 2025
SILDID:

Proovi eeltöötluse ülevaade

Proovi eeltöötlus hõlmab kõiki toiminguid enne süstimist. Lisaks kaalumisele, lahustamisele ja lahjendamisele hõlmab see ka järgmisi samme:

  • Filtreerimine
  • Ekstraheerimine
  • Derivatiseerimine (veerueelne tuletis)
  • Vedelikkromatograafia (madalsurve kolonnkromatograafia)

Eeltöötlust saab teha käsitsi või automatiseeritult. Kas olete proovide eeltöötlusega tuttav?


Derivatiseerimine

Mõningaid proove ei saa ikkagi pärast eeltöötlust otse süstida. Derivatiseerimine on vajalik selleks, et UV-kiirguse või fluorestsentsi detektorite abil saaks tuvastada UV-kiirguse neeldumise või fluorestsentsita ühendeid.

  • Parandab tundlikkust
  • Suurendab eraldatust (kvaliteedi muutus)

Võimalike probleemide hulka kuuluvad proovi kadu, saastumine, mittetäielikud reaktsioonid või mitmed kõrvalsaadused, mis võivad mõjutada täpsust või põhjustada vigu.

Proovide filtreerimine

LC-proovid peavad olema ühtlased ja osakestevabad; osakesed võivad kahjustada injektorit või blokeerida kolonni. Sammud hõlmavad järgmist:

  • Loksutage proovi enne süstimist ja kontrollige osakeste, hägususe või emulsioonide suhtes
  • Kui märkate osakesi, filtreerige proov membraaniga, mis suudab kinni hoida ≥0,15 μm osakesi

Võimalikud probleemid: proovi saastumine, adsorptsiooni vähendav komponentide kontsentratsioon ja lahusti aurustumine, mis põhjustab vigu.

Ekstraheerimismeetodid

Ekstraheerimine eraldab analüüdid kaaslahustitest või eemaldab segavad ained (nt valgud). Orgaanilised lahustid peaksid olema madala toksilisusega, lenduvad, vähese lisandite sisaldusega ja proovi hästi lahustama.

Tavalised lahustid: dietüüleeter, etüülatsetaat, diklorometaan, kloroform, benseen või segud.

Pärast ekstraheerimist saab proove otse süstida või kontsentreerida, et suurendada analüüdi kontsentratsiooni ja tundlikkust.

Vees lahustuva proovi ekstraheerimine

  1. Happelised komponendid ja soolad: ekstraheerige lisandid orgaanilise lahustiga, reguleerige happeliseks, seejärel ekstraheerige või süstige; või kuivatage N2 all ja lahustage enne süstimist sobivas lahustis.
  2. Põhikomponendid ja soolad: ekstraheerige lisandid orgaanilise lahustiga, reguleerige aluseliseks, seejärel ekstraheerige või süstige; või kuivatage N2 all ja lahustage enne süstimist sobivas lahustis.
  3. Neutraalsed komponendid: ekstraheerige lisandid orgaanilise lahustiga, seejärel analüüsige otse pöördfaasikromatograafiaga.


Rasvlahustuvate proovide ekstraheerimine

Ekstraheerige orgaanilise lahustiga või süstige otse; või kuivatage N2 all ja lahustage enne süstimist sobivas lahustis.


Saasteallikad

Võimalikud saasteallikad analüüsis:

Saastumise tüüp

Allikas

Ennetusmeetmed

Keskkonnasõbralik

Kahjulikud gaasid, tolm, aerosoolid

Hoidke instrumentide ruum isoleeritud, puhas; paigaldada AC; kontrolli niiskus <70%; vältida niiskust, korrosiooni, vibratsiooni

Konteinerid

Klaasist, keraamikast, kvartsist, plastist laborinõud

Valige iga proovitüübi jaoks sobivad mahutid; puhastage põhjalikult

Reaktiivid

Mittekromatograafilised reaktiivid

Kasutage kromatograafiakvaliteediga, kõrge puhtusastmega või analüütilise puhtusega reaktiive


Standardlahuse valmistamine

  • Esmalt valmistage sisestandardlahus; Vigade vähendamiseks kasutage sama partiid standardites ja proovides
  • Ained peavad olema kromatograafiakvaliteediga ja stabiilsed
  • Säilitage standardlahuseid pruunides pudelites madalal temperatuuril
  • Vitamiinide jaoks kasutage pruune mõõtekolbe või kaitske valguse eest


Levinud probleemid proovide eeltöötlemisel ja lahendustel

Probleem

Põhjus

Lahendus

Mitteseotud piigid kromatogrammis

Filtri saastumine

  1. Leotage filtrit proovilahustis ja proovige süstida

  2. Muutke filtri tüüpi

  3. Kasutage alternatiivseid puhastusmeetodeid

Madal tippvastus (eriti madala kontsentratsiooniga proovid)

Adsorptsioon filtri pinnal

  1. Muutke filtri tüüpi

  2. Töödelge kõiki proove samadel tingimustel

  3. Kasutage alternatiivseid puhastusmeetodeid

Madal taastumine

Mittetäielik ekstraheerimine

  1. Suurendage ekstraheerimisaega, kasutage kuuma lahustit

  2. Reguleerige puhastusmeetodit

Laiendatud tipud, lühendatud kolonni eluiga

Proovi häired ja saastumine

Parandage puhastusmeetodit

Halb täpsus

Mittetäielik taastumine

  1. Optimeerige või asendage derivatiseerimist, eraldamist, ekstraheerimist või muid tingimusi

  2. Täpsuse parandamiseks kasutage automaatset käsitsemist

Päring