30. august 2024
Kõrge jõudlusega vedelikkromatograafia (HPLC) on peamine analüütiline tehnika, mida kasutatakse laborites nii mitmekesistes põldudes nagu farmaatsia, keskkonnateadused ja toiduohutus. HPLC maailmas on kaks peamist kategooriat: analüütiline HPLC ja ettevalmistav HPLC. Kuigi mõlemad tehnikad kasutavad ühendite eraldamiseks sarnaseid põhimõtteid, kasutatakse neid erinevatel eesmärkidel ja neil on erinevad tööparameetrid. Selles ajaveebis uuritakse erinevusi analüütilise ja ettevalmistava HPLC vahel, sealhulgas nende eesmärk, töö ulatus, seadmed ja rakendused.
Kas soovite teada saada täielikku teavet HPLC viaalide kohta, palun kontrollige seda artiklit: HPLC viaalide entsüklopeedia
Analüütilise HPLC mõistmine
Määratlus ja eesmärk
Analüütiline HPLC keskendub peamiselt ühendite eraldamisele ja tuvastamisele proovis. Esmane eesmärk on saada kvalitatiivset ja kvantitatiivset teavet segus sisalduvate komponentide kohta. Analüütilist HPLC -d kasutatakse sageli:
Kvalitatiivne analüüs: valimi komponentide tuvastamine.
Kvantitatiivne analüüs: konkreetse ühendi kontsentratsiooni määramine proovis.
Tööskaala
Analüütiline HPLC töötab väiksemas mahus, hõlmates tavaliselt mikroliitrit proovi süste. Kasutatavad mahud on tavaliselt vahemikus 1 kuni 100 ui, mis võimaldab mitut proovi analüüsida ühel käigul. See väike maht sobib ideaalselt rutiinseks testimiseks ja kvaliteedikontrollis.
Kolonni suurus ja osakeste suurus
Analüütilises HPLC-s kasutatavad kolonnid on tavaliselt väikesed läbimõõduga, tavaliselt umbes 4,6 mm, ja need on pakitud väikeste statsionaarse faasiosakestega (3-5 μm). See konfiguratsioon võimaldab kõrge eraldusvõimega ja tõhusat ühendi eraldamist, mis sobib üksikasjalikuks analüüsiks.
Avastamismeetodid
Analüütiline HPLC kasutab mitmesuguseid tuvastusmeetodeid, sealhulgas UV-nähtav, fluorestsents ja massispektromeetria. Detektori valik sõltub analüüdi olemusest ja analüüsi konkreetsetest nõuetest. Mittepurustavaid detektoreid kasutatakse sageli selleks, et proovi saaks analüüsida ilma olulise kaotuseta.
Kas soovite teada 50 vastust HPLC viaalide kohta, palun kontrollige seda artiklit: 50 kõige sagedamini esitatavat küsimust HPLC viaalide kohta
Preparatiivse HPLC mõistmine
Määratlus ja eesmärk
Preparatiivse HPLC eesmärk on seevastu eraldada ja puhastada spetsiifilised ühendid segust. Peamine eesmärk on eraldada sihtühendi piisavad kogused edasiseks analüüsiks või kasutamiseks. Ettevalmistav
HPLC -d kasutatakse tavaliselt järgmiste rakenduste jaoks:
Ühendite eraldamine: spetsiifiliste ühendite ekstraheerimine ja puhastamine teadusuuringuteks või tööstuslikuks kasutamiseks.
Proovide ettevalmistamine: proovide ettevalmistamine järgnevaks analüüsiks või preparaatideks.
Operatsioonide ulatus
Preparatiivne HPLC viiakse läbi laiemalt kui analüütiline HPLC. Proovimahud võivad ulatuda mõnest milliliitrist mitme liitrini, sõltuvalt sihtühendi eeldatavast saagist. See suurem skaala võimaldab edasiseks kasutamiseks koguda piisavalt puhastatud materjali.
Kolonni suurus ja osakeste suurus
Preparatiivse HPLC jaoks kasutatavad veerud on oluliselt suuremad, tavaliselt vahemikus 20 mm kuni 100 mm või läbimõõduga. Voolukiiruste suurendamiseks ja suuremate proovimahtude suurendamiseks pakitakse veerud suuremate statsionaarsete faasiosakestega (tavaliselt 10-20 um). See disain aitab vähendada seljarõhku ja saavutada ühendite tõhusat eraldamist.
Avastamismeetodid
Preparatiivses HPLC -s võivad tuvastusmeetodid erineda analüütilises HPLC -s kasutatavatest. Kuigi mittepurustavaid detektoreid on endiselt tavalised, kasutavad preparatiivsed süsteemid sageli detektoreid, mis on võimelised koguma fraktsioone elueerimisprofiili põhjal. See võimaldab konkreetseid ühendeid isoleerida, kui need kolonnist elusat.
Kas soovite rohkem teada saada kromatograafia viaalide rakendamise kohta, kontrollige seda artiklit:Viis puhastusmeetodit HPLC viaalide jaoks
Peamised erinevused analüütilise ja ettevalmistava HPLC vahel
|
Funktsioon
|
Analüütiline HPLC
|
Ettevalmistav HPLC
|
|
Eesmärk
|
Kvalitatiivne ja kvantitatiivne analüüs
|
Ühendite eraldamine ja puhastamine
|
|
Tööskaala
|
Väikesemahulised (µL mahud)
|
Suuremahuline (ML kuni L mahud)
|
|
Veeru mõõtmed
|
Väiksem läbimõõt (4,6 mm)
|
Suurem läbimõõt (20-100 mm)
|
|
Osakeste suurus
|
Väiksemad osakesed (3-5 um)
|
Suuremad osakesed (10-20 µm)
|
|
Voolukiirus
|
Madalamad voolukiirused (0,1–5 ml \ / min)
|
Suuremad voolukiirused (10-200 ml \ / min)
|
|
Avastamismeetodid
|
Mittepurustavad detektorid (UV, MS)
|
Fraktsioonide kogumine põhineb elueerimisprofiilil
|
Analüütilise ja ettevalmistava HPLC vahel valimine
Analüütilise ja ettevalmistava HPLC vahel valimisel kaaluge järgmisi tegureid:
Analüüsi eesmärk: tehke kindlaks, kas peamine eesmärk on ühendite kvalitatiivselt ja kvantitatiivselt analüüsida või spetsiifilisi ühendeid edasiseks kasutamiseks isoleerida.
Valimi kogus: hinnake saadaoleva valimi kogust. Kui saadaval on väike kogus proovi, võib analüütiline HPLC olla sobivam. Vastupidiselt, kui on vaja suurt kogust proovi, on ettevalmistav HPLC parem valik.
Nõutav puhtus ja saagis: kaaluge sihtrühma nõutavat puhtust ja saaki. Ettevalmistava HPLC eesmärk on maksimeerida konkreetse ühendi taastumist, samas kui analüütiline HPLC keskendub üksikasjaliku teabe pakkumisele proovi koostise kohta.
Ressursid ja seadmed: hinnake olemasolevaid ressursse, sealhulgas seadmeid ja eelarvet. Ettevalmistavad HPLC -süsteemid on tavaliselt kallimad ja nõuavad rohkem investeeringuid seadmesse ja tegevuskuludesse.
Kas olete huvitatud HPLC proovi ettevalmistamisest? Vaadake seda artiklit:HPLC proovide ettevalmistamise lahendused parimate tulemuste saamiseks.
Järeldus
Nii analüütiline kui ka ettevalmistav HPLC on kromatograafia valdkonnas väärtuslikud tehnikad ja igaühel on erinevad kasutusalad sõltuvalt teadlaste ja tööstuse vajadustest. Kui analüütiline HPLC on ideaalne ühendite üksikasjalikuks analüüsiks ja kvantifitseerimiseks, on preparatiivne HPLC oluline spetsiifiliste ühendite eraldamiseks ja puhastamiseks edasiseks kasutamiseks. Nende kahe tehnika erinevuste mõistmine aitab teadlastel teha teadlikke otsuseid, optimeerida nende töövooge ja saada nende analüüsides täpseid ja usaldusväärseid tulemusi. Kuna HPLC tehnoloogia edasi areneb, jäävad nii analüütilised kui ka ettevalmistatavad meetodid igasuguse eduka teadusuuringute lahutamatu osa.
Inglise keel
Hiinlane
