Kõik, mida peate HPLC proovi ettevalmistamise kohta teadma

Proovide ettevalmistamine on HPLC analüüsi kriitiline samm mitmel põhjusel.

Minimeerige sekkumisi:Proovid sisaldavad sageli lisandeid ja maatriksikomponente, mis võivad häirida sihtanalüütide tuvastamist. Tõhusad proovide ettevalmistamise tehnikad võivad aidata neid soovimatuid aineid eemaldada ja analüütilist täpsust parandada.

Parandage analüütide taastamist:Nõuetekohane ettevalmistamine parandab analüütide taastumist ja tagab, et tulemused kajastavad algse valimi tegelikku kontsentratsiooni. See on eriti oluline jälgimisanalüüsiks, kus analüüdid esinevad madalates kontsentratsioonides.

Täiustatud tippkuju:Korralikult valmistatud proovid aitavad moodustada kromatogrammis sümmeetrilisi ja täpselt määratletud piike. See on täpseks kvantifitseerimiseks hädavajalik. Vale valimi ettevalmistamine võib põhjustada tipu saba ja laienemise, mis raskendab andmete tõlgendamist.

Kaitske oma HPLC süsteemi:Teie valimis olevad saasteained võivad kahjustada teie HPLC -süsteemi sambaid ja muid komponente, põhjustades suurenenud hoolduskulusid ja seisakuid. Nõuetekohane proovide ettevalmistamine vähendab süsteemi ummistumise ja kulumise riski.

Proovide ettevalmistamise esimene samm on oma proovi õigesti kogumine. See hõlmab järgmist:

Kasutage puhtaid konteinereid:Saastumise vältimiseks kasutage alati puhtaid, inertseid konteinereid. Soovitatav on klaasist või kvaliteetsetest plastmahutitest.

Vältige saastumist:Kasutage kindaid ja puhtaid tööriistu, et vältida rasu ja muude allikate saastumist.

Nõuetekohane märgistamine:Märgistage proovid selgelt, et vältida segamisi ja tagada jälgitavus.

Proovide homogeniseerimine tagab homogeensuse, mis on oluline reprodutseeritavate tulemuste jaoks. Homogeniseerimise tehnikad hõlmavad:

Mehaaniline homogeniseerimine: tahkete või poolhaavate proovide segamine segaja või homogenisaatori abil.

Ultraheli homogeniseerimine:Ultraheli pealekandmine osakeste hajutamiseks vedelasse proovi.

Sõltuvalt analüütide eeldatavast kontsentratsioonist võib -olla tuleb proovid olla vaja lahjendada või kontsentreerida. Seda on võimalik saavutada:

Lahjendus:Lahjendage proov soovitud kontsentratsioonile, kasutades sama lahustit nagu liikuv faas.

Kontsentratsioon:Analüüte saab kontsentreerida selliste tehnikate abil nagu aurustumine või tahke faasi ekstraheerimine (SPE).

Filtreerimine on oluline tahkete osakeste aine eemaldamiseks, mis võivad HPLC veerud ummistada. Ühised filtreerimismeetodid hõlmavad ：

Membraani filtreerimine:Kasutamine0,2 um või 0,45 um filtridosakeste eemaldamiseks. Tavaliselt kasutatakse polüetsersulfone (PES) või nailonfiltreid.

Eelfiltratsioon:Kõrge osakeste sisaldusega proovide puhul võib eelfiltratsioon suurema pooride suuruse filtri kaudu ummistumist vältida.


50 korduma kippuva küsimust süstlafiltrite kohta, vaadake kindlasti seda informatiivset artiklit: "Süstlafiltri" teema 50 korduma kippuvate küsimuste

Kaaluge oma proovi stabiliseerimist, et vältida analüüdi lagunemist.

pH korrigeerimine:PH reguleerimine võib aidata teatud analüüte stabiliseerida. Näiteks võivad happelised ühendid halvenemise vältimiseks vajada hapestamist.

Lisandid:Stabilisaatorite või säilitusainete lisamine aitab säilitada proovi terviklikkust ladustamise ja analüüsi ajal.

Proovi lahustamiseks ja ühilduvuse tagamiseks HPLC süsteemiga on oluline valida õige lahusti. Mõelge järgmisele:

Lahusti polaarsus:Täieliku lahustumise saavutamiseks peab lahusti vastama analüüdi polaarsusele.

Mobiilse faasi ühilduvus: Võimalike sekkumiste minimeerimiseks kasutage mobiilse faasiga ühilduvat lahustit.

7. Standardite ettevalmistamine

Kalibreerimisstandardite ettevalmistamine on valimis analüüdi kvantifitseerimiseks hädavajalik. See hõlmab järgmist:

Kalibreerimiskõvera ettevalmistamine:Koostage analüüdi teadaolevate kontsentratsioonide seeria, et luua kvantifitseerimiseks kalibreerimiskõver.

Kasutage sama lahustit:Järjepidevuse säilitamiseks koostage oma standardid alati, kasutades sama lahustit ja tingimusi kui teie proovid.

Järgige standardseid tööprotseduure (SOPS):Koostage ja järgige SOP -sid proovide ettevalmistamiseks, et tagada järjepidevus ja reprodutseeritavus.

Kasutage kvaliteetseid reagente ja lahusteid:Saastumise minimeerimiseks kasutage alati HPLC-klassi lahusteid ja suure puhtusega reagente.

Hoidke oma tööruum puhas:Hoidke oma proovi ettevalmistamise piirkond puhas ja korraldatud, et vähendada saastumise riski.

Dokumenteerige kõik:Hoidke oma näidiste ettevalmistamise protseduuride üksikasjalikke andmeid, sealhulgas kõik kõrvalekalded standardprotokollidest.

Valida meetodid:Valige regulaarselt proovide ettevalmistamise meetodeid, et tagada usaldusväärsete ja reprodutseeritavate tulemuste saamiseks.

Halb tipu kuju:Kui tipud on laiad või sabad, võib see näidata mittetäielikku lahustumist või tahkete osakeste olemasolu. Veenduge, et teie proov oleks põhjalikult segatud ja filtritud.

Kummitus tipud:Kummituspiigid võivad olla põhjustatud lahusti või proovi lisanditest, kasutage kõrge puhkega lahusteid ja veenduge, et kõik klaasnõud ja seadmed oleksid puhtad.

Madal tundlikkus:Kui tundlikkus on madal, kaaluge oma ekstraheerimismeetodi optimeerimist või analüüdi kontsentratsiooni suurendamist.

Veeru ummistamine:Sagedane ummistumine võib näidata, et teie proov sisaldab liiga palju tahkeid osakesi või seda ei filtreerita piisavalt. Hinnake oma filtreerimisprotsessi ümber ja kaaluge eelfiltreerimist.

Ebajärjekindlad tulemused:Tulemuste varieeruvus võib tuleneda ebajärjekindla proovi ettevalmistamisest. Standardiseerige kõik protseduurid ja veenduge, et proovide ettevalmistamisega seotud töötajad oleks korralikult koolitatud.

Analüütiliste nõudmiste suurenedes võtavad laborid kasutusele rohkem proovide ettevalmistamise tehnikaid, et parandada tõhusust ja täpsust:

SPE on laialdaselt kasutatav tehnika, mis võimaldab analüütide selektiivset ekstraheerimist keerukatest maatriksitest. See hõlmab vedelaproovi läbimist läbi tahke adsorbendi materjali, mis säilitab sihtanalüüti, võimaldades samas lisandite läbimist.

LLE on tehnika, mis eraldab analüüdid nende lahustuvuse põhjal kahes sissetubmatus vedelikus. See meetod on efektiivne erineva polaarsusega ühendite eraldamisel ja seda kasutatakse sageli keskkonna- ja farmatseutilises analüüsis.

Quechers on populaarne meetod toidu- ja keskkonnaproovide valmistamiseks, mis ühendab kaevandamise ja puhastamise etapid ühte protsessi, muutes selle tõhusaks ja kulutõhusaks.

Läbilaskevõimet ja reprodutseeritavust saab märkimisväärselt parandada automatiseeritud proovide ettevalmistamise süsteemide abil, mis võivad täita selliseid ülesandeid nagu lahjendamine, filtreerimine ja SPE koos inimese minimaalse sekkumisega, vähendades sellega vigade riski.


Kas soovite rohkem teada saada HPLC näidise ettevalmistamise kohta, palun kontrollige seda artiklit: HPLC proovide ettevalmistamise lahendused parimate tulemuste saamiseks

HPLC proovi ettevalmistamine on kriitiline samm, mis võib analüütiliste tulemuste täpsust ja usaldusväärsust märkimisväärselt mõjutada. Järgides parimaid tavasid, kasutades sobivaid tehnikaid ja käsitledes tavalisi probleeme, saavad laborid valimi ettevalmistamise protsessi optimeerida, kasutades arenenud vajadusi arenenud tehnikaid ja tehnoloogiaid. Automatiseerimine parandab veelgi HPLC analüüside tõhusust ja tõhusust. Nõuetekohane proovide ettevalmistamine ei paranda mitte ainult tulemuste kvaliteeti, vaid kaitseb ka HPLC süsteemi, tagades pikaajalise usaldusväärsuse ja jõudluse.