HPLC mobiilse faasi jaoks õige puhvri valimine on teie optimaalse eraldamise ja analüüsi saavutamiseks kriitiline proov. Puhvrid aitavad säilitada stabiilset pH -d, mis on oluline teie analüütide ionisatsiooniseisundi kontrollimiseks, mõjutades sellega nende peetumisaega ja tipu kuju. Allpool on üksikasjalik ülevaade sellest, kuidas valida oma HPLC -rakenduse jaoks parim puhver.

Kas teate HPLC proovi ettevalmistamise kohta? Lisateabe saamiseks klõpsake sellel artiklil: "Kõik, mida peate teadma HPLC proovi ettevalmistamise kohta"

Puhvervaliku tähtsus

Puhver on lahus, mille pH ei muutu pärast väikese koguse happe või aluse lisamist. Nende kompositsiooni põhjal võib puhvreid klassifitseerida kas happelisteks või põhilisteks. Puhvri efektiivsus määratakse selle PKA abil, mis ideaalis peaks optimaalseks puhverdamisvõimsuseks olema soovitud liikuva faasi pH ühiku piires.

Peamised tegurid, mida tuleks arvestada

1.Ph vahemik: liikuva faasi pH peaks olema vähemalt 2 pH ühikut analüüdi PKA -st kaugusel. See aitab pärssida happeliste või põhianalüütide ioniseerimist, maksimeerides nende säilitamist kolonnis. Näiteks kui analüüt on nõrk hape, mille PKA on 4,5, hoiaks mobiilset faasi, mille pH on umbes 2,0, seda ei seeionita olekus, suurendades säilitamist.

2.Bufferi tüüp: HPLC -s kasutatavad tavalised puhvrid sisaldavad:

Fosfaatpuhvrid: efektiivne pH vahemikus 2,0 kuni 8,0, fosfaatpuhvreid kasutatakse laialdaselt nende stabiilsuse ja ühilduvuse tõttu paljude analüütidega. Need sobivad eriti LC-UV rakenduste jaoks.

Atsetaatpuhvrid: need on populaarsed ka LC-UV testide jaoks ja neid saab kasutada sarnastes pH-vahemikes nagu fosfaatpuhvrid.

Lenduvad puhvrid: LC-MS-i rakenduste jaoks eelistatakse lenduvaid puhvreid nagu formatiiv, atsetaat ja ammooniumvesinikkarbonaat, kuna massispektromeetria protsessi käigus saab neid hõlpsasti eemaldada.

3.Kuisutaja kontsentratsioon: puhvrite tüüpiline algkontsentratsioon HPLC-s on vahemikus 25–50 mm. Kõrgemad kontsentratsioonid võivad parandada maksimaalse kuju ja tõhusust, kuid võib põhjustada sademeid ka orgaaniliste lahustitega segades. Tüsistuste vältimiseks on soovitatav hoida puhvri kontsentratsioon alla 25 mm.

4. Chemical Purity: kasutage saastumise vältimiseks ja usaldusväärsete tulemuste tagamiseks alati kõrge puhtusastmega kromatograafilise kvaliteediga puhvreid. Lisandid võivad põhjustada ootamatute koostoimete ja varieeruvuse säilitusaegade osas.

Temperatuuri efektid: temperatuur võib mõjutada puhverlahuste pH -d. Nende tõhususe säilitamiseks on oluline puhvrid järjepideval temperatuuril ette valmistada ja ladustada.

Kas soovite teada 50 vastust HPLC viaalide kohta, palun kontrollige seda artiklit: 50 kõige sagedamini esitatavat küsimust HPLC viaalide kohta

Praktilised näpunäited puhver ettevalmistamiseks

Ettevalmistusmeetod: puhvreid saab valmistada, segades nende happeliste ja põhikomponentide võrdluskoguseid, või tiitrides põhilahust happega. Vältige pH reguleerimist pärast orgaaniliste lahustite lisamist, kuna see võib põhjustada ebajärjekindlaid tulemusi.

Värsked lahendused: valmistage värsked puhverlahendused regulaarselt ette, et minimeerida komponentide mikroobide kasvu ja lagunemist, mis võib mõjutada kromatograafilist jõudlust.

Korrosiooni vältimine: Teatud puhvrid, näiteks tsitraat, võivad HPLC süsteemide roostevabast terasest komponente söövitada. Pärast selliste puhvrite kasutamist kahjustuste vältimiseks veenduge süsteemi põhjalik loputamine.

Järeldus

HPLC mobiilse faasi jaoks õige puhvri valimine on usaldusväärsete ja reprodutseeritavate tulemuste saavutamiseks kriitilise tähtsusega. Kaaluge valimisel PH, puhveritüüpi, kontsentratsiooni ja puhtust. Neid juhiseid järgides saate oma HPLC meetodit optimeerida, et oma proove tõhusalt eraldada ja analüüsida.

Kas soovite teada HPLC viaalide hinda, kontrollige seda artiklit: HPLC viaalide hind: 50 kõige sagedamini esitatavat küsimust

Eelmine:

Kuidas veekvaliteedi testimiseks nõuetekohaselt kasutada COD -testitorusid?

Järgmine:

Kuidas vältida süstlafiltrites filtri läbimurret