HPLC proovide ettevalmistamise lahendused parimate tulemuste saamiseks

Neli sammu HPLC proovi ettevalmistamiseks

1. samm. Vesilahuste analüüs

2. samm. Standardite ettevalmistamine

Ühendi tuvastamiseks ja kvantifitseerimiseks mõeldud standardite ettevalmistamine võib olla tüütu ja aeganõudev protsess. Täpselt tahke aine kaalumine, nii et lahusti etteantud maht on keeruline ja vigade tõttu võib raiskamine olla kulukas - eriti ravimitega töötades. Muud tegurid, näiteks temperatuur, raskendavad standardset ettevalmistamist veelgi. Temperatuuri kõikumised muudavad lahusti tihedust ja aitavad kaasa kontsentratsiooni dramaatilistele erinevustele.



Tasakaalu kasutamine, mis võimaldab kaalu täpsust kuni mitme kümnendkohani ja automatiseerides protsessi, ühendades tasakaalu lahusti jaoturiga, tagab kõige suurema täpsuse. Tarkvara, näiteks YAPP16 doseerimise Q-APP kasutamine võimaldab mõõdetud väärtuste automaatseid arvutusi ja gravimeetrilist jälgimist. Lahusti temperatuuri ja tiheduse dokumenteerimine tagab ka väga täpsed kontsentratsioonid, eriti järgmistel päevadel standardite koostamisel. YAPP16 -i otsene andmeedastus rakendusest Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 Kromatograafia andmesüsteemi (CDS) tarkvarale on valik paberivaba andmete käitlemiseks koos täieliku andmete terviklikkusega.

3. samm. Saage tagasi hea pipeteerimisega põhitõdede juurde

Täpse ja täpse pipeteerimise tähtsus jäetakse liiga sageli tähelepanuta ja peetakse enesestmõistetavaks. Kasutajaoskuste tase ja kogemus võib avaldada olulist mõju tundlikele analüüsidele nagu HPLC. Õige pipeti valimine võib vähendada inimlikke vigu ja sellega seotud raisatud lahustite kulusid.



Mahulukuga mehaanilised pipetid pakuvad lihtsat lahendust juhuslike mahu muutuste ärahoidmiseks, samas kui keerukamad elektroonilised pipetid välistavad kasutajate varieeruvuse, et järjepidevalt täpseid mahtusid pakkuda. Pipeti näpunäide on ka HPLC analüüside jaoks oluline detail. Madalate säilitamisnõuanded on kõige paremini erinevate viskoossustega lahustitega töötades, kuna need maksimeerivad proovi taastumist. Proovi saastumine võib ilmneda ka pipeti otsast leostumise tagajärjel. Sellisena säilitavad kõrge keemilise vastupidavusega näpunäited proovi terviklikkuse.

4. samm. Täpsuse ja pikaealisuse filter

Enne analüüsi filtreerimiseks täiendava hooldamise parandab usaldusväärsust ja võib pikendada HPLC kolonni eluiga ummistumise efektide ärahoidmisega. Süstlafiltrid on lihtne ja kiire lahendus proovide filtreerimiseks enne veerukromatograafiat. Nagu pipeti näpunäidete puhul, nõuavad HPLC -s kasutatud lahustid konkreetseid filtreid, et vältida leostumist ja proovi saastumist.

Tselluloosmembraanid on resistentsed dimetüülsulfoksiidi (DMSO), amiidide, ketoonide, estri ja eetriühendite suhtes. Eriti karmide lahustite jaoks takistavad katmata polüetrulfone (PTFO) membraanid leostumist ja proovi saastumist. Proovi filtreerimine muutub proovide arvu suurenemisel väga aeganõudvaks. Mitmeproovi filtreerimisühikud, näiteks Clastep® filtreerimissüsteem, saavad proove töödelda ilma süstaldeta ja kiire raja ettevalmistamiseta ilma kvaliteeti ohverdamata.

Viis probleemi, millele peate tähelepanu pöörama！

1. Millised on suurimad näidisprobleemid, millega Labs silmitsi seisab?

Laboratooriumid on aja ja kulude osas üha suureneva surve all, sageli ei käsitleta mitte ainult paljude proovide, vaid ka erineva olemuse proovidega. Proovide ettevalmistamine on valdkond, kus tulemused võivad mõjutada saadud tulemusi ja kasutatavaid proovide valmistamise meetodeid ja kasutatavaid proovide peeneid erinevusi. Filtreerimisseadme ja lahusti materjalide ühilduvuse tagamine võib probleeme minimeerida; Näiteks ekstraheeritavate ühendite tase, mis võivad häirida analüütide tuvastamist.

2. Mis juhtub, kui proov prep läheb valesti?

Enne analüütilist suure jõudlusega vedelikkromatograafia (HPLC) rakendusi valmistatakse proovid mitmesuguste meetoditega, millel kõigil on potentsiaal mõjutada analüütilisi tulemusi, mõjutades süsteemi süstitud proovi. Ebaefektiivne proovide ettevalmistamine võib põhjustada kolonni eluea vähenemist, komponentide suurenenud teenindusnõudeid, mõõteriistade võimalikku seisakuid, kromatograafilise eraldamise efektiivsuse ja reprodutseeritavuse vähenemist ning paljusid muid probleeme.

3. esmapilgul näib filtreerimine lihtsa protsessina ...

Ehkki filtreerimine on pealtnäha väike osa suurest töövoogust, võib antud rakenduse jaoks õige filtri valimise mõju olla märkimisväärne. Näiteks võivad meetodid, mis ei eemalda piisavalt tahkete osakeste ainet, põhjustada kolonni blokeerimist. Valimi ettevalmistamise seadmete sobimatu valik võib teatud tingimustel valimisse eraldada ekstraheeritavad ühendid, siduda huvipakkuvad analüüdid või viia vigu proovi kadumise kaudu - kõik mõjutavad täheldatud tulemuste kvaliteeti ja reprodutseeritavust. Kui olete kindel, et teie filtreerimise tarbed ei aita aidates vigadele, mis nõuavad ümbertegemist või juurte põhjuseid, säästate raha ja annate endale meelerahu.

4. Millised on kõige levinumad näidised „ebaõnnestuvad”?

Vale filtrimembraanivalik on üks probleem, mida me näeme palju. Probleemid võivad ilmneda ekstraheeritavate ainete kõrvaliste piikidena, mis võivad häirida huvipakkuvate analüütide tuvastamist. Filtri söötme kokkusobimatus proovi või lahustiga keemilise takistuse osas ei piirdu ainult filtri söötme lahustumise mõjuga. Lahustid võivad põhjustada polümeersete membraanimaterjalide kerget turset, kui need ei ole täielikult ühilduvad, mis omakorda võib mõjutada filtreerimise jõudlust, põhjustades proovide ebaefektiivset puhastamist. Üks viis selle probleemiga tegelemiseks on membraani valimine, mis ühildub nii vesi- kui ka orgaaniliste lahustitega. Tüüpilise HPLC proovi ettevalmistamise korral on nende laia lahusti ühilduvuse tõttu hea võimalus süstal ja süstletud filtrid, mis sisaldavad regenereeritud tselluloosmembraane.

Veel üks levinud lõks on filtriseadme kasutamine, mis on suurem kui vajalik valmistatava mahu jaoks. Liiga suurte filtriseadmete kasutamine tähendab, et väikesed kogused proovi jäävad filtrisse, isegi pärast seda, kui ettevaatusabinõud võetakse võimalikult palju väljasaatmiseks.

5. Millised on filtreerimise etapi tõsiselt astumise eelised?

Enamiku analüütilise testimisega tegelevate laborite põhieesmärk on välja töötada järjepidevad tulemused, mis nõuavad järjepidevaid tulemusi - ja mis nõuavad järjepidevat filtreerimist. Filtreerimisseadme valimine koos parema pooride suuruse ja säilitusomadustega aitab tagada tahkete osakeste tõhusa eemaldamise, samas kui sobiva suuruse ja filtriüksuse disainilahenduse valik aitab minimeerida proovi kadu. Hea filtreerimine aitab ka kaitsta kolonni ja laiendab potentsiaalselt nii injektori kui ka veeru eluiga.

Järeldus

HPLC on väärtuslik tehnika eluteaduse ja biofarmatseutiliste uuringute jaoks, kuna see annab täpsed, reprodutseeritavad tulemused. See täpsus sõltub HPLC proovi terviklikkusest ja parim viis kvaliteetsete proovide tagamiseks on alustada parimatest tööriistadest. Ultrapuurvee, standardse ettevalmistamise, pipetide, näpunäidete ja filtrite lahendustega moodustab HPLC proovi ettevalmistusliin iga detail. Automatiseeritud lahendused ja tarkvara aitavad ka proovi ettevalmistamist sujuvamaks muuta puhaste proovide saamiseks puhaste tulemuste saamiseks.

Rohkem arutelusid HPLC proovide ettevalmistamise lahenduste üle on teretulnud!