Suure performatiivse vedelikkromatograafia (HPLC) ja vedelikkromatograafia-massispektromeetria (LCMS) on kaks võimsat analüütilist tehnikat, mida kasutatakse erinevates põldudes, sealhulgas farmaatsiatooted, keskkonnateadused ja eluteadused. Kuigi mõlemad meetodid hõlmavad ühendite eraldamist ja analüüsi, on nende põhimõtted, funktsioonid ja rakendused väga erinevad. Selles blogipostituses võrreldakse HPLC ja LCMS -i, keskendudes nende peamistele erinevustele ja iga tehnika eelistele.

Operatsiooni põhimõte

HPLC

HPLC on kromatograafiline tehnika, mis eraldab ühendeid nende interaktsioonide alusel statsionaarsete ja liikuvate faaside abil. HPLC -s pumbatakse vedel liikuv faas läbi statsionaarse faasiga täidetud kolonni, mis koosneb tavaliselt ränidioksiidi või polümeeride väikestest osakestest. Kui süsteemi sisestatakse proovisegu, eraldatakse komponendid nende afiinsuse alusel statsionaarse faasi suhtes. Ühendid, mis suhtlevad statsionaarse faasiga tugevamalt aeglasemalt, samal ajal kui ühendid, mis suhtlevad vähem tugevamalt kiiremini. Seejärel tuvastatakse eraldatud ühendid mitmesuguste detektorite abil, näiteks UV-vis, fluorestsents või murdumisnäitaja detektorid.

Kas soovite rohkem teada saada kromatograafia viaalide rakenduste kohta, kontrollige seda artiklit:15 kromatograafia viaalide rakendust erinevates valdkondades

LCMS

LCMS ühendab HPLC eraldusvõimalused massispektromeetria massianalüüsi võimalustega. LCMS -is eraldatakse proovid kõigepealt HPLC abil, nagu tavalises HPLC -s. Kuid tavalise detektori tuvastamise asemel viiakse elustatud ühendid massispektromeetrisse. Massispektromeeter ioniseerib ühendeid ja mõõdab nende massi ja laengu suhet, pakkudes üksikasjalikku teavet analüüdi molekulmassi ja struktuuri kohta. See eraldamise ja massispektromeetria kombinatsioon annab suurema tundlikkuse ja spetsiifilisuse kui ainult HPLC.

Eraldusmehhanism

HPLC:HPLC kasutab kõrget rõhku vedela liikuva faasi surumiseks läbi pakitud kolonni, mis sisaldab statsionaarset faasi. Ühendid eraldatakse nende diferentsiaalse interaktsiooni põhjal statsionaarse faasiga, mille tulemuseks on täpne ja tõhusad eraldamised.

LCMS:LCMS ühendab HPLC füüsikalise eraldusvõimalused massispektromeetria massispektromeetria võimalustega (MS). Vedelikkromatograafiakomponent eraldab ühendeid, samas kui massispektromeeter mõõdab ioniseeritud liikide massi ja laengu suhet.

Tundlikkus ja selektiivsus

HPLC:HPLC-l on hea tundlikkus ja selektiivsus, eriti kui see on kombineeritud täiustatud detektoritega nagu UV-vis, fluorestsents või dioodide massiivi detektorid. Ainuüksi HPLC ei pruugi keerukate proovide jaoks piisavat spetsiifilisust pakkuda.

LCMS:LCMS -il on HPLC -ga võrreldes parem tundlikkus ja selektiivsus. Massispektromeetrid saavad ühendeid täpselt tuvastada ja kvantifitseerida, lähtudes nende ainulaadse massi ja laengu suhte põhjal, isegi keerulistes maatriksites. See muudab LCM -id eriti kasulikuks mikroühendite analüüsimiseks ja tundmatute ainete identiteedi kinnitamiseks.

Proovi ettevalmistamine

HPLC:HPLC proovi ettevalmistamine hõlmab tavaliselt lahjendamist, filtreerimist või lihtsat ekstraheerimise tehnikat. Proove ei pea aurustuma, seega sobib HPLC mitmesuguste ühendite, sealhulgas polaarsete ja mittelenduvate ainete jaoks.

LCMS:LCMS -i proovi ettevalmistamine on sarnane HPLC -ga, kuid massispektromeetriga ühilduvuse tagamiseks võib olla vaja täiendavaid samme. Näiteks võib ionisatsiooni tugevdamiseks ja ioonide mahasurumiseks vaja minna lenduvaid puhvreid või lisaaineid.

Rakendused

HPLC:HPLC -d kasutatakse laialdaselt ravimite, toitude ja keskkonnaproovide analüüsimiseks. See on eriti efektiivne ühendite eraldamiseks ja kvantifitseerimiseks keerukates segudes, näiteks ravimite lisandid, toidulisandid ja pestitsiidide jäägid.

LCMS:LCMS -il on lai valik rakendusi, sealhulgas:

Farmatseutiline analüüs: kasutatakse ravimite avastamisel, väljatöötamisel ja kvaliteedikontrollil.

Proteoomika ja metaboomika: kasutatakse valkude ja metaboliitide tuvastamiseks ja kvantifitseerimiseks bioloogilistes proovides.

Keskkonnaanalüüs: kasutatud saasteainete tuvastamiseks vee, mulla ja õhuproovides.

Kas olete uudishimulik sertifitseeritud HPLC viaalide rollist täpse proovide analüüsi tagamisel? Lugege seda artiklit: Sertifitseeritud HPLC viaalide tähtsus täpse proovide analüüsimisel

Järeldus

HPLC ja LCM -id on mõlemad võimsad analüütilised tehnikad, millel on oma tugevad ja piirangud. Valik nende kahe vahel sõltub analüüsi konkreetsetest nõuetest, näiteks tundlikkus, selektiivsus, proovi keerukus ja saadaolevad ressursid.

HPLC on hea valik teadaolevate ühendite rutiinseks analüüsiks suhteliselt lihtsates maatriksites, kus olulised tegurid on kulud ja kasutusalad. LCM-id seevastu on eelistatud tehnika keerukate proovide analüüsimiseks, tundmatute ühendite tuvastamiseks ja ülikerge taseme tuvastamise saavutamiseks.

Kuna tehnoloogia edasi areneb, mängib HPLC ja LCMS-i integreerimine üha olulisemat rolli analüütilise keemia arenevate vajaduste rahuldamisel ja kvaliteetsete tulemuste tagamisel erinevatel rakendustel.

Eelmine:

Uimate juhend 0,45 mikroni süstlafiltrite kohta teile

Järgmine:

Kõik, mida peate teadma pearuumi GC proovi ettevalmistamise kohta