برخی از نمونه ها هنوز نمی توانند مستقیماً پس از پیش تیمار تزریق شوند. مشتق سازی برای ساخت ترکیبات بدون جذب UV یا فلورسانس قابل تشخیص توسط آشکارسازهای UV یا فلورسانس مورد نیاز است.

حساسیت را بهبود می بخشد
افزایش جدایی (تغییر کیفیت)

مشکلات احتمالی شامل از دست دادن نمونه، آلودگی، واکنش های ناقص یا چندین محصول جانبی است که ممکن است بر دقت تأثیر بگذارد یا خطا ایجاد کند.

فیلتراسیون نمونه

نمونه های LC باید یکنواخت و بدون ذرات باشند. ذرات ممکن است به انژکتور آسیب برساند یا ستون را مسدود کند. مراحل شامل:

نمونه را قبل از تزریق تکان دهید و ذرات، کدورت یا امولسیون را بررسی کنید
در صورت مشاهده ذرات، نمونه را با استفاده از غشایی که می تواند ذرات ≥0.15μm را در خود نگه دارد فیلتر کنید.

مسائل بالقوه: آلودگی نمونه، جذب سطحی باعث کاهش غلظت اجزاء و تبخیر حلال که باعث خطا می شود.

روش های استخراج

استخراج آنالیت ها را از حلال های کمکی جدا می کند یا مواد مداخله گر (مانند پروتئین ها) را حذف می کند. حلال های آلی باید دارای سمیت کم، فرار، کم ناخالصی باشند و نمونه را به خوبی حل کنند.

حلال های رایج: دی اتیل اتر، اتیل استات، دی کلرومتان، کلروفرم، بنزن یا مخلوط.

پس از استخراج، نمونه ها را می توان مستقیماً یا تغلیظ کرد تا غلظت و حساسیت آنالیت افزایش یابد.

استخراج نمونه محلول در آب

اجزای اسیدی و نمک ها: ناخالصی ها را با حلال آلی استخراج کنید، به حالت اسیدی تنظیم کنید، سپس استخراج یا تزریق کنید. یا در زیر N2 خشک کنید و قبل از تزریق در حلال مناسب حل کنید.
اجزای اصلی و نمک ها: ناخالصی ها را با حلال آلی استخراج کنید، به حالت اولیه تنظیم کنید، سپس استخراج یا تزریق کنید. یا در زیر N2 خشک کنید و قبل از تزریق در حلال مناسب حل کنید.
اجزای خنثی: ناخالصی ها را با حلال آلی استخراج کنید، سپس مستقیماً با کروماتوگرافی فاز معکوس تجزیه و تحلیل کنید.

استخراج نمونه محلول در چربی

استخراج با حلال آلی یا تزریق مستقیم؛ یا در زیر N2 خشک کنید و قبل از تزریق در حلال مناسب حل کنید.

منابع آلودگی

منابع بالقوه آلودگی در تجزیه و تحلیل:

نوع آلودگی	منبع	اقدامات پیشگیری
زیست محیطی	گازهای مضر، گرد و غبار، ذرات معلق در هوا	اتاق ابزار را ایزوله، تمیز نگه دارید. نصب AC؛ کنترل رطوبت <70%؛ جلوگیری از رطوبت، خوردگی، لرزش
ظروف	ظروف آزمایشگاهی شیشه، سرامیک، کوارتز، پلاستیک	ظروف مناسب را برای هر نوع نمونه انتخاب کنید. کاملا تمیز کنید
معرف ها	معرف های غیر کروماتوگرافی	از معرف های درجه کروماتوگرافی، با خلوص بالا یا با درجه تحلیلی استفاده کنید

آماده سازی محلول استاندارد

ابتدا محلول استاندارد داخلی را آماده کنید. از همان دسته در استانداردها و نمونه ها برای کاهش خطاها استفاده کنید
مواد باید دارای درجه کروماتوگرافی و پایدار باشند
محلول های استاندارد را در بطری های قهوه ای در دمای پایین نگهداری کنید
برای ویتامین ها از فلاسک های حجمی قهوه ای استفاده کنید یا از نور محافظت کنید

مشکلات رایج در پیش تصفیه نمونه و راه حل ها

مشکل	علت	راه حل
پیک های نامرتبط در کروماتوگرام	آلودگی فیلتر	فیلتر را در حلال نمونه خیس کنید و آزمایش تزریق کنید تغییر نوع فیلتر از تکنیک های تمیز کردن جایگزین استفاده کنید
پاسخ اوج پایین (به ویژه نمونه های با غلظت پایین)	جذب سطحی فیلتر	تغییر نوع فیلتر تمام نمونه ها را تحت شرایط یکسان پردازش کنید از تکنیک های تمیز کردن جایگزین استفاده کنید
ریکاوری کم	استخراج ناقص	زمان استخراج را افزایش دهید، از حلال داغ استفاده کنید روش تمیز کردن را تنظیم کنید
قله‌های گسترده‌تر، طول عمر ستون کوتاه شده است	تداخل و آلودگی نمونه	بهبود روش تمیز کردن
دقت ضعیف	بهبودی ناقص	بهینه سازی یا جایگزینی مشتق سازی، جداسازی، استخراج، یا شرایط دیگر از هندلینگ خودکار برای بهبود دقت استفاده کنید

قبلی:

اثرات بسیار بالا\/دمای کم و قرار گرفتن در معرض نور بر پایداری نمونه: نظریه و روش

بعدی:

بازگشت به فهرست