انتخاب بافر مناسب برای فاز موبایل HPLC برای دستیابی به جدایی بهینه و تجزیه و تحلیل شما بسیار مهم است نمونهبشر بافر به حفظ pH پایدار کمک می کند ، که برای کنترل وضعیت یونیزاسیون آنالیت های شما ضروری است ، بنابراین بر زمان احتباس و شکل اوج آنها تأثیر می گذارد. در زیر یک مرور کلی در مورد نحوه انتخاب بهترین بافر برای برنامه HPLC خود ارائه شده است.

آیا از تهیه نمونه HPLC اطلاع دارید؟ برای کسب اطلاعات بیشتر روی این مقاله کلیک کنید: "هر آنچه شما باید در مورد تهیه نمونه HPLC بدانید"

اهمیت انتخاب بافر

بافر یک راه حل است که pH پس از اضافه کردن مقدار کمی اسید یا پایه تغییر نمی کند. بر اساس ترکیب آنها ، بافر می تواند به صورت اسیدی یا اساسی طبقه بندی شود. اثربخشی یک بافر توسط PKA آن تعیین می شود ، که در حالت ایده آل باید در PH 1 pH از pH فاز موبایل مورد نظر برای ظرفیت بافر بهینه باشد.

عوامل اصلی برای در نظر گرفتن

1.PH دامنه: pH فاز موبایل باید حداقل 2 واحد pH دور از PKA آنالیت باشد. این به سرکوب یونیزاسیون آنالیت های اسیدی یا اساسی کمک می کند و به حداکثر رساندن حفظ آنها در ستون است. به عنوان مثال ، اگر آنالیت یک اسید ضعیف با PKA 4.5 باشد ، با استفاده از یک فاز متحرک با pH در حدود 2.0 ، آن را در حالت غیر یونی نگه می دارد و باعث افزایش احتباس می شود.

2. نوع بافر: بافرهای مشترک مورد استفاده در HPLC عبارتند از:

بافرهای فسفات: در محدوده pH 2.0 تا 8.0 مؤثر است ، بافرهای فسفات به دلیل ثبات و سازگاری با بسیاری از آنالیت ها به طور گسترده ای مورد استفاده قرار می گیرند. آنها به ویژه برای برنامه های LC-UV مناسب هستند.

بافرهای استات: اینها برای سنجش LC-UV نیز محبوب هستند و می توانند در دامنه pH مشابه مانند بافر فسفات استفاده شوند.

بافرهای فرار: برای کاربردهای LC-MS ، بافرهای فرار مانند فرمات ، استات و بی کربنات آمونیوم ترجیح داده می شوند زیرا در طی فرآیند طیف سنجی جرمی به راحتی قابل حذف هستند.

غلظت BUFFER: غلظت شروع معمولی برای بافر در HPLC بین 25-50 میلی متر است. غلظت بالاتر می تواند شکل اوج و کارآیی را بهبود بخشد اما همچنین ممکن است در هنگام مخلوط کردن با حلال های آلی منجر به بارش شود. توصیه می شود غلظت بافر را زیر 25 میلی متر نگه دارید تا از عوارض خودداری کنید.

4. خلوص شیمیایی: همیشه برای جلوگیری از آلودگی و اطمینان از نتایج قابل اعتماد ، از بافرهای کروماتوگرافی درجه بالا استفاده کنید. ناخالصی ها می توانند منجر به تعامل غیر منتظره و تغییرپذیری در زمان نگهداری شوند.

اثرات دما: دما می تواند بر pH محلول بافر تأثیر بگذارد. تهیه و ذخیره بافر در دمای مداوم برای حفظ اثربخشی آنها مهم است.

می خواهید 50 پاسخ در مورد ویال HPLC بدانید ، لطفاً این مقاله را بررسی کنید: 50 سؤال که اغلب در مورد ویال HPLC پرسیده می شود

نکات عملی برای تهیه بافر

روش آماده سازی: بافرها را می توان با مخلوط کردن مقادیر معادل قطعات اسیدی و اساسی آنها یا با تیتراژ یک محلول اساسی با اسید تهیه کرد. از تنظیم pH پس از افزودن حلالهای آلی خودداری کنید ، زیرا این امر می تواند منجر به نتایج متناقض شود.

راه حل های تازه: راه حل های بافر تازه را به طور مرتب تهیه کنید تا رشد میکروبی و تخریب قطعات به حداقل برسد ، که می تواند بر عملکرد کروماتوگرافی تأثیر بگذارد.

اجتناب از خوردگی: برخی از بافرهای خاص ، مانند سیترات ، می توانند اجزای استیل ضد زنگ سیستم های HPLC را خراب کنند. برای جلوگیری از آسیب ، از شستشوی کامل سیستم پس از استفاده از چنین بافرها اطمینان حاصل کنید.

پایان

انتخاب بافر مناسب برای فاز موبایل HPLC برای دستیابی به نتایج قابل اعتماد و قابل تکرار بسیار مهم است. pH ، نوع بافر ، غلظت و خلوص را هنگام انتخاب در نظر بگیرید. با رعایت این دستورالعمل ها ، می توانید روش HPLC خود را بهینه کنید تا نمونه های خود را به طور مؤثر و تجزیه و تحلیل کنید.

می خواهید قیمت ویال HPLC را بدانید ، لطفاً این مقاله را بررسی کنید: قیمت ویال HPLC: 50 سوال که اغلب پرسیده می شود

قبلی:

چگونه می توان از لوله های تست COD برای آزمایش کیفیت آب استفاده کرد؟

بعدی:

چگونه می توان از دستیابی به موفقیت در فیلترهای سرنگ جلوگیری کرد