Le prétraitement des échantillons comprend toutes les opérations avant l'injection. Outre la pesée, la dissolution et la dilution, cela implique également les étapes suivantes :

Filtration
Extraction
Dérivatisation (dérivatisation pré-colonne)
Chromatographie liquide (chromatographie sur colonne basse pression)

Le prétraitement peut être effectué manuellement ou automatiquement. Connaissez-vous le prétraitement des échantillons ?

Dérivatisation

Certains échantillons ne peuvent toujours pas être directement injectés après prétraitement. La dérivatisation est nécessaire pour fabriquer des composés sans absorption UV ni fluorescence détectables par des détecteurs UV ou à fluorescence.

Améliore la sensibilité
Améliore la séparation (changement de qualité)

Les problèmes possibles incluent la perte d'échantillons, la contamination, des réactions incomplètes ou plusieurs sous-produits, qui peuvent affecter la précision ou introduire des erreurs.

Filtration des échantillons

Les échantillons LC doivent être uniformes et exempts de particules ; les particules peuvent endommager l'injecteur ou bloquer la colonne. Les étapes comprennent :

Agiter l'échantillon avant l'injection et vérifier la présence de particules, de turbidité ou d'émulsions
Si des particules sont observées, filtrer l'échantillon à l'aide d'une membrane capable de retenir les particules ≥0,15 μm.

Problèmes potentiels : contamination des échantillons, adsorption réduisant la concentration des composants et évaporation du solvant provoquant des erreurs.

Méthodes d'extraction

L'extraction sépare les analytes des co-solvants ou élimine les substances interférentes (par exemple les protéines). Les solvants organiques doivent être peu toxiques, volatils, faibles en impuretés et bien dissoudre l’échantillon.

Solvants courants : éther diéthylique, acétate d'éthyle, dichlorométhane, chloroforme, benzène ou mélanges.

Après extraction, les échantillons peuvent être injectés directement ou concentrés pour augmenter la concentration et la sensibilité de l’analyte.

Extraction d'échantillons solubles dans l'eau

Composants et sels acides : extraire les impuretés avec un solvant organique, ajuster à l'acide, puis extraire ou injecter ; ou sécher sous N₂ et dissoudre dans un solvant approprié avant l'injection.
Composants basiques et sels : extraire les impuretés avec un solvant organique, ajuster à la base, puis extraire ou injecter ; ou sécher sous N₂ et dissoudre dans un solvant approprié avant l'injection.
Composants neutres : extraire les impuretés avec un solvant organique, puis analyser directement par chromatographie en phase inversée.

Extraction d’échantillons liposolubles

Extraire avec un solvant organique ou injecter directement ; ou sécher sous N₂ et dissoudre dans un solvant approprié avant l'injection.

Sources de contamination

Sources potentielles de contamination lors de l’analyse :

Type de pollution	Origine	Mesures de prévention
Environnemental	Gaz nocifs, poussières, aérosols	Garder la salle des instruments isolée et propre ; installer le courant alternatif ; contrôler l'humidité <70 % ; prévenir l'humidité, la corrosion et les vibrations
Conteneurs	Matériel de laboratoire en verre, céramique, quartz, plastique	Sélectionnez les conteneurs appropriés par type d’échantillon ; nettoyer soigneusement
Réactifs	Réactifs non chromatographiques	Utiliser des réactifs de qualité chromatographie, de haute pureté ou de qualité analytique

Préparation de la solution étalon

Préparez d’abord la solution étalon interne ; utiliser le même lot dans les étalons et les échantillons pour réduire les erreurs
Les substances doivent être de qualité chromatographique et stables
Conserver les solutions étalons dans des flacons marron à basse température
Pour les vitamines, utiliser des fioles jaugées brunes ou à l'abri de la lumière

Problèmes courants liés au prétraitement des échantillons et solutions

Problème	Parce que	Solution
Pics sans rapport dans le chromatogramme	Contamination du filtre	Tremper le filtre dans l'échantillon de solvant et tester l'injection Changer le type de filtre Utiliser des techniques de nettoyage alternatives
Réponse de pic faible (en particulier les échantillons à faible concentration)	Adsorption sur la surface du filtre	Changer le type de filtre Traiter tous les échantillons dans les mêmes conditions Utiliser des techniques de nettoyage alternatives
Faible récupération	Extraction incomplète	Augmentez le temps d'extraction, utilisez un solvant chaud Ajuster la méthode de nettoyage
Pics élargis, durée de vie de la colonne raccourcie	Interférence et contamination des échantillons	Améliorer la méthode de nettoyage
Mauvaise précision	Récupération incomplète	Optimiser ou remplacer la dérivatisation, la séparation, l'extraction ou d'autres conditions Utiliser la manipulation automatisée pour améliorer la précision

Effets extrêmement élevés\/de températures basses et d'exposition à la lumière sur la stabilité des échantillons : théorie et méthodologie

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