Réamhrá
Bhí mé áit a bhfuil tú - ag stánadh ar mhonatóir ag 2 AM, ag faire ar sruth bunlíne cosúil le bád caillte ar an bhfarraige, ag smaoineamh ar an "HPLC doo-hickey" a bhí invented ach a thástáil mo shláinte. Má tá tú ag mothú go smior ag iarraidh do cheann a chuimilt thart ar chrómatagrafaíocht leachta ardfheidhmíochta (HPLC), tóg anáil. Ní hamháin bosca de chodanna daor é; is rince íogair é idir an cheimic agus an fhisic.
Sa saotharlann, deirimid go minic gurb é an chéim shoghluaiste "líne saoil" an chórais. Gan é, níl do shampla ach ina shuí in instealladh, ag dul in áit ar bith. Ach conas a roghnaíonn tú an "traein" ceart chun do mhóilíní a iompar chuig an brathadóir? Déanaimis é a bhriseadh síos mar go bhfuil muid ag comhrá thar chaife sa seomra briseadh.
1. Cad é HPLC, Really?
Ag a chroílár, baineann HPLC le scaradh. Smaoinigh air mar rás ina bhfuil an "rian" an chéim stadach (an colún) agus an "gaoth" ag brú na reathaithe ar a bhfuil an chéim soghluaiste hplc.
Tarlaíonn an draíocht toisc go bhfuil "cleamhnais éagsúla" ag móilíní éagsúla. Is breá le roinnt móilíní an chéim shoghluaiste agus súmáil isteach tríd an gcolún. Tá cuid eile "greamaitheach" - tá brú orthu ar an gcéim sheasta agus chun deiridh. Is é an difríocht luais seo a chruthaíonn na buaiceanna sin ar do chromatogram.
2. Gnáthchéim vs Céim Chéim
Is gnách é seo nuair a thosaíonn gach duine ag tarraingt a gcuid gruaige amach. I mo chuid blianta cleachtaidh, fuair mé amach gurb é an bealach is éasca chun é seo a mheabhrú ná breathnú ar polaraíocht.
A. Crómatagrafaíocht Ghnáthchéime
Is é seo an bealach "sean-scoil". I gcrómatagrafaíocht ghnáthchéime, is é an phas seasta ná polar - smaoinigh uirthi mar mhaighnéad do mhóilíní polacha. Tá an chéim shoghluaiste a úsáidimid anseo neamhpholach, de ghnáth tuaslagóirí cosúil le heacsán nó heiptín.
-
An Loighic: Coinníonn an colún polach móilíní “greamaitheach” polar siar. Níonn móilíní neamhpholacha amach go tapa leis an gcéim soghluaiste neamhpholach.
-
An Leid Pro: Má mhéadaíonn tú polaraíocht do chéim shoghluaiste (ag cur beagán isopropanol leis), bogfaidh do shamplaí níos tapúla.
B. Crómatagrafaíocht Chéim Droim ar Ais
Inniu, is é seo an caighdeán óir. Is dócha go mbaineann 90% den obair a dhéanaim sa tsaotharlann le crómatagrafaíocht droim ar ais. Anseo, táimid ag smeach an script. Tá an colún neamhpholach (hidreafóbach, cosúil le ola), agus tá an chéim soghluaiste polar (meascán uisce agus meatánól nó aicéatóintríle de ghnáth).
-
An Loighic: Téann móilíní uisce-ghrámhara (polar) tríd mar is fuath leo an colún olach. Cloíonn móilíní saill-ghrámhara (neamhpholacha) leis an gcolún cosúil le gliú.
-
An fáth gur breá linn é: Tá sé intuartha, ilúsáideach, agus úsáideann sé tuaslagóirí uisce-bhunaithe atá níos éasca a bhainistiú.
3. An "Riail Órga" de Cháilíocht Tuaslagóirí
Feicfidh tú "Grád HPLC" ar lipéid ar chúis. Ná fiú smaoineamh ar ghrád ACS nó aon rud níos lú a úsáid. Cén fáth? Toisc go mbeidh na neamhíonachtaí "beag bídeach" sin i dtuaslagóirí de ghrád níos ísle ag carnadh ar do cholún le himeacht ama, ag marú do réiteach agus ag cruthú beanna taibhse aisteach.
Bain úsáid as uisce grád Milli-Q (18.2 MΩ.cm) i gcónaí. Má tá do chuid uisce "salach," beidh do bhunlíne cosúil le raon sléibhe, agus caithfidh tú trí lá ag iarraidh a dhéanamh amach cén fáth.
4. Degassing agus Scagachán: Na Killers Feidhmíochta
Is é aer namhaid na céime soghluaiste hplc. Faoi ghnáthbhrú, tuaslagann aer i do thuaslagóirí. Ach nuair a bhuaileann an tuaslagóir sin an caidéal, is féidir leis na boilgeoga bídeacha sin a bheith gafa sna comhlaí seiceála nó sa chill braite.
-
An Toradh: Athruithe sa ráta sreafa, bunlínte ag brú, agus amanna coinneála ag gluaiseacht.
-
An Deisigh: Bain úsáid as degassers ionsuite, nó sonication \/ scagachán bhfolús má tá tú ag rith measúnachtaí ard-íogaireachta.
Níl an scagachán Roghnach. Is féidir fiú cáithníní micreascópacha a bheith ag tuaslagóirí grád HPLC ón bpróiseas déantúsaíochta nó ón gcaipín buidéal. Scag trí membrane 0.22µm nó 0.45µm i gcónaí sula dtéann sé i dteagmháil le do thaiscumar. Is tasc 5 nóiméad é a fhéadfaidh do cholún a shábháil ó bhás roimh am.
5. Maoláin agus an Gaiste Gloine
I gcrómatagrafaíocht na céime droim ar ais, úsáidimid maoláin chun pH a choinneáil cobhsaí le haghaidh samplaí in-ianaithe.
-
Leid Pro: Má d'úsáid tú maolán inniu, nigh an córas le huisce íon \/ meascán orgánach sula dtéann tú abhaile. Mura ndéanann tú, criostalóidh na salainn sin do rónta caidéil agus scriosfaidh tú iad.
-
An Gaiste Gloine: An raibh a fhios agat, má tá pH do phas soghluaiste hplc > 8.0, go bhféadfaidh sé iain mhiotail a láisteadh ó thaiscumair ghloine? Athraigh go cruach dhosmálta nó coimeádáin phlaisteacha speisialaithe sna cásanna seo.
Go n-éirí go geal libh
Is ionann an chéim shoghluaiste a fháil i gceart agus 80% den chath i HPLC. Má tá tú ag streachailt le bunlínte "cairpéad shag", spikes brú, nó torthaí neamhréireacha, ná caith lá eile ag buille faoi thuairim.
Chaith mé na mílte uair an chloig ag an mbinse ag réiteach na saincheisteanna cruinne seo. Tá áthas orm i gcónaí beagán de chomhairle "cruthaithe sa saotharlann" a roinnt chun do thionscadal a chur ar an mbóthar arís.
Tagairtí
-
Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2011). Réamhrá ar Chrómatagrafaíocht Leachtach Nua-Aimseartha. 3ú Eagrán. John Wiley & Sons. (An "Caighdeán Óir" chun meicníochtaí deighilte HPLC a thuiscint).
-
Dolan, J. W. (2002). msgstr "Ullmhúchán Céime Soghluaiste." LCGC Meiriceá Thuaidh, Sraith Fabhtcheartú. (Treoir phraiticiúil riachtanach maidir le díghású agus scagachán).
-
Aparicio, R. (eag.). (2013). Lámhleabhar Optimization HPLC. Elsevier. (Sonraí cuimsitheacha ar pholaracht tuaslagóir agus roghnú maoláin i gcrómatagrafaíocht na céime droim ar ais).
-
Teicneolaíochtaí Agilent. msgstr "Treoir um Fhabhtcheartú Córais HPLC: Earráidí Coiteann Céim Soghluaiste a Sheachaint." Leabharlann Acmhainní Teicniúla.
-
Chorparáid Uiscí. "Prionsabail na Crómatagrafaíochta: Gnáthchéim vs. Céim Chéim." Sraith Oideachais.
-
Comhdháil Idirnáisiúnta ar Chomhchuibhiú (ICH). C2(R1) Nósanna Imeachta Anailíse a Bailíochtú: Téacs agus Modheolaíocht. (Caighdeán maidir le cainníochtú buaiclimistéir agus cobhsaíocht ama coinneála).
Béarla
Síneach
