Ro-ràdh
Tha mi air a bhith far a bheil thu - a’ coimhead air monitor aig 2 AM, a’ coimhead gluasad bun-loidhne mar bhàta air chall aig muir, a’ faighneachd an deach an “HPLC doo-hickey” a chruthachadh dìreach airson mo shlàinte a dhearbhadh. Ma tha thu a’ faireachdainn gòrach a’ feuchainn ri do cheann a phasgadh timcheall cromatagrafaidheachd lionn àrd-choileanadh (HPLC), gabh anail. Chan e dìreach bogsa de phàirtean daor a th’ ann; ’s e dannsa fìnealta a th’ ann eadar ceimigeachd agus fiosaig.
Anns an obair-lann, bidh sinn gu tric ag ràdh gur e an ìre gluasadach “loidhne beatha” an t-siostaim. Às aonais, tha an sampall agad dìreach na shuidhe ann an inneal-stealladh, a ’dol gun àite sam bith. Ach ciamar a roghnaicheas tu an "trèana" ceart gus do mholacilean a ghiùlan chun an lorgaire? Nach bris sinn sìos e mar gum biodh sinn a’ cabadaich thairis air cofaidh anns an t-seòmar fois.
1. Dè a th 'ann an HPLC, Really?
Aig a chridhe, tha HPLC mu dheidhinn dealachadh. Smaoinich air mar rèis far a bheil an “trac” mar an ìre pàipearachd (an colbh) agus is e an “gaoth” a tha a’ putadh nan ruitheadairean air adhart an ìre gluasadach hplc.
Bidh an draoidheachd a’ tachairt leis gu bheil “càirdeas” eadar-dhealaichte aig diofar mholacilean. Tha cuid de mholacilean dèidheil air an ìre gluasadach agus gluasad tron cholbh. Tha cuid eile “greigeach” - tha iad a’ brùthadh air an ìre pàipearachd agus a’ dol air dheireadh. Is e an eadar-dhealachadh luaths seo a tha a’ cruthachadh na stùcan sin air do chromatogram.
2. Ìre àbhaisteach vs Ìre air ais
Mar as trice is ann an seo a thòisicheas a h-uile duine a’ tarraing am falt a-mach. Anns na bliadhnaichean de chleachdadh agam, lorg mi an dòigh as fhasa air seo a chuimhneachadh le bhith a’ coimhead air polarity.
A. Chromatography Ìre àbhaisteach
Seo an dòigh “seann sgoil”. Ann an cromatagrafaidheachd ìre àbhaisteach, tha an ìre pàipearachd polar - smaoinich air mar magnet airson moileciuilean pòla. Tha an ìre gluasadach a bhios sinn a’ cleachdadh an seo neo-phòla, mar as trice fuasglaidhean mar hexane no heptane.
-
An loidsig: Bidh moileciuilean polar “greigeach” air an cumail air ais leis a’ cholbh phòrach. Bidh moileciuilean neo-polar a’ nighe a-mach gu sgiobalta leis an ìre gluasadach neo-polar.
-
An Pro Tip: Ma mheudaicheas tu polarity na h-ìre gluasadach agad (a ’cur beagan isopropanol ris), gluaisidh na sampallan agad nas luaithe.
B. Cromatography Ìre Cùl
An-diugh, is e seo an ìre òir. Is dòcha gu bheil 90% den obair a nì mi san obair-lann a’ toirt a-steach cromatagrafaidheachd ìre cùil. An seo, tionndaidhidh sinn an sgriobt. Tha an colbh neo-polar (hydrophobic, mar ola), agus tha an ìre gluasadach pòlach (mar as trice measgachadh de uisge agus methanol no acetonitrile).
-
An loidsig: Bidh moileciuilean a tha dèidheil air uisge (polar) a’ gluasad troimhe leis gu bheil gràin aca air a’ cholbh olach. Bidh moileciuilean a tha dèidheil air geir (neo-polar) a’ cumail ris a’ cholbh mar glaodh.
-
Carson a tha gaol againn air: Tha e sùbailte, sùbailte, agus a’ cleachdadh fuasglaidhean stèidhichte air uisge a tha nas fhasa a riaghladh.
3. An "Riaghladh Òir" de Càileachd Fuasgladh
Chì thu “HPLC Grade” air bileagan airson adhbhar. Na bi eadhon a’ smaoineachadh mu bhith a’ cleachdadh ìre ACS no dad nas lugha. Carson? Leis gum bi na neo-ionannachdan “beaga” sin ann am fuasglaidhean ìre nas ìsle a’ cruinneachadh air do cholbh thar ùine, a’ marbhadh do rùn agus a’ cruthachadh stùcan taibhse neònach.
Cleachd uisge ìre Milli-Q (18.2 MΩ.cm) an-còmhnaidh. Ma tha an t-uisge agad "salach," bidh do bhun-loidhne coltach ri sreath bheanntan, agus caithidh tu trì latha a 'feuchainn ri faighinn a-mach carson.
4. Degassing and Filtration: Na Luchd-marbhadh Coileanaidh
Tha adhair na nàmhaid aig ìre gluasadach hplc. Fo chuideam àbhaisteach, bidh èadhar a 'leaghadh anns na solventan agad. Ach aon uair ‘s gu bheil an solvent sin a’ bualadh air a ’phump, faodaidh na builgeanan beaga bìodach sin a bhith glaiste anns na bhalbhaichean sgrùdaidh no anns a’ chill lorgaire.
-
An Toradh: Caochlaidhean ìre sruth, bun-loidhne pulsing, agus amannan gleidhidh gluasadach.
-
An Fix: Cleachd degassers togte, no sonication \/ sìoladh falamh ma tha thu a’ ruith measaidhean àrd-chugallachd.
Chan eil sìoladh roghainneil. Faodaidh eadhon mìrean microscopach a bhith aig fuasglaidhean ìre HPLC bhon phròiseas saothrachaidh no caip botal. Criathraich an-còmhnaidh tro membran 0.22µm no 0.45µm mus suathadh e don loch tasgaidh agad. Is e gnìomh 5-mionaidean a th’ ann a dh’ fhaodas do cholbh a shàbhaladh bho bhàs ro-luath.
5. Buffers agus an Glass Trap
Ann an cromatagrafaidheachd ìre cùil, bidh sinn a’ cleachdadh bufairean gus pH a chumail seasmhach airson sampallan ionizable.
-
Pro Tip: Ma chleachd thu bufair an-diugh, nigh an siostam le uisge fìor-ghlan \/ measgachadh organach mus tèid thu dhachaigh. Mura dèan thu sin, bidh na salainn sin a’ criostalachadh agus a’ rùsgadh do ròin pumpaidh.
-
An Glainne Glainne: An robh fios agad mas e pH an ìre gluasadach hplc agad> 8.0, gun urrainn dha ions meatailt a leigeil a-mach à stòran-glainne? Gluais gu stàilinn gun staoin no soithichean plastaig sònraichte anns na cùisean sin.
Faigh sinn do sgaradh foirfe
Is e a bhith a’ faighinn an ìre gluasadach ceart 80% den bhlàr ann an HPLC. Ma tha thu a’ strì le bun-loidhne “shag-brat-ùrlair”, spìcean cuideam, no toraidhean neo-chunbhalach, na caith latha eile a’ tomhas.
Tha mi air mìltean de dh'uairean a thìde a chuir seachad aig a' bheing a' fuasgladh nan dearbh chùisean sin. Tha mi an-còmhnaidh toilichte beagan comhairle “dhearbhte le obair-lann” a cho-roinn gus do phròiseact fhaighinn air ais air an t-slighe.
Iomraidhean
-
Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2011). Ro-ràdh do Chromatography Liquid Nuadh. 3mh Deasachadh. Iain Wiley & a Mhic. (An "Gold Standard" airson tuigse fhaighinn air dòighean dealachaidh HPLC).
-
Dolan, J. W. (2002). msgstr "Ag ullachadh ìre gluasadach." LCGC Ameireaga a-Tuath, Sreath Fuasgladh Trioblaidean. (Stiùireadh practaigeach riatanach airson degassing agus sìoladh).
-
Aparicio, R. (deas.). (2013). Leabhar-làimhe Optimization HPLC. Elsevier. (Dàta coileanta air polarity fuasglaidh agus taghadh bufair ann an cromatagrafaidheachd ìre cùil).
-
Teicneòlasan Agilent. "Stiùireadh Fuasgladh Trioblaidean Siostam HPLC: A 'seachnadh Mearachdan Ìre Fòn-làimhe Coitcheann." Leabharlann goireasan teicnigeach.
-
Companaidh Uisgeachan. "Prionnsabalan cromatagrafaidheachd: Ìre àbhaisteach vs. Ìre air ais." Sreath Foghlaim.
-
Co-labhairt Eadar-nàiseanta air Co-sheirm (ICH). Q2(R1) Dearbhadh Modhan Mion-sgrùdaidh: Teacsa agus Modh-obrach. (Standard airson àireamhachadh sgìre as àirde agus seasmhachd ùine gleidhidh).
Beurla
Sìnis
