Guía completa para o pretratamento de mostras por HPLC: filtración, extracción e derivación
Novas
categorías
CONSULTA

Pretratamento da mostra de HPLC - Guía paso a paso

21 de outubro de 2025
ETIQUETAS:

Visión xeral do pretratamento da mostra

O pretratamento da mostra inclúe todas as operacións antes da inxección. Ademais de pesar, disolver e diluír, tamén inclúe os seguintes pasos:

  • Filtración
  • Extracción
  • Derivatización (derivación previa á columna)
  • Cromatografía líquida (cromatografía en columna de baixa presión)

O pretratamento pódese realizar de forma manual ou automatizada. Coñeces o pretratamento da mostra?


Derivatización

Algunhas mostras aínda non se poden inxectar directamente despois do pretratamento. A derivación é necesaria para facer que os compostos sen absorción de UV ou fluorescencia sexan detectables por detectores de UV ou fluorescencia.

  • Mellora a sensibilidade
  • Mellora a separación (cambio de calidade)

Os posibles problemas inclúen a perda de mostra, a contaminación, as reaccións incompletas ou varios subprodutos, que poden afectar á precisión ou introducir erros.

Filtración de mostras

As mostras de LC deben ser uniformes e libres de partículas; partículas poden danar o inxector ou bloquear a columna. Os pasos inclúen:

  • Axite a mostra antes da inxección e comprobe se hai partículas, turbidez ou emulsións
  • Se se observan partículas, filtra a mostra cunha membrana que poida reter partículas ≥0,15 μm

Problemas potenciais: contaminación da mostra, concentración de compoñentes que reducen a adsorción e erros que provocan a evaporación do disolvente.

Métodos de extracción

A extracción separa os analitos dos codisolventes ou elimina substancias interferentes (por exemplo, proteínas). Os disolventes orgánicos deben ser de baixa toxicidade, volátiles, baixos en impurezas e disolver ben a mostra.

Disolventes comúns: éter dietílico, acetato de etilo, diclorometano, cloroformo, benceno ou mesturas.

Despois da extracción, as mostras pódense inxectar directamente ou concentrarse para aumentar a concentración e sensibilidade do analito.

Extracción de mostras solubles en auga

  1. Compoñentes e sales ácidos: extraer as impurezas con disolvente orgánico, axustar a ácido, despois extraer ou inxectar; ou secar baixo N₂ e disolver nun disolvente apropiado antes da inxección.
  2. Compoñentes básicos e sales: extraer as impurezas con disolvente orgánico, axustar ao básico, despois extraer ou inxectar; ou secar baixo N₂ e disolver nun disolvente apropiado antes da inxección.
  3. Compoñentes neutros: extraer as impurezas con disolvente orgánico e analizar directamente mediante cromatografía en fase inversa.


Extracción de mostras liposolubles

Extraer con disolvente orgánico ou inxectar directamente; ou secar baixo N₂ e disolver nun disolvente apropiado antes da inxección.


Fontes de contaminación

Fontes potenciais de contaminación na análise:

Tipo de contaminación

Fonte

Medidas de prevención

Ambiental

Gases nocivos, po, aerosois

Manter a sala de instrumentos illada, limpa; instalar AC; controlar a humidade <70%; evitar a humidade, a corrosión, as vibracións

Contenedores

Vidro, cerámica, cuarzo, material de laboratorio plástico

Seleccione os recipientes axeitados para o tipo de mostra; limpar a fondo

Reactivos

Reactivos non cromatográficos

Use reactivos de grao cromatográfico, de alta pureza ou de grao analítico


Preparación de solución estándar

  • Prepare primeiro a solución estándar interna; utilizar o mesmo lote en patróns e mostras para reducir os erros
  • As substancias deben ser de grao cromatográfico e estables
  • Almacene as solucións estándar en botellas marróns a baixa temperatura
  • Para as vitaminas, use matraz aforado marrón ou protexa da luz


Problemas comúns no pretratamento e solucións da mostra

Problema

Causa

Solución

Picos non relacionados no cromatograma

Contaminación do filtro

  1. Mollar o filtro no disolvente da mostra e probar a inxección

  2. Cambiar o tipo de filtro

  3. Utiliza técnicas de limpeza alternativas

Baixa resposta de pico (especialmente mostras de baixa concentración)

Adsorción na superficie do filtro

  1. Cambiar o tipo de filtro

  2. Procesar todas as mostras nas mesmas condicións

  3. Utiliza técnicas de limpeza alternativas

Recuperación baixa

Extracción incompleta

  1. Aumente o tempo de extracción, use disolvente quente

  2. Axustar o método de limpeza

Picos ensanchados, duración da columna reducida

Interferencia da mostra e contaminación

Mellorar o método de limpeza

Mala precisión

Recuperación incompleta

  1. Optimizar ou substituír a derivación, separación, extracción ou outras condicións

  2. Use o manexo automatizado para mellorar a precisión

Consulta