Metrize Koule a: Gid yon Veteran laboratwa pou faz mobil HPLC

Entwodiksyon

Mwen te kote w ye a—m ap gade yon monitè a 2 AM, m ap gade yon derive debaz tankou yon bato ki pèdi nan lanmè, m ap mande si "HPLC doo-hickey" te envante jis pou teste saniti mwen. Si w santi w delire w ap eseye vlope tèt ou nan kromatografi likid segondè pèfòmans (HPLC), pran yon souf. Li pa jis yon bwat pati chè; li se yon dans delika ant chimi ak fizik.

Nan laboratwa a, nou souvan di faz mobil lan se "liy lavi" nan sistèm nan. San li, echantiyon ou jis chita nan yon piki, li ale okenn kote. Men, ki jan ou chwazi "tren" bon pou pote molekil ou nan detektè a? Ann kraze li tankou nou ap koze sou yon kafe nan sal la.

1. Ki sa ki HPLC, reyèlman?

Nan nwayo li yo, HPLC se sou separasyon. Panse a li tankou yon kous kote "tras" se faz estasyonè (kolòn nan) ak "van" pouse kourè yo ansanm se faz mobil hplc.

Majik la rive paske diferan molekil gen diferan "afinite." Gen kèk molekil ki renmen faz mobil lan epi rale nan kolòn nan. Gen lòt ki "kolan"-yo gen yon kraze sou faz nan estasyonè ak reta dèyè. Diferans sa a nan vitès se sa ki kreye pik sa yo sou kwomatogram ou a.

2. Faz nòmal vs Faz ranvèse

Sa a se nòmalman kote tout moun kòmanse rale cheve yo deyò. Nan ane mwen yo nan pratik, mwen te jwenn fason ki pi fasil yo sonje sa a se pa gade nan polarite.

A. Kwomatografi Faz Nòmal

Sa a se fason "ansyen lekòl la". Nan kwomatografi faz nòmal, faz estasyonè a se polè-panse a li tankou yon leman pou molekil polè. Faz mobil nou itilize isit la se ki pa polè, anjeneral solvang tankou hexane oswa heptane.

• Lojik la: molekil polè "kolan" yo kenbe pa kolòn polè a. Molekil ki pa polè lave byen vit ak faz mobil ki pa polè.

• Konsèy la Pro: Si ou ogmante polarite faz mobil ou a (ajoute yon ti jan nan izopropanol), echantiyon ou yo pral aktyèlman deplase pi vit.

B. Kwomatografi ranvèse faz

Jodi a, sa a se estanda lò a. Pwobableman 90% nan travay mwen fè nan laboratwa a enplike nan chromatografi faz ranvèse. Isit la, nou baskile script la. Kolòn nan pa polè (idrofob, tankou lwil oliv), ak faz mobil lan se polè (anjeneral yon melanj de dlo ak metanol oswa asetonitrile).

• Lojik la: Molekil ki renmen dlo (polè) rale paske yo rayi kolòn lwil la. Molekil ki renmen grès (ki pa polè) kole nan kolòn nan tankou lakòl.

• Poukisa nou renmen li: Li previzib, versatile, epi li sèvi ak solvang ki baze sou dlo ki pi fasil pou jere.

3. "Règleman an lò" nan bon jan kalite sòlvan

Ou pral wè "HPLC Grade" sou etikèt yo pou yon rezon. Pa menm panse osijè de itilize ACS klas ou anyen mwens. Poukisa? Paske "ti" enpurte sa yo nan solvang ki pi ba yo pral akimile sou kolòn ou sou tan, touye rezolisyon ou ak kreye pik fantom etranj.

Toujou sèvi ak dlo Milli-Q (18.2 MΩ.cm). Si dlo ou a "sal," debaz ou a pral sanble ak yon seri mòn, epi w ap pase twa jou ap eseye konnen poukisa.

4. Degaze ak Filtrasyon: Pèfòmans Asasen yo

Air se lènmi faz mobil hplc. Anba presyon nòmal, lè a fonn nan solvang ou yo. Men, yon fwa sòlvan sa a frape ponp lan, ti bul sa yo ka bloke nan tiyo chèk yo oswa selil detektè a.

• Rezilta a: Fluctuations pousantaj koule, liy debaz enpulsyon, ak tan retansyon k ap deplase.

• Ranje a: Sèvi ak degazeur entegre, oswa sonication \/ filtraj vakyòm si w ap kouri tès sansiblite segondè.

Filtrasyon pa si ou vle. Menm Solvang klas HPLC ka gen patikil mikwoskopik ki soti nan pwosesis fabrikasyon an oswa bouchon boutèy la. Toujou filtre nan yon manbràn 0.22µm oswa 0.45µm anvan li manyen rezèvwa w la. Li se yon travay 5 minit ki ka sove kolòn ou soti nan yon lanmò twò bonè.

5. Tanpon ak pèlen an Glass

Nan chromatografi faz ranvèse, nou itilize tanpon pou kenbe pH ki estab pou echantiyon ionizable.

• Konsèy Pro: Si w te itilize yon tanpon jodi a, lave sistèm nan ak dlo pi \/ melanj òganik anvan ou ale lakay ou. Si ou pa fè sa, sèl sa yo pral kristalize epi dechire sele ponp ou yo.

• Pèlen an vè: Èske w te konnen si pH faz mobil hplc ou a > 8.0, li ka aktyèlman lesivaj iyon metal nan rezèvwa vè? Chanje nan asye pur oswa resipyan plastik espesyalize nan ka sa yo.

Ann jwenn separasyon ou pafè

Jwenn faz mobil lan dwat se 80% nan batay la nan HPLC. Si w ap konbat ak liy debaz "tapi shag", pwen presyon, oswa rezilta enkonsistan, pa gaspiye yon lòt jou pou devine.

Mwen te pase dè milye èdtan nan ban an depanaj pwoblèm egzak sa yo. Mwen toujou kontan pataje yon ti konsèy "pwouve nan laboratwa" pou reprann pwojè w sou wout la.

• WhatsApp: 86 18338832256

• Imèl:boonemi@aijirenvial.com
  

Referans

• Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2011). Entwodiksyon nan chromatografi likid modèn. 3yèm edisyon. John Wiley & Sons. ("Gold Standard" pou konprann mekanis separasyon HPLC).

• Dolan, J. W. (2002). "Preparasyon Faz mobil." LCGC Amerik di Nò, Seri Depanaj. (Esansyèl gid pratik pou degaze ak filtraj).

• Aparicio, R. (Ed.). (2013). Manyèl Optimizasyon HPLC. Elsevier. (Done konplè sou polarite sòlvan ak seleksyon tanpon nan kwomatografi faz ranvèse).

• Teknoloji Agilent. "HPLC System Troubleshooting Guide: Evite komen erè faz mobil." Bibliyotèk Resous Teknik.

• Waters Corporation. "Prensip chromatografi: Faz nòmal vs faz ranvèse." Seri Edikasyon.

• Konferans Entènasyonal sou Harmonizasyon (ICH). Q2(R1) Validasyon Pwosedi Analitik: Tèks ak Metodoloji. (Estanda pou quantification zòn pik ak estabilite tan retansyon).