Հոսքի յուրացում. լաբորատոր վետերանի ուղեցույց HPLC շարժական փուլերի համար

Ներածություն

Ես եղել եմ այնտեղ, որտեղ դուք կաք՝ գիշերը ժամը 2-ին նայելով մոնիտորին, դիտելով ելակետային գծի վրա, ինչպես կորած նավը ծովում, մտածելով, թե արդյոք «HPLC doo-hickey»-ն ստեղծվել է միայն իմ ողջամտությունը ստուգելու համար: Եթե ​​դուք զառանցանք եք զգում՝ փորձելով ձեր գլուխը փաթաթել բարձր արդյունավետության հեղուկ քրոմատագրման (HPLC) շուրջ, շունչ քաշեք: Դա պարզապես թանկարժեք մասերի տուփ չէ. դա նուրբ պար է քիմիայի և ֆիզիկայի միջև:

Լաբորատորիայում մենք հաճախ ասում ենք, որ շարժական փուլը համակարգի «կյանքի գիծն» է: Առանց դրա, ձեր նմուշը պարզապես նստած է ներարկիչի մեջ և ոչ մի տեղ չի գնում: Բայց ինչպե՞ս եք ընտրել ճիշտ «գնացքը»՝ ձեր մոլեկուլները դետեկտոր տեղափոխելու համար: Եկեք բաժանենք այն, կարծես ճաշարանում սուրճի շուրջ զրուցում ենք:

1. Ի՞նչ է HPLC-ն, իսկապես:

Իր հիմքում HPLC-ն տարանջատման մասին է: Մտածեք դրա մասին մրցավազքի նման, որտեղ «ուղին» անշարժ փուլն է (շարասյունը), իսկ «քամին», որը վազորդներին հրում է երկայնքով, hplc շարժական փուլն է:

Կախարդանքը տեղի է ունենում, քանի որ տարբեր մոլեկուլներ ունեն տարբեր «հարաբերություններ»: Որոշ մոլեկուլներ սիրում են շարժական փուլը և մեծացնում են սյունակը: Մյուսները «կպչուն» են. նրանք հակված են ստացիոնար փուլին և հետ են մնում: Արագության այս տարբերությունն այն է, ինչ ստեղծում է այդ գագաթները ձեր քրոմատոգրամի վրա:

2. Նորմալ փուլ ընդդեմ հակադարձ փուլի

Սովորաբար այստեղ բոլորը սկսում են իրենց մազերը քաշել: Իմ պրակտիկայի տարիներին ես գտել եմ սա հիշելու ամենահեշտ ձևը բևեռականությանը նայելն է:

A. Նորմալ փուլային քրոմատոգրաֆիա

Սա «հին դպրոց» ճանապարհն է։ Սովորական ֆազային քրոմատոգրաֆիայում անշարժ փուլը բևեռային է, այն որպես մագնիս բևեռային մոլեկուլների համար: Շարժական փուլը, որը մենք օգտագործում ենք այստեղ, ոչ բևեռային է, սովորաբար լուծիչներ, ինչպիսիք են հեքանը կամ հեպտանը:

• Տրամաբանություն. բևեռային «կպչուն» մոլեկուլները հետ են պահվում բևեռային սյունակի կողմից: Ոչ բևեռային մոլեկուլները արագորեն լվանում են ոչ բևեռային շարժական փուլով:

• Pro խորհուրդ. Եթե բարձրացնեք ձեր շարժական փուլի բևեռականությունը (ավելացնելով մի քիչ իզոպրոպանոլ), ձեր նմուշներն իրականում ավելի արագ կշարժվեն:

Բ. Հակադարձ փուլային քրոմատոգրաֆիա

Այսօր սա ոսկու ստանդարտն է։ Հավանաբար այն աշխատանքի 90%-ը, որը ես անում եմ լաբորատորիայում, ներառում է հակադարձ փուլային քրոմատագրություն: Այստեղ մենք շրջում ենք սցենարը: Սյունակը ոչ բևեռ է (ջրաֆոբ, ինչպես նավթը), իսկ փուլային շարժականը բևեռային է (սովորաբար ջրի և մեթանոլի կամ ացետոնիտրիլի խառնուրդ):

• Տրամաբանություն. Ջրասեր (բևեռային) մոլեկուլները մեծանում են, քանի որ ատում են յուղոտ սյունը: Ճարպասեր (ոչ բևեռային) մոլեկուլները սոսինձի պես կպչում են սյունակին։

• Ինչու ենք մենք սիրում այն: Այն կանխատեսելի է, բազմակողմանի և օգտագործում է ջրի վրա հիմնված լուծիչներ, որոնք ավելի հեշտ է կառավարել:

3. Վճարունակ որակի «Ոսկե կանոն».

Դուք պիտակների վրա կտեսնեք «HPLC Grade» մի պատճառով: Նույնիսկ մի մտածեք ACS դասի կամ ավելի քիչ բան օգտագործելու մասին: Ինչո՞ւ։ Որովհետև ցածր կարգի լուծիչների այդ «փոքրիկ» կեղտերը ժամանակի ընթացքում կկուտակվեն ձեր սյունակում՝ սպանելով ձեր լուծումը և ստեղծելով տարօրինակ ուրվականների գագաթներ:

Միշտ օգտագործեք Milli-Q (18,2 MΩ.սմ) կարգի ջուր: Եթե ​​ձեր ջուրը «կեղտոտ» է, ձեր ելակետը լեռնաշղթայի տեսք կունենա, և դուք երեք օր կծախսեք՝ պարզելու, թե ինչու:

4. Գազազերծում և զտում. կատարման մարդասպանները

Օդը hplc շարժական փուլի թշնամին է: Նորմալ ճնշման ներքո օդը լուծվում է ձեր լուծիչների մեջ: Բայց երբ այդ լուծիչը հարվածում է պոմպին, այդ փոքրիկ փուչիկները կարող են թակարդվել ստուգիչ փականներում կամ դետեկտորի խցում:

• Արդյունքը. Հոսքի արագության տատանումներ, իմպուլսային բազային գծեր և շարժվող պահպանման ժամանակներ:

• Ուղղում. Օգտագործեք ներկառուցված գազազերծիչներ կամ վակուումային ֆիլտրում, եթե բարձր զգայունության անալիզներ եք կատարում:

Զտումը կամընտիր չէ: Նույնիսկ HPLC կարգի լուծիչները կարող են մանրադիտակային մասնիկներ ունենալ արտադրական գործընթացից կամ շշի կափարիչից: Միշտ զտեք 0,22 մկմ կամ 0,45 մկմ թաղանթով, նախքան այն դիպչել ձեր ջրամբարին: Դա 5 րոպեանոց խնդիր է, որը կարող է փրկել ձեր սյունակը վաղաժամ մահից:

5. Բուֆերները և ապակե թակարդը

Հակադարձ փուլային քրոմատոգրաֆիայում մենք օգտագործում ենք բուֆերներ՝ իոնացնող նմուշների համար pH-ը կայուն պահելու համար:

• Պրոֆեսիոնալ խորհուրդ. Եթե այսօր օգտագործել եք բուֆեր, ապա տուն գնալուց առաջ համակարգը լվացեք մաքուր ջրով\/օրգանական խառնուրդով: Եթե ​​դա չանեք, այդ աղերը կբյուրեղանան և կփշրվեն ձեր պոմպի կնիքները:

• Ապակե թակարդ. Դուք գիտե՞ք, որ եթե ձեր hplc-ի շարժական փուլի pH-ը > 8.0 է, այն իրականում կարող է մետաղական իոններ հանել ապակե ջրամբարներից: Այս դեպքերում անցեք չժանգոտվող պողպատից կամ մասնագիտացված պլաստիկ տարաներին:

Եկեք կատարյալ դարձնենք ձեր բաժանումը

Բջջային փուլը ճիշտ ձեռք բերելը HPLC-ում պայքարի 80%-ն է: Եթե ​​դուք պայքարում եք «շագ գորգի» ելակետային գծերի, ճնշման աճի կամ անհամապատասխան արդյունքների հետ, մի վատնեք ևս մեկ օր գուշակություններով:

Ես հազարավոր ժամեր եմ անցկացրել նստարանի մոտ՝ լուծելով հենց այս խնդիրները: Ես միշտ ուրախ եմ կիսվել մի փոքր «լաբորատորիայում ապացուցված» խորհուրդներով՝ ձեր նախագիծը ուղու վրա վերադարձնելու համար:

• WhatsApp: 86 18338832256

• Էլ.boonemi@aijirenvial.com
  

Հղումներ

• Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2011): Ներածություն ժամանակակից հեղուկ քրոմատագրության մեջ: 3-րդ հրատարակություն. Ջոն Ուայլի և որդիներ. («Ոսկե ստանդարտ» HPLC-ի տարանջատման մեխանիզմները հասկանալու համար):

• Dolan, J. W. (2002): «Բջջային փուլի պատրաստում». LCGC Հյուսիսային Ամերիկա, Troubleshooting Series. (Գազազերծման և զտման հիմնական գործնական ուղեցույց):

• Aparicio, R. (Խմբ.). (2013). HPLC օպտիմիզացման ձեռնարկ: Էլսեվիեր. (Հակադարձ փուլային քրոմատոգրաֆիայում լուծիչների բևեռականության և բուֆերի ընտրության վերաբերյալ համապարփակ տվյալներ):

• Agilent Technologies. «HPLC System Troubleshooting Guide. Avoiding Common Mobile Phase Errors»: Տեխնիկական ռեսուրսների գրադարան.

• Waters Corporation. «Քրոմատագրության սկզբունքները. նորմալ փուլ ընդդեմ հակադարձ փուլի»: Կրթության շարք.

• Ներդաշնակեցման միջազգային գիտաժողով (ICH). Q2(R1) Վերլուծական ընթացակարգերի վավերացում. տեքստ և մեթոդիկա. (Ստանդարտ գագաթնակետային տարածքի քանակականացման և պահպանման ժամանակի կայունության համար):