Perlakuan awal sampel mencakup semua operasi sebelum injeksi. Selain menimbang, melarutkan, dan mengencerkan, juga melibatkan langkah-langkah berikut:

Filtrasi
Ekstraksi
Derivatisasi (derivatisasi pra-kolom)
Kromatografi cair (kromatografi kolom tekanan rendah)

Pretreatment dapat dilakukan secara manual atau otomatis. Apakah Anda familiar dengan sampel pretreatment?

Derivatisasi

Beberapa sampel masih tidak dapat langsung disuntikkan setelah pra-perawatan. Derivatisasi diperlukan untuk membuat senyawa tanpa serapan UV atau fluoresensi dapat dideteksi oleh detektor UV atau fluoresensi.

Meningkatkan sensitivitas
Meningkatkan pemisahan (perubahan kualitas)

Masalah yang mungkin terjadi mencakup kehilangan sampel, kontaminasi, reaksi tidak lengkap, atau beberapa produk sampingan, yang dapat memengaruhi keakuratan atau menimbulkan kesalahan.

Filtrasi Sampel

Sampel LC harus seragam dan bebas partikel; partikel dapat merusak injektor atau menghalangi kolom. Langkah-langkahnya meliputi:

Kocok sampel sebelum injeksi dan periksa partikel, kekeruhan, atau emulsi
Jika terdapat partikel, saring sampel menggunakan membran yang dapat menahan partikel berukuran ≥0,15μm

Potensi masalah: kontaminasi sampel, adsorpsi mengurangi konsentrasi komponen, dan penguapan pelarut menyebabkan kesalahan.

Metode Ekstraksi

Ekstraksi memisahkan analit dari pelarut bersama atau menghilangkan zat pengganggu (misalnya protein). Pelarut organik harus memiliki toksisitas rendah, mudah menguap, rendah pengotor, dan melarutkan sampel dengan baik.

Pelarut umum: dietil eter, etil asetat, diklorometana, kloroform, benzena, atau campuran.

Setelah ekstraksi, sampel dapat disuntikkan secara langsung atau dipekatkan untuk meningkatkan konsentrasi dan sensitivitas analit.

Ekstraksi Sampel Larut Air

Komponen asam dan garam: ekstrak kotoran dengan pelarut organik, sesuaikan dengan asam, lalu ekstrak atau injeksi; atau keringkan di bawah N₂ dan larutkan dalam pelarut yang sesuai sebelum injeksi.
Komponen dasar dan garam: ekstrak pengotor dengan pelarut organik, sesuaikan dengan basa, lalu ekstrak atau suntik; atau keringkan di bawah N₂ dan larutkan dalam pelarut yang sesuai sebelum injeksi.
Komponen netral: mengekstrak pengotor dengan pelarut organik, kemudian menganalisis secara langsung dengan kromatografi fase terbalik.

Ekstraksi Sampel Larut Lemak

Ekstrak dengan pelarut organik atau suntikkan langsung; atau keringkan di bawah N₂ dan larutkan dalam pelarut yang sesuai sebelum injeksi.

Sumber Kontaminasi

Sumber kontaminasi potensial dalam analisis:

Jenis Kontaminasi	Sumber	Tindakan Pencegahan
Lingkungan	Gas berbahaya, debu, aerosol	Jaga ruang instrumen tetap terisolasi dan bersih; pasang AC; mengontrol kelembaban <70%; mencegah kelembaban, korosi, getaran
Kontainer	Peralatan laboratorium kaca, keramik, kuarsa, plastik	Pilih wadah yang sesuai untuk setiap jenis sampel; bersihkan secara menyeluruh
Reagen	Reagen tingkat non-kromatografi	Gunakan reagen tingkat kromatografi, kemurnian tinggi, atau tingkat analitis

Persiapan Solusi Standar

Siapkan solusi standar internal terlebih dahulu; gunakan batch yang sama dalam standar dan sampel untuk mengurangi kesalahan
Zat harus bermutu kromatografi dan stabil
Simpan larutan standar dalam botol coklat pada suhu rendah
Untuk vitamin, gunakan labu ukur berwarna coklat atau lindungi dari cahaya

Masalah Umum dalam Pretreatment Sampel dan Solusinya

Masalah	Sebab	Solusi
Puncak yang tidak berhubungan dalam kromatogram	Filter kontaminasi	Rendam filter dalam pelarut sampel dan uji injeksi Ubah jenis filter Gunakan teknik pembersihan alternatif
Respon puncak rendah (terutama sampel dengan konsentrasi rendah)	Adsorpsi pada permukaan filter	Ubah jenis filter Proses semua sampel dalam kondisi yang sama Gunakan teknik pembersihan alternatif
Pemulihan rendah	Ekstraksi tidak lengkap	Tingkatkan waktu ekstraksi, gunakan pelarut panas Sesuaikan metode pembersihan
Puncak yang diperluas, masa pakai kolom yang lebih pendek	Gangguan sampel dan kontaminasi	Tingkatkan metode pembersihan
Presisi yang buruk	Pemulihan tidak lengkap	Mengoptimalkan atau mengganti derivatisasi, pemisahan, ekstraksi, atau kondisi lainnya Gunakan penanganan otomatis untuk meningkatkan presisi

Sebelumnya:

Efek Suhu dan Paparan Cahaya yang Sangat Tinggi\/Rendah terhadap Stabilitas Sampel: Teori & Metodologi

Berikutnya:

Kembali Ke Daftar