Memilih buffer yang tepat untuk fase seluler HPLC Anda sangat penting untuk mencapai pemisahan dan analisis yang optimal dari Anda sampel. Buffer membantu mempertahankan pH yang stabil, yang penting untuk mengendalikan keadaan ionisasi analit Anda, sehingga mempengaruhi waktu retensi dan bentuk puncaknya. Di bawah ini adalah tinjauan terperinci tentang cara memilih buffer terbaik untuk aplikasi HPLC Anda.

Apakah Anda tahu tentang persiapan sampel HPLC? Klik artikel ini untuk mempelajari lebih lanjut: “Semua yang perlu Anda ketahui tentang persiapan sampel HPLC”

Pentingnya pemilihan buffer

Buffer adalah larutan yang pH tidak berubah setelah menambahkan sedikit asam atau basa. Berdasarkan komposisi mereka, buffer dapat diklasifikasikan sebagai asam atau basa. Efektivitas buffer ditentukan oleh PKA -nya, yang idealnya harus berada dalam ± 1 unit pH dari pH fase gerak yang diinginkan untuk kapasitas buffering yang optimal.

Faktor kunci untuk dipertimbangkan

1.ph Range: PH fase gerak harus setidaknya 2 unit pH dari PKA analit. Ini membantu menekan ionisasi analit asam atau basa, memaksimalkan retensi mereka pada kolom. Misalnya, jika analit adalah asam lemah dengan PKA 4,5, menggunakan fase gerak dengan pH sekitar 2,0 akan menyimpannya dalam keadaan non-ionisasi, meningkatkan retensi.

2. Tipe Buffer: Buffer umum yang digunakan dalam HPLC meliputi:

Buffer fosfat: Efektif dalam kisaran pH 2,0 hingga 8,0, buffer fosfat banyak digunakan karena stabilitas dan kompatibilitasnya dengan banyak analit. Mereka sangat cocok untuk aplikasi LC-UV.

Buffer asetat: Ini juga populer untuk uji LC-UV dan dapat digunakan dalam rentang pH yang sama dengan buffer fosfat.

Buffer volatil: Untuk aplikasi LC-MS, buffer volatil seperti format, asetat, dan amonium bikarbonat lebih disukai karena dapat dengan mudah dihilangkan selama proses spektrometri massa.

3. Konsentrasi Buffer: Konsentrasi awal yang khas untuk buffer dalam HPLC adalah antara 25-50 mM. Konsentrasi yang lebih tinggi dapat meningkatkan bentuk dan efisiensi puncak tetapi juga dapat menyebabkan presipitasi ketika dicampur dengan pelarut organik. Dianjurkan untuk menjaga konsentrasi buffer di bawah 25 mm untuk menghindari komplikasi.

4. Kecepatan Kimia: Selalu gunakan buffer tingkat kromatografi dengan kemurnian tinggi untuk mencegah kontaminasi dan memastikan hasil yang dapat diandalkan. Kotoran dapat menyebabkan interaksi dan variabilitas yang tidak terduga dalam waktu retensi.

Efek suhu: Suhu dapat mempengaruhi pH larutan buffer. Penting untuk mempersiapkan dan menyimpan buffer pada suhu yang konsisten untuk mempertahankan keefektifannya.

Ingin tahu 50 jawaban tentang vial HPLC, silakan periksa artikel ini: 50 pertanyaan paling sering diajukan tentang HPLC Vials

Tip Praktis untuk Persiapan Buffer

Metode persiapan: Buffer dapat disiapkan dengan mencampurkan jumlah equimolar dari komponen asam dan basa atau dengan titrasi larutan basa dengan asam. Hindari menyesuaikan pH setelah menambahkan pelarut organik, karena ini dapat menyebabkan hasil yang tidak konsisten.

Solusi Segar: Siapkan solusi buffer baru secara teratur untuk meminimalkan pertumbuhan mikroba dan degradasi komponen, yang dapat mempengaruhi kinerja kromatografi.

Menghindari korosi: buffer tertentu, seperti sitrat, dapat mengoreksi komponen stainless steel dari sistem HPLC. Pastikan pembilasan sistem secara menyeluruh setelah menggunakan buffer tersebut untuk mencegah kerusakan.

Kesimpulan

Memilih buffer yang tepat untuk fase seluler HPLC Anda sangat penting untuk mencapai hasil yang andal dan dapat direproduksi. Pertimbangkan pH, jenis buffer, konsentrasi, dan kemurnian saat memilih. Dengan mengikuti pedoman ini, Anda dapat mengoptimalkan metode HPLC Anda untuk secara efektif memisahkan dan menganalisis sampel Anda.

Ingin mengetahui harga vial HPLC, silakan periksa artikel ini: Harga HPLC Vials: 50 pertanyaan paling sering diajukan

Sebelumnya:

Bagaimana cara menggunakan tabung uji COD dengan benar untuk pengujian kualitas air?

Berikutnya:

Cara menghindari terobosan filter dalam filter jarum suntik