Okwu mmalite
Anọla m ebe ị nọ — na-ele anya na onye nleba anya n'elekere abụọ nke ụtụtụ, na-ekiri ihe mgbagharị ntọala dị ka ụgbọ mmiri furu efu n'oké osimiri, na-eche ma e chepụtara "HPLC doo-hickey" naanị iji nwalee ịdị ọcha m. Ọ bụrụ na ọ na-adị gị ụtọ ịnwa ịkechie isi gị gburugburu chromatography mmiri mmiri dị elu (HPLC), kuruo ume. Ọ bụghị naanị igbe nke akụkụ dị oke ọnụ; ọ bụ egwu siri ike n'etiti kemistri na physics.
N'ime ụlọ nyocha, anyị na-ekwukarị usoro mkpanaka bụ "akara ndụ" nke usoro ahụ. Enweghị ya, ihe nlele gị na-anọdụ ala na injector, na-agaghị ebe ọ bụla. Mana kedu ka ị ga-esi ahọrọ "ụgbọ oloko" ziri ezi iji buru ụmụ irighiri ihe gị gaa na onye nchọpụta? Ka anyị gbarie ya ka anyị na-akparịta ụka na kọfị n'ime ụlọ ezumike.
1. Gịnị bụ HPLC, n'ezie?
Na isi ya, HPLC bụ maka nkewa. Chee echiche banyere ya dị ka agbụrụ ebe "egwu" bụ oge kwụ ọtọ (kọlụm) na "ifufe" na-ebugharị ndị na-agba ọsọ bụ usoro mkpanaaka hplc.
Ime anwansi na-eme n'ihi na ụmụ irighiri ihe dị iche iche nwere "mmekọrịta" dị iche iche. Ụfọdụ ụmụ irighiri ihe na-amasị usoro mkpanaka ma bugharịa site na kọlụm. Ndị ọzọ "na-arapara n'ahụ" - ha na-enwe mmasị na oge a na-akwụghị ụgwọ ma laa azụ. Nke a dị iche na ọsọ bụ ihe na-emepụta ọnụ ọgụgụ ndị ahụ na chromatogram gị.
2. Usoro nkịtị vs. Agbaghachi agba
Nke a na-abụkarị ebe onye ọ bụla na-amalite ịdọpụ ntutu isi ha. N'ime afọ m nke omume, achọtala m ụzọ kachasị mfe iji cheta nke a bụ ilele polarity.
A. Chromatography nke oge nkịtị
Nke a bụ ụzọ "ụlọ akwụkwọ ochie". Na chromatography nke nkịtị, akụkụ ahụ na-eguzo bụ polar - chee ya dị ka magnet maka molecule polar. Usoro mkpanaka anyị na-eji ebe a abụghị polar, na-emekarị ihe mgbaze dị ka hexane ma ọ bụ heptane.
-
Ihe mgbakasị ahụ: kọlụm pola na-ejide ụmụ irighiri ihe ndị "na-arapara n'ahụ". Mkpụrụ ndụ ndị na-abụghị polar na-asachapụ ngwa ngwa site na usoro mkpanaka na-abụghị polar.
-
Ndụmọdụ Pro: Ọ bụrụ na ị na-abawanye polarity nke usoro mkpanaka gị (na-agbakwunye ntakịrị isopropanol), ihe nlele gị ga-aga ngwa ngwa.
B. Chromatography na-atụgharị oge
Taa, nke a bụ ọkọlọtọ ọla edo. Eleghị anya, 90% nke ọrụ m na-arụ n'ụlọ nyocha gụnyere ntụgharị chromatography nke oge. N'ebe a, anyị na-atụgharị edemede ahụ. Kọlụm na-abụghị polar (hydrophobic, dị ka mmanụ), na usoro mobile bụ polar (na-emekarị ngwakọta nke mmiri na methanol ma ọ bụ acetonitrile).
-
Ihe mgbagha: ụmụ irighiri mmiri na-ahụ n'anya (polar) na-agafe n'ihi na ha kpọrọ kọlụm mmanu asị. Mkpụrụ ndụ abụba na-ahụ n'anya (na-abụghị polar) na-arapara na kọlụm dị ka gluu.
-
Ihe mere anyị ji hụ ya n'anya: A na-ahụ ya anya, na-agbanwe agbanwe, ma na-eji ihe mgbaze mmiri na-adị mfe ijikwa.
3. The "Golden Iwu" nke mgbaze Ogo
Ị ga-ahụ "HPLC Grade" na akara maka ihe kpatara ya. Echela echiche maka iji akara ACS ma ọ bụ ihe ọ bụla dị obere. Gịnị kpatara? N'ihi na adịghị ọcha ndị ahụ "obere" na ihe mgbaze dị ala ga-agbakọta na kọlụm gị ka oge na-aga, na-egbu mkpebi gị ma na-emepụta ọnụ ọgụgụ mmụọ dị egwu.
Jiri Milli-Q (18.2 MΩ.cm) mmiri ọkwa mgbe niile. Ọ bụrụ na mmiri gị "dị unyi," ntọala gị ga-adị ka ugwu ugwu, ị ga-anọkwa ụbọchị atọ iji chọpụta ihe kpatara ya.
4. Degassing na Filtration: The Performance Killers
Ikuku bụ onye iro nke usoro mkpanaaka hplc. N'okpuru nrụgide nkịtị, ikuku na-agbaze n'ime ihe mgbaze gị. Ma ozugbo ihe mgbaze ahụ dabara mgbapụta ahụ, obere afụ ndị ahụ nwere ike ịbanye na valvụ nlele ma ọ bụ cell nchọpụta.
-
Nsonaazụ a: Mgbanwe ọnụ ọgụgụ na-efe efe, usoro ihe nrịbama, na oge njigide na-akpụ akpụ.
-
The Idozi: Jiri wuru-na degassers, ma ọ bụ sonication / agụụ filtration ma ọ bụrụ na ị na-agba ọsọ elu-sensitivity assays.
Nchacha abụghị nhọrọ. Ọbụna ihe mgbaze ọkwa HPLC nwere ike ịnwe ihe microscopic sitere na usoro nrụpụta ma ọ bụ okpu karama. Na-enyocha mgbe niile site na akpụkpọ ahụ 0.22µm ma ọ bụ 0.45µm tupu ọ emetụ ebe nchekwa gị aka. Ọ bụ ọrụ nkeji 5 nke nwere ike ịzọpụta kọlụm gị na ọnwụ akabeghị aka.
5. Buffers na iko ọnyà
Na ntụgharị chromatography akụkụ, anyị na-eji ihe nchekwa iji mee ka pH kwụsie ike maka nlele ionizable.
-
Ndụmọdụ Pro: Ọ bụrụ na ị na-eji ihe nchekwa taa, saa sistemu ahụ na mmiri dị ọcha / organic mix tupu ị laa n'ụlọ. Ọ bụrụ na i meghị ya, nnu ndị ahụ ga-akpụ akpụ wee kụbie akara mgbapụta gị.
-
Ọnyà iko: Ị maara na ọ bụrụ na pH mkpanaka gị nke hplc bụ> 8.0, ọ nwere ike nweta ion metal site na iko mmiri? Gbanwee na igwe anaghị agba nchara ma ọ bụ akpa rọba pụrụ iche n'ọnọdụ ndị a.
Ka anyị mee nkewa gị nke ọma
Inweta usoro mkpanaka nke ọma bụ 80% nke agha na HPLC. Ọ bụrụ na ị na-agbasi mbọ ike na usoro ntọala "shag kapet", mbelata nrụgide, ma ọ bụ nsonaazụ na-ekwekọghị ekwekọ, egbula ụbọchị ọzọ ịkọ nkọ.
Ejirila m ọtụtụ puku awa na bench na-achọpụta nsogbu ndị a kpọmkwem. Obi na-adị m ụtọ mgbe niile ịkọrọ ntakịrị ndụmọdụ "ụlọ nyocha gosipụtara" iji nwetaghachi ọrụ gị.
Ntụaka
-
Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J.W. (2011). Okwu Mmalite nke Chromatography Liquid Modern. Mbipụta nke atọ. John Wiley & Ụmụ. (The "Gold Standard" maka ịghọta HPLC nkewa usoro).
-
Dolan, J.W. (2002). "Nkwadebe usoro mkpanaka." LCGC North America, Usoro nchọpụta nsogbu. (Ndụmọdụ bara uru dị mkpa maka ikuku na nzacha).
-
Aparicio, R. (Ed.). (2013). Akwụkwọ ntuziaka nke HPLC Optimization. Elsevier. (Nkọwa data gbasara polarity ihe mgbaze na nhọrọ nchekwa na chromatography nke ọzọ).
-
Teknụzụ Agilent. "Ntụziaka nchọpụta nsogbu Sistemụ HPLC: Izere mperi usoro mkpanaaka a na-ahụkarị." Ọbá akwụkwọ akụrụngwa akụrụngwa.
-
Ụlọ ọrụ Waters Corporation. "Ụkpụrụ nke Chromatography: Usoro Nkịtị vs. Reverse Phase." Usoro agụmakwụkwọ.
-
Ogbako mba ofesi na mmekorita (ICH). Q2(R1) Nkwado nke usoro nyocha: Ederede na Usoro. (Ọkọlọtọ maka ọnụọgụ mpaghara kacha elu yana nkwụsi ike oge njide).
Bekee
Chinese
