サンプル前処理の概要
サンプルの前処理には、注入前のすべての操作が含まれます。計量、溶解、希釈に加えて、次の手順も必要になります。
- ろ過
- 抽出
- 誘導体化（プレカラム誘導体化）
- 液体クロマトグラフィー（低圧カラムクロマトグラフィー）
前処理は手動または自動で実行できます。 サンプルの前処理についてご存知ですか?
誘導体化
一部のサンプルは前処理後も直接注入できません。誘導体化は、UV 吸収や蛍光を持たない化合物を UV または蛍光検出器で検出できるようにするために必要です。
考えられる問題には、サンプルの損失、汚染、不完全な反応、または複数の副生成物が含まれており、精度に影響を与えたり、エラーが発生したりする可能性があります。
サンプルのろ過
LC サンプルは均一で粒子が含まれていない必要があります。粒子がインジェクターを損傷したり、カラムを詰まらせたりする可能性があります。手順には次のものが含まれます。
- 注入前にサンプルを振って、粒子、濁り、またはエマルジョンがないか確認してください。
- 粒子が観察された場合は、0.15μm 以上の粒子を保持できるメンブレンを使用してサンプルをろ過します。
潜在的な問題: サンプルの汚染、吸着による成分濃度の低下、溶媒の蒸発によるエラーの発生。
抽出方法
抽出では、分析対象物を共溶媒から分離するか、干渉物質 (タンパク質など) を除去します。有機溶媒は毒性が低く、揮発性があり、不純物が少なく、サンプルをよく溶解する必要があります。
一般的な溶媒: ジエチルエーテル、酢酸エチル、ジクロロメタン、クロロホルム、ベンゼン、または混合物。
抽出後、サンプルを直接注入することも、分析物の濃度と感度を高めるために濃縮することもできます。
水溶性サンプルの抽出
- 酸性成分と塩：有機溶媒で不純物を抽出し、酸性に調整してから抽出または注入します。または、N2 下で乾燥し、注入前に適切な溶媒に溶解します。
- 基本成分と塩：有機溶媒で不純物を抽出し、塩基性に調整してから抽出または注入します。または、N2 下で乾燥し、注入前に適切な溶媒に溶解します。
- 中性成分: 不純物を有機溶媒で抽出し、逆相クロマトグラフィーで直接分析します。
脂溶性サンプルの抽出
有機溶媒で抽出するか、直接注入します。または、N2 下で乾燥し、注入前に適切な溶媒に溶解します。
汚染源
分析における潜在的な汚染源:
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汚染の種類
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ソース
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防止策
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環境
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有害なガス、粉塵、エアロゾル
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器具室を隔離し、清潔に保ちます。エアコンを設置します。湿度を 70% 未満に制御します。湿気、腐食、振動を防ぐ
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コンテナ
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ガラス、セラミック、石英、プラスチックの実験器具
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サンプルの種類ごとに適切な容器を選択します。徹底的に掃除する
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試薬
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非クロマトグラフィーグレードの試薬
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クロマトグラフィーグレード、高純度、または分析グレードの試薬を使用する
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標準溶液の調製
- まず内部標準溶液を調製します。エラーを減らすために標準とサンプルで同じバッチを使用する
- 物質はクロマトグラフィーグレードで安定している必要があります
- 標準液は褐色瓶に入れて低温保存
- ビタミンの場合は、茶色のメスフラスコを使用するか、光を避けてください。
サンプルの前処理における一般的な問題と解決策
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問題
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原因
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解決策
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クロマトグラム内の無関係なピーク
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フィルターの汚れ
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フィルターをサンプル溶媒に浸し、注入をテストします
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フィルタータイプの変更
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別のクリーニング手法を使用する
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低いピーク応答 (特に低濃度サンプル)
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フィルター表面への吸着
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フィルタータイプの変更
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すべてのサンプルを同じ条件で処理します
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別のクリーニング手法を使用する
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回復力が低い
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不完全な抽出
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抽出時間を長くし、熱溶媒を使用してください
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洗浄方法を調整する
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ピークの広がり、カラム寿命の短縮
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サンプルの干渉と汚染
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洗浄方法を改善する
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精度が悪い
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不完全な回復
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誘導体化、分離、抽出、またはその他の条件を最適化または置き換える
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自動処理を使用して精度を向上させる
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