サンプルの準備は、いくつかの理由でHPLC分析の重要なステップです。
干渉を最小限に抑える：サンプルには、多くの場合、ターゲット分析物の検出を妨げる可能性のある不純物とマトリックス成分が含まれています。効果的なサンプル調製技術は、これらの不要な物質を除去し、分析の精度を向上させるのに役立ちます。
分析物の回復を改善する：適切な準備により、分析物の回復が改善され、結果が元のサンプルの実際の濃度を反映することを保証します。これは、分析物が低濃度で存在する微量分析にとって特に重要です。
ピーク形状の強化：適切に準備されたサンプルは、クロマトグラムに対称的で明確に定義されたピークを形成するのに役立ちます。これは、正確な定量化に不可欠です。不適切なサンプルの調製により、ピークテールと拡大が発生する可能性があり、データ解釈が複雑になります。
HPLCシステムを保護します：サンプル内の汚染物質は、HPLCシステムの柱やその他のコンポーネントを損傷し、メンテナンスコストとダウンタイムの増加につながる可能性があります。適切なサンプル調製により、システムの詰まりと摩耗のリスクが軽減されます。
サンプル準備の最初のステップは、サンプルを正しく収集することです。これには次のものが含まれます。
きれいなコンテナを使用してください：汚染を避けるために、常にきれいで不活性な容器を使用してください。ガラスまたは高品質のプラスチック容器をお勧めします。
汚染を避ける：手袋ときれいなツールを使用して、皮脂やその他のソースからの汚染を防ぎます。
適切なラベル：ミックスアップを避け、トレーサビリティを確保するために、サンプルに明確にラベルを付けます。
サンプルの均質化により、均一性が保証されます。これは、再現可能な結果にとって重要です。均質化技術には以下が含まれます。
機械的均質化：スターラーまたはホモジナイザーを使用して、固体または半固体サンプルを混合します。
超音波均質化：液体サンプル内の粒子を分散するための超音波の適用。
予想される分析物の濃度に応じて、サンプルを希釈または濃縮する必要がある場合があります。これは、次のことを達成できます。
希釈：移動相と同じ溶媒を使用して、サンプルを目的の濃度に希釈します。
集中：分析物は、蒸発や固相抽出（SPE）などの技術を使用して集中できます。
ろ過は、HPLCカラムを詰まらせることができる粒子状物質を除去するために不可欠です。一般的なフィルタリング方法は次のとおりです。
膜ろ過：使用0.2µmまたは0.45µmフィルター粒子を除去します。通常、ポリエーテルスルホン（PES）またはナイロンフィルターが使用されます。
予備的：粒子含有量が多いサンプルの場合、より大きな孔サイズフィルターを介した予備的なフィルターは、詰まりを防ぐことができます。
シリンジフィルターに関する50のよくある質問、この有益な記事を確認してください。 「注射器フィルター」50のトピックは、よくある質問です
分析物の分解を防ぐためにサンプルを安定させることを検討してください。
pH調整：pHを調整すると、特定の分析物を安定させることができます。たとえば、酸性化合物は、分解を防ぐために酸性化を必要とする場合があります。
添加物：安定剤または防腐剤を追加すると、保管と分析中にサンプルの完全性を維持するのに役立ちます。
サンプルを溶解し、HPLCシステムとの互換性を確保するために、正しい溶媒を選択することが重要です。以下を検討してください。
溶媒極性：完全な溶解を達成するには、溶媒は分析物の極性と一致する必要があります。
移動相の互換性： 潜在的な干渉を最小限に抑えるために、移動相と互換性のある溶媒を使用します。
サンプルの分析物を定量化するには、キャリブレーション標準の準備が不可欠です。これには次のものが含まれます。
キャリブレーション曲線の準備：一連の既知の濃度の分析物を準備して、定量化のためのキャリブレーション曲線を確立します。
同じ溶媒を使用します。一貫性を維持するために、サンプルと同じ溶媒と条件を使用して常に標準を準備してください。
標準操作手順（SOPS）に従ってください。一貫性と再現性を確保するために、サンプル準備のためにSOPSを確立し、接着します。
高品質の試薬と溶媒を使用してください。常にHPLCグレードの溶媒と高純度試薬を使用して、汚染を最小限に抑えてください。
ワークスペースをきれいに保ちます：汚染のリスクを減らすために、サンプルの準備領域を清潔で整理してください。
すべてを文書化する：標準プロトコルからの逸脱を含む、サンプル準備手順の詳細な記録を保持します。
メソッドの検証：サンプル調製方法を定期的に検証して、信頼できる再現性のある結果を確実に提供します。
ピーク形状が悪い：ピークが広いか尾がある場合、これは不完全な溶解または微粒子の存在を示している可能性があります。サンプルが完全に混合され、フィルタリングされていることを確認してください。
ゴーストピークス：ゴーストピークは、溶剤またはサンプルの不純物によって引き起こされ、高純度の溶媒を使用して、すべてのガラス製品と機器がきれいであることを確認してください。
低感度：感度が低い場合は、抽出方法を最適化するか、分析物の濃度を増加させることを検討してください。
列の詰まり：頻繁に目詰まりすると、サンプルにはあまりにも多くの粒子が含まれているか、適切にろ過されていないことが示されます。ろ過プロセスを再評価し、事前ろ過を検討してください。
一貫性のない結果：結果の変動は、一貫性のないサンプル調製に起因する可能性があります。すべての手順を標準化し、サンプルの準備に関与する人員が適切に訓練されていることを確認します。
分析的な需要が増加するにつれて、研究所は効率と精度を改善するために、より高度なサンプル調製技術を採用しています。
SPEは、複雑なマトリックスからの分析物の選択的抽出を可能にする広く使用されている技術です。これには、ターゲット分析物を保持しながら不純物が通過できるようにする固体吸着剤材料に液体サンプルを渡すことが含まれます。
LLEは、2つの不混和性のある液体の溶解度に基づいて分析物を分離する技術です。この方法は、異なる極性を持つ化合物を分離するのに効果的であり、環境および医薬品分析でよく使用されます。
Quechersは、抽出とクリーンアップのステップを1つのプロセスに組み合わせた食品および環境サンプルを準備するための一般的な方法であり、効率的で費用対効果の高いものです。
スループットと再現性は、希釈、ろ過、SPEなどのタスクを最小限の人間の介入で実行でき、エラーのリスクを減らすことができる自動化されたサンプル準備システムによって大幅に改善できます。
HPLCサンプルの準備についてもっと知りたいので、この記事を確認してください。 最良の結果を得るためのHPLCサンプル準備ソリューション
HPLCサンプルの調製は、分析結果の精度と信頼性に大きな影響を与える可能性のある重要なステップです。ベストプラクティスに従い、適切な手法を使用し、一般的な問題に対処することにより、研究所は分析的ニーズが進化するにつれて高度な技術と技術を採用することにより、サンプル準備プロセスを最適化できます。自動化により、HPLC分析の効率と有効性がさらに向上します。適切なサンプルの準備により、結果の品質が向上するだけでなく、HPLCシステムを保護し、長期的な信頼性とパフォーマンスを確保します。
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