ნაკადის დაუფლება: ლაბორატორიის ვეტერანის სახელმძღვანელო HPLC მობილური ფაზებისთვის

შესავალი

მე ვიყავი იქ, სადაც თქვენ ხართ - ვუყურებ მონიტორს ღამის 2 საათზე, ვუყურებ საბაზისო დრიფტს, როგორც დაკარგული ნავი ზღვაში, მაინტერესებს, "HPLC doo-hickey" მხოლოდ ჩემი საღი აზრის შესამოწმებლად არის გამოგონილი. თუ თავს აწუხებთ მაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფიის (HPLC) გარშემო გადახვევის მცდელობისას, ამოისუნთქეთ. ეს არ არის მხოლოდ ძვირადღირებული ნაწილების ყუთი; ეს არის დელიკატური ცეკვა ქიმიასა და ფიზიკას შორის.

ლაბორატორიაში ხშირად ვამბობთ, რომ მობილური ფაზა არის სისტემის „სიცოცხლის ხაზი“. ამის გარეშე, თქვენი ნიმუში მხოლოდ ინჟექტორში ზის და არსად მიდის. მაგრამ როგორ ავირჩიოთ სწორი „მატარებელი“ თქვენი მოლეკულების დეტექტორამდე გადასატანად? მოდი დავშალოთ ისე, თითქოს ყავის მირთმევის დროს ვსაუბრობთ.

1. რა არის HPLC, სინამდვილეში?

მისი ძირითადი ნაწილი, HPLC არის განცალკევება. იფიქრეთ იმაზე, როგორც რბოლა, სადაც "ტრასა" არის სტაციონარული ფაზა (სვეტი) და "ქარი", რომელიც მორბენალს უბიძგებს, არის hplc მობილური ფაზა.

მაგია ხდება იმის გამო, რომ სხვადასხვა მოლეკულებს განსხვავებული „აფინურები“ აქვთ. ზოგიერთ მოლეკულას უყვარს მობილური ფაზა და ადიდებს სვეტს. სხვები "წებოვანი" არიან - სტაციონალურ ფაზას უჭირთ და ჩამორჩებიან. სიჩქარის ეს განსხვავება არის ის, რაც ქმნის ამ მწვერვალებს თქვენს ქრომატოგრამაზე.

2. ნორმალური ფაზა საპირისპირო ფაზის წინააღმდეგ

ჩვეულებრივ, აქ ყველა იწყებს თმის ამოღებას. ჩემი პრაქტიკის წლების განმავლობაში, მე ვიპოვე ამის დამახსოვრების ყველაზე მარტივი გზა პოლარობის დათვალიერებით.

ა. ნორმალური ფაზის ქრომატოგრაფია

ეს არის "ძველი სკოლის" გზა. ნორმალური ფაზის ქრომატოგრაფიაში სტაციონარული ფაზა პოლარულია - იფიქრეთ, როგორც მაგნიტი პოლარული მოლეკულებისთვის. მობილური ფაზა, რომელსაც აქ ვიყენებთ, არის არაპოლარული, ჩვეულებრივ გამხსნელები, როგორიცაა ჰექსანი ან ჰეპტანი.

• ლოგიკა: პოლარული "წებოვანი" მოლეკულები თავს იკავებენ პოლარული სვეტის მიერ. არაპოლარული მოლეკულები სწრაფად ირეცხება არაპოლარული მოძრავი ფაზით.

• პროფესიონალური რჩევა: თუ გაზრდით თქვენი მობილური ფაზის პოლარობას (დაამატებთ ცოტა იზოპროპანოლს), თქვენი ნიმუშები რეალურად უფრო სწრაფად მოძრაობენ.

B. საპირისპირო ფაზის ქრომატოგრაფია

დღეს ეს არის ოქროს სტანდარტი. სამუშაოს 90%, რომელსაც მე ვაკეთებ ლაბორატორიაში, მოიცავს საპირისპირო ფაზის ქრომატოგრაფიას. აქ ჩვენ ვაბრუნებთ სკრიპტს. სვეტი არის არაპოლარული (ჰიდროფობიური, ზეთის მსგავსად), ხოლო ფაზის მობილური არის პოლარული (ჩვეულებრივ, წყლისა და მეთანოლის ან აცეტონიტრილის ნაზავია).

• ლოგიკა: წყლის მოყვარული (პოლარული) მოლეკულები ფართოვდებიან, რადგან მათ სძულთ ცხიმიანი სვეტი. ცხიმის მოყვარული (არაპოლარული) მოლეკულები სვეტს წებოსავით ეკვრის.

• რატომ გვიყვარს: ის პროგნოზირებადია, მრავალმხრივია და იყენებს წყალზე დაფუძნებულ გამხსნელებს, რომელთა მართვა უფრო ადვილია.

3. გამხსნელი ხარისხის „ოქროს წესი“.

თქვენ იხილავთ "HPLC Grade" ეტიკეტებზე მიზეზის გამო. არც კი იფიქროთ ACS კლასის ან რაიმე ნაკლების გამოყენებაზე. რატომ? იმის გამო, რომ ეს "პატარა" მინარევები დაბალი ხარისხის გამხსნელებში დროთა განმავლობაში დაგროვდება თქვენს სვეტზე, კლავს თქვენს გარჩევადობას და შექმნის უცნაურ მოჩვენებებს.

ყოველთვის გამოიყენეთ Milli-Q (18,2 MΩ.სმ) ხარისხის წყალი. თუ თქვენი წყალი „ბინძურია“, თქვენი საბაზისო ხაზი მთის ქედის ჰგავს და სამი დღე დახარჯავთ იმის გარკვევას, თუ რატომ.

4. დეგაზაცია და ფილტრაცია: შესრულების მკვლელები

ჰაერი hplc მობილური ფაზის მტერია. ნორმალური წნევის ქვეშ ჰაერი იხსნება თქვენს გამხსნელებში. მაგრამ მას შემდეგ, რაც გამხსნელი მოხვდება ტუმბოში, ეს პატარა ბუშტები შეიძლება ჩაიკეტოს გამშვებ სარქველებში ან დეტექტორის უჯრედში.

• შედეგი: ნაკადის სიჩქარის რყევები, პულსირების საბაზისო ხაზები და მოძრაობის შეკავების დრო.

• გამოსწორება: გამოიყენეთ ჩაშენებული დეგაზატორები, ან სონიკა\/ვაკუუმ ფილტრაცია, თუ თქვენ აწარმოებთ მაღალი მგრძნობელობის ანალიზს.

ფილტრაცია არ არის არჩევითი. HPLC ხარისხის გამხსნელებსაც კი შეიძლება ჰქონდეთ მიკროსკოპული ნაწილაკები წარმოების პროცესიდან ან ბოთლის თავსახურიდან. ყოველთვის გაფილტრეთ 0,22 μm ან 0,45 μm მემბრანა, სანამ ის თქვენს რეზერვუარს შეეხება. ეს არის 5 წუთიანი დავალება, რომელსაც შეუძლია თქვენი სვეტის გადარჩენა ნაადრევი სიკვდილისგან.

5. ბუფერები და შუშის ხაფანგი

საპირისპირო ფაზის ქრომატოგრაფიაში ჩვენ ვიყენებთ ბუფერებს, რათა შევინარჩუნოთ pH სტაბილური იონიზირებადი ნიმუშებისთვის.

• პროფესიონალური რჩევა: თუ დღეს იყენებდით ბუფერს, გარეცხეთ სისტემა სუფთა წყლით\/ორგანული ნარევით სახლში წასვლამდე. თუ ამას არ გააკეთებთ, ეს მარილები კრისტალიზდება და გაანადგურებს თქვენს ტუმბოს ბეჭდებს.

• შუშის ხაფანგი: იცოდით, რომ თუ თქვენი hplc მობილური ფაზის pH არის > 8.0, მას შეუძლია ლითონის იონების გაჟონვა მინის რეზერვუარებიდან? ამ შემთხვევებში გადაერთეთ უჟანგავი ფოლადის ან სპეციალიზებულ პლასტმასის კონტეინერებზე.

მოდით მივიღოთ თქვენი განშორება სრულყოფილი

მობილური ფაზის სწორად მიღება არის HPLC-ში ბრძოლის 80%. თუ თქვენ ებრძვით "შაგის ხალიჩის" საბაზისო ხაზებს, წნევის მწვერვალებს ან არათანმიმდევრულ შედეგებს, ნუ დაკარგავთ სხვა დღეს გამოცნობაში.

მე ათასობით საათი გავატარე სკამზე ამ პრობლემების გადასაჭრელად. ყოველთვის მოხარული ვარ, რომ გაგიზიაროთ "ლაბორატორიულად დადასტურებული" რჩევები თქვენი პროექტის დასაბრუნებლად.

• WhatsApp: 86 18338832256

• ელფოსტა:boonemi@aijirenvial.com
  

ცნობები

• Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2011). შესავალი თანამედროვე თხევადი ქრომატოგრაფიაში. მე-3 გამოცემა. ჯონ უილი და შვილები. ("ოქროს სტანდარტი" HPLC გამოყოფის მექანიზმების გასაგებად).

• Dolan, J. W. (2002). "მობილური ფაზის მომზადება". LCGC ჩრდილოეთ ამერიკა, პრობლემების მოგვარების სერია. (არსებითი პრაქტიკული სახელმძღვანელო დეგაზაციისა და ფილტრაციისთვის).

• Aparicio, R. (რედ.). (2013). HPLC ოპტიმიზაციის სახელმძღვანელო. ელზევიე. (ყოვლისმომცველი მონაცემები გამხსნელის პოლარობისა და ბუფერის შერჩევის შესახებ საპირისპირო ფაზის ქრომატოგრაფიაში).

• Agilent ტექნოლოგიები. "HPLC სისტემის პრობლემების მოგვარების გზამკვლევი: მობილური ფაზის საერთო შეცდომების თავიდან აცილება." ტექნიკური რესურსების ბიბლიოთეკა.

• უოტერსის კორპორაცია. "ქრომატოგრაფიის პრინციპები: ნორმალური ფაზა უკუ ფაზის წინააღმდეგ." განათლების სერია.

• საერთაშორისო კონფერენცია ჰარმონიზაციის შესახებ (ICH). Q2(R1) ანალიტიკური პროცედურების ვალიდაცია: ტექსტი და მეთოდოლოგია. (სტანდარტი პიკის ფართობის რაოდენობრივი და შეკავების დროის სტაბილურობისთვის).