მაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფია (HPLC) და თხევადი ქრომატოგრაფი-მასის სპექტრომეტრია (LCMS) ორი ძლიერი ანალიტიკური ტექნიკაა, რომლებიც გამოიყენება სხვადასხვა სფეროში, მათ შორის ფარმაცევტულ, გარემოსდაცვითი მეცნიერებებისა და ცხოვრების მეცნიერებებში. მიუხედავად იმისა, რომ ორივე მეთოდი მოიცავს ნაერთების განცალკევებას და ანალიზს, მათი პრინციპები, ფუნქციები და პროგრამები ძალიან განსხვავებულია. ამ ბლოგის პოსტი შეადარებს HPLC და LCM- ს, აქცენტს აკეთებს მათ მნიშვნელოვან განსხვავებებზე და თითოეული ტექნიკის უპირატესობებზე.

ოპერაციის პრინციპი

HPLC

HPLC არის ქრომატოგრაფიული ტექნიკა, რომელიც ჰყოფს ნაერთებს სტაციონარულ და მობილურ ფაზებთან მათი ურთიერთქმედების საფუძველზე. HPLC– ში თხევადი მობილური ფაზა ტუმბოს იხდის სტაციონარული ფაზით სავსე სვეტით, რომელიც, როგორც წესი, შედგება სილიციუმის ან პოლიმერების მცირე ნაწილაკებისგან. როდესაც ნიმუშის ნარევი შედის სისტემაში, კომპონენტები გამოყოფილია სტაციონარული ფაზისადმი მათი დამოკიდებულების საფუძველზე. ნაერთები, რომლებიც უფრო მკაცრად ურთიერთობენ სტაციონარული ფაზით, უფრო ნელა, ხოლო ნაერთები, რომლებიც უფრო სწრაფად ურთიერთქმედებენ უფრო სწრაფად. განცალკევებული ნაერთები შემდეგ გამოვლენილია სხვადასხვა დეტექტორების გამოყენებით, მაგალითად, ულტრაიისფერი, ფლუორესცენტით ან რეფრაქციული ინდექსის დეტექტორებით.

გსურთ იცოდეთ ქრომატოგრაფიის ფლაკონების პროგრამების შესახებ, გთხოვთ, შეამოწმოთ ეს სტატია:ქრომატოგრაფიის ფლაკონების 15 პროგრამა სხვადასხვა სფეროში

LCMS

LCMS აერთიანებს HPLC- ის განცალკევების შესაძლებლობებს მასობრივი სპექტრომეტრიის მასობრივი ანალიზის შესაძლებლობებთან. LCMS– ში, ნიმუშები პირველად გამოყოფილია HPLC– ის გამოყენებით, ისევე, როგორც ჩვეულებრივი HPLC– ში. ამასთან, იმის ნაცვლად, რომ ჩვეულებრივი დეტექტორი გამოვლინდეს, ამოღებული ნაერთები შეიტანება მასის სპექტრომეტრში. მასობრივი სპექტრომეტრი იონიზირებს ნაერთებს და ზომავს მათ მასა-დატვირთვის თანაფარდობას, რაც დეტალურ ინფორმაციას აწვდის ანალიზის მოლეკულური წონისა და სტრუქტურის შესახებ. განცალკევებისა და მასის სპექტრომეტრიის ეს კომბინაცია უფრო მეტ მგრძნობელობას და სპეციფიკას იძლევა, ვიდრე მხოლოდ HPLC.

განცალკევების მექანიზმი

HPLC:HPLC იყენებს მაღალ წნევას თხევადი მობილური ფაზის გასაუმჯობესებლად შეფუთული სვეტის მეშვეობით, რომელიც შეიცავს სტაციონარულ ფაზას. ნაერთები გამოყოფილია სტაციონარულ ფაზასთან მათი დიფერენციალური ურთიერთქმედების საფუძველზე, რის შედეგადაც ხდება ზუსტი და ეფექტური განცალკევება.

LCMS:LCMS აერთიანებს HPLC- ის ფიზიკურ განცალკევების შესაძლებლობებს მასობრივი სპექტრომეტრიის მასობრივი სპექტრომეტრიის შესაძლებლობებთან (MS). თხევადი ქრომატოგრაფიის კომპონენტი ჰყოფს ნაერთებს, ხოლო მასის სპექტრომეტრი ზომავს იონიზებული სახეობების მასა-დატენვის თანაფარდობას.

მგრძნობელობა და სელექციურობა

HPLC:HPLC– ს აქვს კარგი მგრძნობელობა და სელექციურობა, განსაკუთრებით მაშინ, როდესაც შერწყმულია მოწინავე დეტექტორებთან, როგორიცაა ულტრაიისფერი ვისი, ფლუორესცენტი ან დიოდური მასივის დეტექტორები. ამასთან, მხოლოდ HPLC შეიძლება არ უზრუნველყოს ადეკვატური სპეციფიკა რთული ნიმუშებისთვის.

LCMS:LCMS– ს აქვს უმაღლესი მგრძნობელობა და სელექციურობა HPLC– სთან შედარებით. მასის სპექტრომეტრებს შეუძლიათ ზუსტად ამოიცნონ და დაანგარიშონ ნაერთები მათი უნიკალური მასა-პასუხისმგებლობის კოეფიციენტების საფუძველზე, თუნდაც რთულ მატრიცებში. ეს LCM- ს განსაკუთრებით სასარგებლო ხდის კვალი ნაერთების ანალიზისა და უცნობი ნივთიერებების ვინაობის დასადასტურებლად.

ნიმუშის მომზადება

HPLC:HPLC– სთვის ნიმუშის მომზადება, როგორც წესი, მოიცავს განზავებას, ფილტრაციას ან მარტივ მოპოვების ტექნიკას. ნიმუშების აორთქლება არ არის საჭირო, ამიტომ HPLC შესაფერისია ნაერთების ფართო სპექტრისთვის, მათ შორის პოლარული და არა ვოლიტარული ნივთიერებებისთვის.

LCMS:LCMS– ისთვის ნიმუშის მომზადება მსგავსია HPLC– სთვის, მაგრამ შეიძლება საჭირო გახდეს დამატებითი ნაბიჯები მასის სპექტრომეტრთან თავსებადობის უზრუნველსაყოფად. მაგალითად, შეიძლება საჭირო გახდეს არასტაბილური ბუფერები ან დანამატები იონიზაციის გასაუმჯობესებლად და იონის ჩახშობის თავიდან ასაცილებლად.

პროგრამები

HPLC:HPLC ფართოდ გამოიყენება ფარმაცევტული საშუალებების, საკვების და გარემოსდაცვითი ნიმუშების ანალიზისთვის. ეს განსაკუთრებით ეფექტურია კომპლექსურ ნარევებში ნაერთების განცალკევებისა და რაოდენობრივი მაჩვენებლებისთვის, როგორიცაა ნარკომანიის მინარევები, საკვების დანამატები და პესტიციდების ნარჩენები.

LCMS:LCMS– ს აქვს ფართო სპექტრი პროგრამები, მათ შორის:

ფარმაცევტული ანალიზი: გამოიყენება ნარკომანიის, განვითარების და ხარისხის კონტროლში.

პროტეომიკა და მეტაბოლომია: გამოიყენება ბიოლოგიურ ნიმუშებში ცილებისა და მეტაბოლიტების იდენტიფიცირებისა და რაოდენობრივი მიზნით.

გარემოსდაცვითი ანალიზი: გამოიყენება წყალში, ნიადაგსა და ჰაერის ნიმუშებში კვალი დამაბინძურებლების გამოსავლენად.

გაინტერესებთ დამოწმებული HPLC ფლაკონების როლი ნიმუშის ზუსტი ანალიზის უზრუნველსაყოფად? წაიკითხეთ ეს სტატია: დამოწმებული HPLC ფლაკონების მნიშვნელობა ზუსტი ნიმუშის ანალიზისთვის

დასკვნა

HPLC და LCMS ორივე ძლიერი ანალიტიკური ტექნიკაა საკუთარი სიძლიერე და შეზღუდვები. ამ ორს შორის არჩევანი დამოკიდებულია ანალიზის სპეციფიკურ მოთხოვნებზე, როგორიცაა მგრძნობელობა, სელექციურობა, ნიმუშის სირთულე და ხელმისაწვდომი რესურსები.

HPLC კარგი არჩევანია ცნობილი ნაერთების რუტინული ანალიზისთვის შედარებით მარტივ მატრიცებში, სადაც მნიშვნელოვანი ფაქტორებია ღირებულება და გამოყენების მარტივია. LCMS, მეორეს მხრივ, სასურველი ტექნიკაა რთული ნიმუშების ანალიზისთვის, უცნობი ნაერთების იდენტიფიცირებისა და ულტრა-კვალი დონის გამოვლენის მისაღწევად.

როგორც ტექნოლოგია აგრძელებს წინსვლას, HPLC და LCMS ინტეგრაცია უფრო მნიშვნელოვან როლს შეასრულებს ანალიტიკური ქიმიის განვითარებადი საჭიროებების დასაკმაყოფილებლად და მაღალი ხარისხის შედეგების უზრუნველსაყოფად სხვადასხვა პროგრამებში.

წინა:

საბოლოო სახელმძღვანელო 0.45 მიკრონის შპრიცის ფილტრებისათვის

შემდეგი:

ყველაფერი რაც თქვენ უნდა იცოდეთ Headspace GC ნიმუშის მომზადების შესახებ