HPLC ұялы фазасы үшін дұрыс буферді таңдау оңтайлы бөлу және талдауға қол жеткізу үшін өте маңызды үлгілер. Буферлер анализдің иондау күйін бақылау үшін қажет, бұл олардың сақтау уақыты мен шыңының пішініне әсер ететін тұрақты рН-ны сақтауға көмектеседі. Төменде HPLC қосымшасы үшін ең жақсы буферді қалай таңдауға болатындығы туралы егжей-тегжейлі шолу берілген.

HPLC үлгісін дайындау туралы білесіз бе? Қосымша ақпарат алу үшін осы мақаланы нұқыңыз: «HPLC үлгісін дайындау туралы білуіңіз керек нәрсе»

Буферді таңдаудың маңыздылығы

Буфер - бұл аз мөлшерде қышқыл немесе негіз қосқаннан кейін рН өзгертпейтін шешім. Олардың құрамына сүйене отырып, буферлерді қышқыл немесе негізгі деп жіктеуге болады. Буфердің тиімділігі оның PKA арқылы анықталады, ол оңтайлы буферлеу қабілеті үшін қажетті мобильді фазаның ± 1 рН аралығында болуы керек.

Қарастырылатын негізгі факторлар

1.PH диапазоны: Ұялы фазаның рН-нің рН-ді анализ ПК-дан кем дегенде 2 рН бірлік болуы керек. Бұл қышқыл немесе негізгі анализдердің ионизациясын болдырмауға көмектеседі, олар бағанға ұстап тұруды барынша арттыруға көмектеседі. Мысалы, егер аналитика 4,5 пека көмегімен әлсіз қышқыл болса, мобильді фазаны рН-ны 2.0-дағы мобильді фазаны қолдана отырып, оны ионсыз күйде ұстайды, ұстап тұруды жақсартады.

2.Бустер түрі: HPLC-де қолданылатын жалпы буферлер мыналарды қамтиды:

Фосфат буферлері: рН 6-дан 8.0-ге дейін тиімді, фосфат буферлері олардың тұрақтылығы мен көптеген аналитенттермен үйлесімділігі арқасында кеңінен қолданылады. Олар әсіресе LC-UV қосымшаларына жарамды.

Ацетат буферлері: Олар сонымен қатар LC-ультракүлгін сәулелер үшін де танымал, оларды фосфат буферлері сияқты рН диапазондарында қолдануға болады.

Ұшу буферлері: LC-MS қосымшалары үшін, қалыптастыру, ацетат және аммоний бикарбонаты сияқты ұшпа буферлер артықшылықты, өйткені оларды масс-спектрометрия процесінде оңай алып тастауға болады.

3.Бафер концентрациясы: HPLC буферлеріне арналған әдеттегі бастапқы концентрация 25-50 мм аралығында. Жоғары концентрациялар шыңның пішіні мен тиімділігін арттыра алады, бірақ органикалық еріткіштермен араласқан кезде жауын-шашынға әкелуі мүмкін. Асқынулардың алдын алу үшін буферлердің концентрациясын 25 мм-ден төмен ұстаған жөн.

4.Құрылғы тазалық: ластанудың алдын алу және сенімді нәтижелерді қамтамасыз ету үшін әрдайым жоғары тазалық хроматографиялық-громатографиялық-графикалық буферлерді қолданыңыз. Кірпелер күтпеген өзара әрекеттесулерге және сақтау уақытында өзгеруге әкелуі мүмкін.

Температура әсерлері: температура буферлік ерітінділердің рН-ға әсер етуі мүмкін. Тиімділігін сақтау үшін буферлерді дәйекті температурада дайындау және сақтау маңызды.

HPLC шишалары туралы 50 жауап білгіңіз келеді, осы мақаланы қараңыз: HPLC шишаларында 50 жиі қойылатын сұрақтар

Буферді дайындауға арналған практикалық кеңестер

Дайындау әдісі: буферлер қышқыл және негізгі компоненттердің экволярлы мөлшерін араластыру арқылы немесе қышқылмен негізгі ерітіндіні ттрицациялау арқылы дайындалуы мүмкін. Органикалық еріткіштер қосқаннан кейін рН реттеуден аулақ болыңыз, себебі бұл сәйкес келмейтін нәтижеге әкелуі мүмкін.

Жаңа шешімдер: компоненттердің микробтық өсуін және тозуын азайту үшін жаңа буферлік ерітінділерді дайындаңыз, бұл хроматографиялық нәтижеге әсер етуі мүмкін.

Коррозиядан аулақ болу: цитрат сияқты кейбір буферлер HPLC жүйелерінің тот баспайтын болаттан жасалған компоненттері. Зақымданудың алдын алу үшін осындай буферлерді қолданғаннан кейін жүйені мұқият жуыңыз.

Қорытынды

HPLC Mobile Fase үшін дұрыс буферді таңдау сенімді және репродуктивті нәтижелерге қол жеткізу үшін өте маңызды. Таңдау кезінде рН, буферлік түр, концентрация және тазалық қарастырыңыз. Осы нұсқауларды орындау арқылы сіз өзіңіздің үлгілеріңізді тиімді бөліп және талдау үшін HPLC әдісін оңтайландыруға болады.

HPLC шишаларының бағасын білгіңіз келсе, осы мақаланы тексеріңіз: HPLC vials бағасы: 50 Жиі қойылатын сұрақтар

Алдыңғы:

Судың сапасын тексеру үшін COD сынақ түтіктерін қалай дұрыс пайдалану керек?

Келесі:

Шприцтер сүзгілерінде сүзгіні қалай болдырмауға болады