Ағынды меңгеру: HPLC мобильді кезеңдері бойынша зертхана ардагерінің нұсқаулығы

Кіріспе

Мен сіз тұрған жерде болдым — түнгі сағат 2-де мониторға қарап, теңізде жоғалған қайық сияқты бастапқы дрейфті бақылап, «HPLC ду-хики» менің ақыл-ойымды тексеру үшін ойлап табылды ма деп ойладым. Егер сіз жоғары өнімді сұйық хроматографияға (HPLC) басыңызды орауға тырысып жатсаңыз, дем алыңыз. Бұл қымбат бөлшектердің жәшігі ғана емес; бұл химия мен физика арасындағы нәзік би.

Зертханада біз жылжымалы фазаны жүйенің «өмір сызығы» деп жиі айтамыз. Онсыз сіздің үлгі жай ғана инжекторда отырады, ешқайда кетпейді. Бірақ молекулаларыңызды детекторға апару үшін дұрыс «поезды» қалай таңдауға болады? Демалыс бөлмесінде кофе ішіп отырғандай, оны бөліп алайық.

1. HPLC дегеніміз не, шынымен?

Негізінде HPLC бөлу туралы. Оны «трек» стационарлық фаза (баған) және жүгірушілерді итеретін «жел» hplc мобильді фазасы болып табылатын жарыс сияқты елестетіп көріңіз.

Сиқыр әртүрлі молекулалардың әртүрлі «тұғындылығы» болғандықтан орын алады. Кейбір молекулалар жылжымалы фазаны жақсы көреді және бағанды ​​үлкейтеді. Басқалары «жабысқақ» — олар стационарлық фазаны жақсы көреді және артта қалады. Жылдамдықтағы бұл айырмашылық хроматограммадағы шыңдарды жасайды.

2. Қалыпты фаза және кері фаза

Әдетте бұл жерде әркім шаштарын жұра бастайды. Менің тәжірибемде мен мұны есте сақтаудың ең оңай жолын полярлыққа қарау арқылы таптым.

A. Қалыпты фазалық хроматография

Бұл «ескі мектеп» тәсілі. Қалыпты фазалық хроматографияда стационарлық фаза полярлық болып табылады — оны полярлы молекулалар үшін магнит сияқты елестетіңіз. Мұнда біз қолданатын жылжымалы фаза полярлы емес, әдетте гексан немесе гептан сияқты еріткіштер.

• Логика: Полярлық «жабысқақ» молекулалар полярлық бағанадан ұсталады. Полярлы емес молекулалар полярсыз жылжымалы фазамен тез жуылады.

• Кеңес: Мобильді фазаның полярлығын арттырсаңыз (аздап изопропанол қоссаңыз), үлгілеріңіз шынымен жылдамырақ қозғалады.

B. Кері фазалық хроматография

Бүгінде бұл алтын стандарт. Зертханада жасайтын жұмысымның 90%-ы кері фазалық хроматографияны қамтиды. Міне, біз сценарийді аударамыз. Колонна полярлы емес (мұнай сияқты гидрофобты), ал фазалық жылжымалы полярлы (әдетте су мен метанол немесе ацетонитрил қоспасы).

• Логика: Суды жақсы көретін (полярлы) молекулалар майлы бағананы жек көретіндіктен үлкейтеді. Майды жақсы көретін (полярлы емес) молекулалар бағанға желім сияқты жабысады.

• Неліктен біз оны жақсы көреміз: Ол болжамды, жан-жақты және басқаруға оңай су негізіндегі еріткіштерді пайдаланады.

3. Еріткіш сапасының «алтын ережесі».

Белгілерде белгілі бір себептермен «HPLC бағасын» көресіз. ACS деңгейін немесе одан да азын пайдалану туралы тіпті ойламаңыз. Неліктен? Төменгі сортты еріткіштердегі сол «кішігірім» қоспалар уақыт өте келе сіздің бағаныңызда жиналып, ажыратымдылықты жойып, елес шыңдарын жасайды.

Әрқашан Milli-Q (18,2 МΩ.см) сортты суды пайдаланыңыз. Егер сіздің суыңыз «лас» болса, сіздің негізгі сызығыңыз тау жотасына ұқсайды және оның себебін анықтауға үш күн жұмсайсыз.

4. Газсыздандыру және сүзу: өнімділікті өлтірушілер

Ауа - hplc мобильді фазасының жауы. Қалыпты қысымда ауа еріткіштерде ериді. Бірақ бұл еріткіш сорғыға түскенде, бұл кішкентай көпіршіктер тексеру клапандарына немесе детектор ұяшығына түсіп қалуы мүмкін.

• Нәтиже: ағын жылдамдығының ауытқуы, импульстік базалық сызықтар және қозғалысты ұстау уақыттары.

• Түзету: жоғары сезімталдық талдауларын жүргізіп жатсаңыз, кірістірілген газсыздандыру құралдарын немесе ультрадыбыспен\/вакуумды сүзуді пайдаланыңыз.

Сүзу міндетті емес. Тіпті HPLC маркалы еріткіштерде өндіріс процесінде немесе бөтелке қақпағында микроскопиялық бөлшектер болуы мүмкін. Резервуарыңызға тимес бұрын әрқашан 0,22 мкм немесе 0,45 мкм мембрана арқылы сүзіңіз. Бұл сіздің бағаныңызды мезгілсіз өлімнен құтқаратын 5 минуттық тапсырма.

5. Буферлер және шыны қақпақ

Кері фазалық хроматографияда иондалатын үлгілер үшін рН тұрақтылығын сақтау үшін буферлерді қолданамыз.

• Кеңес: Бүгін буфер пайдалансаңыз, үйге барар алдында жүйені таза сумен жуыңыз\/органикалық қоспа. Олай етпесеңіз, бұл тұздар кристалданады және сорғы тығыздағыштарын ұсақтайды.

• Шыны тұзақ: Егер hplc мобильді фазасының рН > 8,0 болса, шыны резервуарлардан металл иондарын шаймалау мүмкін екенін білесіз бе? Мұндай жағдайларда тот баспайтын болаттан немесе арнайы пластикалық контейнерлерге ауысыңыз.

Бөлінуіңізді мінсіз етейік

Мобильді фазаны дұрыс алу HPLC шайқасының 80% құрайды. Егер сіз «шаг кілемінің» негізгі көрсеткіштерімен, қысымның жоғарылауымен немесе сәйкес келмейтін нәтижелермен күресіп жатсаңыз, болжау үшін тағы бір күнді босқа өткізбеңіз.

Мен осы нақты мәселелерді шешу үшін орындықта мыңдаған сағат жұмсадым. Мен жобаңызды қалпына келтіру үшін «зертханалық дәлелденген» кеңестермен бөлісуге әрқашан қуаныштымын.

• WhatsApp: 86 18338832256

• Электрондық пошта:boonemi@aijirenvial.com
  

Анықтамалар

• Снайдер, Л.Р., Киркланд, Дж. Дж. және Долан, Дж. В. (2011). Қазіргі сұйық хроматографияға кіріспе. 3-ші басылым. Джон Уайли және ұлдары. (HPLC бөлу механизмдерін түсінуге арналған «Алтын стандарт»).

• Долан, Дж. В. (2002). «Мобильді фазаға дайындық». LCGC Солтүстік Америка, Ақаулықтарды жою сериясы. (Газсыздандыру және сүзу бойынша маңызды практикалық нұсқаулық).

• Апарисио, R. (Ред.). (2013). HPLC оңтайландыру нұсқаулығы. Elsevier. (кері фазалық хроматографияда еріткіштің полярлығы және буферді таңдау туралы толық мәліметтер).

• Agilent Technologies. «HPLC жүйесінің ақауларын жою нұсқаулығы: жалпы мобильді фазалық қателерді болдырмау». Техникалық ресурстар кітапханасы.

• Waters корпорациясы. «Хроматография принциптері: қалыпты фаза және кері фаза». Білім сериясы.

• Гармонизация бойынша халықаралық конференция (ICH). Q2(R1) Аналитикалық процедураларды тексеру: мәтін және әдістеме. (Шың аймақтың мөлшерін анықтау және сақтау уақытының тұрақтылығы үшін стандарт).