HPLC 모바일 단계에 대한 올바른 버퍼를 선택하는 것은 최적의 분리 및 분석을 달성하는 데 중요합니다. 샘플. 버퍼는 안정적인 pH를 유지하는 데 도움이되며, 이는 분석 물의 이온화 상태를 제어하는 데 필수적이며, 이는 보유 시간과 피크 모양에 영향을 미칩니다. 아래는 HPLC 응용 프로그램에 가장 적합한 버퍼를 선택하는 방법에 대한 자세한 개요입니다.

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버퍼 선택의 중요성

완충액은 소량의 산 또는 염기를 첨가 한 후 pH가 변하지 않는 용액입니다. 조성에 기초하여, 버퍼는 산성 또는 기본으로 분류 될 수있다. 완충액의 효과는 PKA에 의해 결정되는데, 이는 이상적으로 최적의 버퍼링 용량을 위해 원하는 이동 상 pH의 ± 1 pH 단위 내에 있어야한다.

고려해야 할 주요 요인

1.PH 범위 : 이동상의 pH는 분석 물의 PKA로부터 최소 2 개의 pH 단위 여야합니다. 이것은 산성 또는 기본 분석 물의 이온화를 억제하여 컬럼에서의 보유를 최대화하는 데 도움이됩니다. 예를 들어, 분석 물이 PKA가 4.5 인 약산 인 경우, pH 약 2.0 인 이동상을 사용하면 비 이온 상태로 유지하여 보유가 향상됩니다.

2.buffer 유형 : HPLC에 사용되는 공통 버퍼는 다음을 포함합니다.

포스페이트 완충제 : pH 범위 2.0 ~ 8.0에서 효과적으로, 인산염 완충제는 많은 분석 물과의 안정성 및 호환성으로 인해 널리 사용됩니다. 이들은 특히 LC-UV 응용 프로그램에 적합합니다.

아세테이트 완충제 : 이들은 또한 LC-UV 분석에 인기가 있으며 포스페이트 완충액과 유사한 pH 범위에 사용될 수 있습니다.

휘발성 완충제 : LC-MS 응용의 경우, 질량 분석법 과정에서 쉽게 제거 될 수 있기 때문에 포르 메이트, 아세테이트 및 중탄산 암모늄과 같은 휘발성 완충제가 바람직하다.

3. 버퍼 농도 : HPLC에서 완충제의 전형적인 출발 농도는 25-50mm 사이입니다. 더 높은 농도는 피크 모양과 효율을 향상시킬 수 있지만 유기 용매와 혼합 될 때 강수량을 유발할 수 있습니다. 합병증을 피하기 위해 버퍼 농도를 25mm 미만으로 유지하는 것이 좋습니다.

4. 화학적 순도 : 오염을 방지하고 신뢰할 수있는 결과를 보장하기 위해 항상 고순도 크로마토 그래피 등급 버퍼를 사용하십시오. 불순물은 예상치 못한 상호 작용과 보유 시간의 변동성으로 이어질 수 있습니다.

온도 효과 : 온도는 완충 용액의 pH에 영향을 줄 수 있습니다. 효과를 유지하기 위해 일관된 온도로 버퍼를 준비하고 저장하는 것이 중요합니다.

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버퍼 준비를위한 실용적인 팁

준비 방법 : 완충액은 등몰 양의 산성 및 기본 성분을 혼합하거나 기본 용액을 산과 적정하여 제조 할 수 있습니다. 유기 용매를 첨가 한 후 pH 조정을 피하십시오. 이로 인해 일관되지 않은 결과가 발생할 수 있습니다.

신선한 솔루션 : 신선한 완충액을 정기적으로 준비하여 미생물 성장 및 성분의 분해를 최소화하여 크로마토 그래피 성능에 영향을 줄 수 있습니다.

부식 방지 : 구연산염과 같은 특정 완충제는 HPLC 시스템의 스테인레스 스틸 성분을 부식시킬 수 있습니다. 손상을 방지하기 위해 이러한 버퍼를 사용한 후 시스템의 철저한 플러싱을 확인하십시오.

결론

신뢰할 수 있고 재현 가능한 결과를 달성하는 데 HPLC 모바일 단계에 대한 올바른 버퍼를 선택하는 것이 중요합니다. 선택할 때 pH, 버퍼 유형, 농도 및 순도를 고려하십시오. 이 지침을 따르면 HPLC 방법을 최적화하여 샘플을 효과적으로 분리하고 분석 할 수 있습니다.

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