Destpêk
Ez li cihê ku tu lê yî-di seet 02.00'an de li monîtorekê dinêrim, li deryayê mîna keştiyek windabûyî li rêveçûna bingehîn temaşe dikim, meraq dikim gelo "HPLC doo-hickey" tenê ji bo ceribandina aqilê min hate îcadkirin. Ger hûn xwe dilgiran hîs dikin ku hûn serê xwe li dora kromatografiya şilavê ya bi performansa bilind (HPLC) bipêçin, nefesek bistînin. Ew ne tenê qutiyek parçeyên biha ye; ew danseke nazik a di navbera kîmya û fizîkê de ye.
Di laboratîfê de, em pir caran dibêjin qonaxa mobîl "xeta jiyanê" ya pergalê ye. Bêyî wê, nimûneya we tenê di derzîlêdanê de rûniştiye, naçe cîh. Lê hûn çawa "trêna" rast hilbijêrin ku molekulên xwe bigihîne dedektorê? Werin em wê bişkînin mîna ku em li ser qehweyek li jûreyê sohbet dikin.
1. HPLC çi ye, Bi rastî?
Di bingeha xwe de, HPLC li ser veqetandinê ye. Bifikirin mîna pêşbaziyek ku "rêk" qonaxa rawestayî ye (stûn) û "ba" ku bazdan bi rê ve dikişîne qonaxa mobîl a hplc ye.
Sêrbaz diqewime ji ber ku molekulên cihêreng xwedan "têkiliyên" cihê ne. Hin molekul ji qonaxa mobîl hez dikin û di stûnê de zoom dikin. Yên din "zeliqandî" ne - ew di qonaxa rawestayî de dilgiran in û li paş dimînin. Ev cûdahiya lezê ew e ku wan lûtkeyan li ser kromatograma we diafirîne.
2. Qonaxa Normal beramberî Qonaxa Berevajî
Bi gelemperî li vir her kes dest bi kişandina porê xwe dike. Di salên xwe yên pratîkê de, min riya herî hêsan a bîranîna vê yekê dîtina polarîteyê dît.
A. Kromatografiya Qonaxa Normal
Ev awayê "dibistana kevn" e. Di kromatografiya qonaxa normal de, qonaxa rawestayî polar e - wê wekî magnetek molekulên polar bifikirin. Qonaxa mobîl a ku em li vir bikar tînin ne-polar e, bi gelemperî halên mîna hexane an heptane.
-
Mantiq: Molekulên polar "girêdayî" ji hêla stûna polar ve têne girtin. Molekulên ne-polar bi qonaxa mobîl a ne-polar zû dişon.
-
Serişteya Pro: Ger hûn polarîteya qonaxa xweya mobîl zêde bikin (piçek isopropanol lê zêde bikin), nimûneyên we dê bi rastî zûtir bimeşin.
B. Kromatografiya Qonaxa Berevajî
Îro, ev standard zêrîn e. Dibe ku 90% ji xebata ku ez di laboratîfê de dikim kromatografiya qonaxa berevajî vedihewîne. Li vir, em senaryoyê radikin. Stûn ne-polar e (hîdrofobîk, mîna rûnê), û qonaxa mobîl polar e (bi gelemperî tevliheviyek av û metanol an acetonitrile).
-
Mantiq: Molekulên av-hez (polar) zoom dikin ji ber ku ew ji stûna rûn nefret dikin. Molekulên qelew-hez (ne-polar) mîna benîştê li stûnê dikevin.
-
Çima em jê hez dikin: Ew pêşbînbar e, pirreng e, û solavên bingehîn ên avê yên ku hêsantir têne birêvebirin bikar tîne.
3. "Rêza Zêrîn" ya Kalîteya Solvent
Hûn ê ji ber sedemek li ser etîketan "Pola HPLC" bibînin. Li ser karanîna pola ACS an tiştek kêmtir jî nefikirin. Çima? Ji ber ku ew nepaqijiyên "piçûk" ên di halên pola nizm de dê bi demê re li stûna we kom bibin, çareseriya we bikujin û lûtkeyên giyanên xerîb biafirînin.
Her dem ava pola Milli-Q (18,2 MΩ.cm) bikar bînin. Ger ava we "pîs" be, xeta weya bingehîn dê mîna rêzek çiya xuya bike, û hûn ê sê rojan hewl bidin ku hûn bizanin ka çima.
4. Degassing û Parzûnkirin: Kujerên Performansê
Hewa dijminê qonaxa mobîl a hplc ye. Di bin zexta normal de, hewa di halên we de dihele. Lê gava ku ew çareserker li pompê dikeve, ew gulikên piçûk dikarin di valavên kontrolê an hucreya dedektorê de werin girtin.
-
Encam: Guherînên rêjeya herikînê, xêzên bingehîn ên lêdanê, û demên ragirtinê diherike.
-
Çareserkirin: Ger hûn ceribandinên bi hestiyariya bilind dimeşînin, degazkerên çêkirî, an sonîk\/filtrasyona valahiya bikar bînin.
Parzûnkirin Ne Vebijarkî ye. Tewra çareserkerên pola HPLC jî dikarin ji pêvajoya çêkirinê an jî kapaxa şûşeyê xwedan perçeyên mîkroskopî bin. Berî ku ew bigihîje depoya we, her gav di nav perdeyek 0,22 μm an 0,45 μm de fîlter bikin. Ew peywirek 5 hûrdemî ye ku dikare stûna we ji mirinek zû xilas bike.
5. Tampon û xefika Glass
Di kromatografiya qonaxa berevajî de, em tamponan bikar tînin da ku pH-ya ji bo nimûneyên îyonîzekirî aram bihêlin.
-
Serişteya Pro: Ger we îro tamponek bikar anî, berî ku hûn biçin malê pergalê bi ava paqij\/ tevliheviya organîk bişon. Ger hûn nekin, ew xwê dê krîstal bibin û morên pompeya we bişkînin.
-
Xefika Glass: We dizanibû ku ger pH-ya qonaxa mobîl a hplc> 8.0 be, ew bi rastî dikare îyonên metalê ji depoyên camê derxîne? Di van rewşan de veguherînin pola zengarnegir an konteynerên plastîk ên pispor.
Werin Em Veqetandina We Bêkêmasî Bikin
Rastgirtina qonaxa mobîl 80% ji şer di HPLC de ye. Ger hûn bi xêzên bingehîn, pêlên zextê, an encamên nakokî re têkoşîn dikin, rojek din bi texmînan winda nekin.
Min bi hezaran saetan li ser kursiyê ji bo çareserkirina van pirsgirêkên rastîn derbas kir. Ez her gav kêfxweş im ku ez hinekî şîretên "laboratûwarkirî" parve bikim da ku projeya we vegere ser rê.
Çavkanî
-
Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2011). Destpêka Kromatografiya Hêvî ya Nûjen. 3rd Edition. John Wiley & Sons. ("Standard Zêrîn" ji bo têgihiştina mekanîzmayên veqetandina HPLC).
-
Dolan, J. W. (2002). "Amadekirina Qonaxa Mobîl." LCGC Amerîkaya Bakur, Rêzeya Çareserkirinê. (Rêbernameya pratîkî ya bingehîn ji bo gazkirin û fîltrekirinê).
-
Aparicio, R. (Ed.). (2013). Manual of HPLC Optimization. Elsevier. (Daneyên berfireh ên li ser polarîteya çareserker û hilbijartina tamponê di kromatografiya qonaxa berevajî de).
-
Teknolojiyên Agilent. "Rêberê Çareserkirina Pirsgirêkên Pergala HPLC: Dûrkirina Çewtiyên Qonaxa Mobîl a Hevpar." Pirtûkxaneya Çavkaniya Teknîkî.
-
Pargîdaniya Waters. "Prensîbên Kromatografiyê: Qonaxa Normal û Qonaxa Berevajî." Series Perwerde.
-
Konferansa Navneteweyî ya li ser Harmonîzasyonê (ICH). Q2 (R1) Rastkirina Pêvajoyên Analîtîk: Nivîsar û Rêbaz. (Standard ji bo hejmartina qada pezê û aramiya dema ragirtinê).
English
Çînî
