Introduction
Мен сиз турган жерде болдум — түнкү саат 2де мониторду тиктеп, деңизде жоголгон кайыктай болуп, базалык дрейфти көрүп, "HPLC ду-хики" менин акыл-эсимди текшерүү үчүн эле ойлоп табылганбы деп ойлоп жатам. Эгер сиз башыңызды жогорку натыйжалуу суюк хроматографияга (HPLC) ороп алгысы келсе, дем алыңыз. Бул жөн гана кымбат баалуу тетиктердин кутусу эмес; бул химия менен физиканын ортосундагы назик бий.
Лабораторияда биз көбүнчө мобилдик фазаны системанын "жашоо сызыгы" деп айтабыз. Ансыз сиздин үлгүңүз жөн гана инжектордо отурат, эч жакка кетпейт. Бирок молекулаларыңызды детекторго жеткирүү үчүн туура «поездди» кантип тандайсыз? Келгиле, тыныгуу бөлмөсүндө кофе ичип сүйлөшүп жаткандай талкалайлы.
1. HPLC деген эмне, чынында?
Негизинен, HPLC бөлүү жөнүндө. Муну жарыш сыяктуу элестетиңиз, анда "трек" стационардык фаза (мамыча) жана жөө күлүктөрдү түртүп жаткан "шамал" hplc мобилдик фазасы.
Сыйкыр ар кандай молекулалардын ар кандай "жакындыгы" болгондуктан болот. Кээ бир молекулалар мобилдик фазаны жакшы көрүшөт жана мамычаны чоңойтышат. Башкалары «жабышчаак» — алар стационардык фазага ашык болуп, артта калышат. Ылдамдыктагы бул айырма сиздин хроматограммаңызда ошол чокуларды жаратат.
2. Кадимки фазага каршы
Адатта бул жерде ар бир адам чачын жулуп баштайт. Көп жылдык практикамда мен муну эстеп калуунун эң оңой жолун таптым, бул полярдуулукка карап.
A. Кадимки фазалык хроматография
Бул "эски мектеп" жолу. Кадимки фазалык хроматографияда стационардык фаза полярдуу болот — аны полярдык молекулалар үчүн магнит сыяктуу элестетиңиз. Бул жерде биз колдонгон мобилдик фаза полярдуу эмес, адатта гексан же гептан сыяктуу эриткичтер.
-
Логика: Полярдык "жабышчаак" молекулалар поляр мамычасынан кармап калышат. Полярдуу эмес молекулалар полярдуу эмес кыймылдуу фаза менен бат жууп кетишет.
-
Pro кеңеши: Эгер сиз мобилдик фазаңыздын полярдуулугун арттырсаңыз (бир аз изопропанол кошсоңуз), үлгүлөрүңүз чындыгында ылдамыраак жылат.
B. Тескери фазалык хроматография
Бүгүнкү күндө бул алтын стандарт болуп саналат. Лабораторияда жасаган иштердин 90% тескери фазалык хроматографияны камтыйт. Бул жерде биз сценарийди которуп жатабыз. Колонна полярдуу эмес (гидрофобдук, май сыяктуу), ал эми фазалык кыймылдуу полярдуу (көбүнчө суу менен метанолдун же ацетонитрилдин аралашмасы).
-
Логика: Сууну сүйүүчү (полярдуу) молекулалар майлуу мамычаны жек көргөндүктөн чоңойтышат. Майды сүйүүчү (полярдуу эмес) молекулалар колонкага клей сыяктуу жабышат.
-
Биз аны эмне үчүн жакшы көрөбүз: Ал алдын ала айтууга болот, ар тараптуу жана башкарууга оңой болгон суу негизиндеги эриткичтерди колдонот.
3. Эриткичтин сапатынын "Алтын эрежеси"
Белгилерде кандайдыр бир себептерден улам "HPLC баасын" көрөсүз. ACS классын же андан азыраак нерсени колдонуу жөнүндө ойлонбоңуз. Неге? Анткени төмөнкү сорттогу эриткичтердеги ошол "майда" кирлер убакыттын өтүшү менен колоннаңызда чогулуп, резолюцияңызды өлтүрүп, кызыктай арбак чокуларын жаратат.
Ар дайым Milli-Q (18,2 MΩ.cm) сортундагы сууну колдонуңуз. Эгерде сиздин сууңуз "кир" болсо, анда сиздин базалык сызыгыңыз тоо кыркасындай көрүнөт жана мунун себебин түшүнүүгө үч күн сарптайсыз.
4. Дегазация жана чыпкалоо: аткарууну өлтүргүчтөр
Аба hplc мобилдик фазасынын душманы. Кадимки басымда аба сиздин эриткичтерде эрийт. Бирок ал эриткич насоско тийгенден кийин, ал кичинекей көбүкчөлөр текшерүү клапандарына же детектор клеткасына камалып калышы мүмкүн.
-
Натыйжа: Агуунун ылдамдыгы, импульстук базалык сызыктар жана кыймылдуу кармоо убакыттары.
-
Түзөтүү: Эгер сиз жогорку сезгичтүү анализдерди иштетип жатсаңыз, орнотулган дегазаторлорду же Ультрадыбыс менен\/вакуумдук фильтрацияны колдонуңуз.
Фильтрация милдеттүү эмес. Атүгүл HPLC классындагы эриткичтерде өндүрүш процессинен же бөтөлкө капкагынан микроскопиялык бөлүкчөлөр болушу мүмкүн. Сиздин резервуарыңызга тийгенге чейин ар дайым 0,22 µm же 0,45µm мембрана аркылуу чыпкалаңыз. Бул 5 мүнөттүк тапшырма, ал тилкени эрте өлүмдөн сактап кала алат.
5. Буферлер жана айнек капкан
Тескери фазалык хроматографияда биз иондоштурулган үлгүлөр үчүн рНды туруктуу кармоо үчүн буферлерди колдонобуз.
-
Кеңеш: Эгер сиз бүгүн буфер колдонсоңуз, үйгө барардан мурун системаны таза суу менен жуу\/органикалык аралашма. Антпесеңиз, ал туздар кристаллдашып, насосуңуздун пломбаларын майдалайт.
-
Айнек капкан: Эгер сиздин hplc мобилдик фазасынын рН > 8.0 болсо, ал чындыгында айнек резервуарлардан металл иондорун жууй аларын билесизби? Мындай учурларда дат баспас болоттон жасалган же атайын пластик идиштерге өтүңүз.
Келиңиз, ажырашуууңузду идеалдуу кылалы
Мобилдик фазаны туура алуу HPLCдеги согуштун 80% түзөт. Эгер сиз "шаг килеминин" базалык көрсөткүчтөрү, басымдын көтөрүлүшү же ыраатсыз натыйжалар менен күрөшүп жатсаңыз, болжолдоо үчүн дагы бир күндү текке кетирбеңиз.
Мен так ушул маселелерди чечүү үчүн отургучта миңдеген сааттарды өткөрдүм. Долбооруңузду калыбына келтирүү үчүн "лабораторияда далилденген" кеңештер менен бөлүшүүгө ар дайым кубанычтамын.
Шилтемелер
-
Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2011). Заманбап суюктук хроматографиясына киришүү. 3rd Edition. John Wiley & Sons. (HPLC бөлүү механизмдерин түшүнүү үчүн "Алтын стандарт").
-
Долан, Дж. В. (2002). «Мобилдик фазага даярдоо». LCGC Түндүк Америка, Көйгөйлөрдү чечүү сериясы. (Газсыздандыруу жана чыпкалоо боюнча негизги практикалык колдонмо).
-
Aparicio, R. (ред.). (2013). HPLC оптималдаштыруу боюнча колдонмо. Elsevier. (Тескери фазалык хроматографияда эриткичтин полярдуулугу жана буферди тандоо боюнча толук маалыматтар).
-
Agilent Technologies. "HPLC тутумунун мүчүлүштүктөрүн аныктоо боюнча колдонмо: Жалпы мобилдик фазадагы каталарды болтурбоо." Техникалык ресурстардын китепканасы.
-
Waters Corporation. «Хроматографиянын принциптери: нормалдуу фаза жана тескери фаза». Билим берүү сериясы.
-
Гармонизация боюнча эл аралык конференция (ICH). Q2(R1) Аналитикалык процедуралардын валидациясы: Текст жана методология. (Чоку аймактын санын аныктоо жана кармоо убактысынын туруктуулугу үчүн стандарт).
Англисче
кытай
