ແນະນຳ
ຂ້ອຍເຄີຍໄປບ່ອນເຈົ້າຢູ່—ເບິ່ງທີ່ຈໍພາບໃນເວລາ 2 ໂມງເຊົ້າ, ເບິ່ງການລອຍລົມແບບພື້ນຖານຄືກັບເຮືອທີ່ຫຼົງຫາຍຢູ່ທະເລ, ສົງໄສວ່າ "HPLC doo-hickey" ຖືກປະດິດຂຶ້ນມາເພື່ອທົດສອບສຸຂະພາບຂອງຂ້ອຍ. ຖ້າເຈົ້າຮູ້ສຶກອິດເມື່ອຍທີ່ພະຍາຍາມເອົາຫົວຂອງເຈົ້າໄປອ້ອມຮອບຫົວຂອງທາດໂຄມໄຟປະສິດທິພາບສູງ (HPLC), ຫາຍໃຈເຂົ້າ. ມັນບໍ່ແມ່ນພຽງແຕ່ກ່ອງຂອງຊິ້ນສ່ວນລາຄາແພງເທົ່ານັ້ນ; ມັນເປັນການເຕັ້ນທີ່ລະອຽດອ່ອນລະຫວ່າງເຄມີສາດແລະຟີຊິກ.
ໃນຫ້ອງທົດລອງ, ພວກເຮົາມັກຈະເວົ້າວ່າໄລຍະມືຖືແມ່ນ "ເສັ້ນຊີວິດ" ຂອງລະບົບ. ຖ້າບໍ່ມີມັນ, ຕົວຢ່າງຂອງເຈົ້າພຽງແຕ່ນັ່ງຢູ່ໃນຫົວສີດ, ບໍ່ໄປໃສເລີຍ. ແຕ່ວິທີທີ່ເຈົ້າເລືອກ "ລົດໄຟ" ທີ່ຖືກຕ້ອງເພື່ອປະຕິບັດໂມເລກຸນຂອງເຈົ້າໄປຫາເຄື່ອງກວດຈັບ? ແບ່ງມັນລົງຄືກັບພວກເຮົາກຳລັງລົມກັນຢູ່ຮ້ານກາເຟໃນຫ້ອງພັກ.
1. HPLC ແມ່ນຫຍັງ, ແທ້?
ໃນຫຼັກຂອງມັນ, HPLC ແມ່ນກ່ຽວກັບການແຍກ. ຄິດວ່າມັນຄ້າຍຄືການແຂ່ງຂັນທີ່ "ຕິດຕາມ" ແມ່ນໄລຍະ stationary (ຖັນ) ແລະ "ລົມ" ຊຸກຍູ້ໃຫ້ນັກແລ່ນຕາມແມ່ນໄລຍະມືຖື hplc.
magic ເກີດຂຶ້ນເນື່ອງຈາກວ່າໂມເລກຸນທີ່ແຕກຕ່າງກັນມີ "affinities." ບາງໂມເລກຸນມັກໄລຍະມືຖືແລະຊູມຜ່ານຖັນ. ຄົນອື່ນແມ່ນ "ຫນຽວ" - ເຂົາເຈົ້າມີຄວາມກົດດັນໃນໄລຍະ stationary ແລະຊັກຊ້າ. ຄວາມແຕກຕ່າງໃນຄວາມໄວນີ້ແມ່ນສິ່ງທີ່ສ້າງຈຸດສູງສຸດເຫຼົ່ານັ້ນຢູ່ໃນ chromatogram ຂອງທ່ານ.
2. ໄລຍະປົກກະຕິທຽບກັບໄລຍະປີ້ນກັບກັນ
ປົກກະຕິແລ້ວນີ້ແມ່ນບ່ອນທີ່ທຸກຄົນເລີ່ມດຶງຜົມຂອງເຂົາເຈົ້າອອກ. ໃນປີຂອງການປະຕິບັດຂອງຂ້າພະເຈົ້າ, ຂ້າພະເຈົ້າໄດ້ພົບເຫັນວິທີທີ່ງ່າຍທີ່ສຸດທີ່ຈະຈື່ຈໍານີ້ແມ່ນໂດຍການເບິ່ງ polarity.
A. Chromatography ໄລຍະປົກກະຕິ
ນີ້ແມ່ນ "ໂຮງຮຽນເກົ່າ". ໃນ chromatography ໄລຍະປົກກະຕິ, ໄລຍະ stationary ແມ່ນຂົ້ວໂລກ - ຄິດວ່າມັນຄ້າຍຄືແມ່ເຫຼັກສໍາລັບໂມເລກຸນຂົ້ວ. ໄລຍະມືຖືທີ່ພວກເຮົາໃຊ້ຢູ່ນີ້ແມ່ນບໍ່ມີຂົ້ວໂລກ, ປົກກະຕິແລ້ວຕົວລະລາຍເຊັ່ນ hexane ຫຼື heptane.
-
ເຫດຜົນ: ໂມເລກຸນ Polar "ຫນຽວ" ຖືກຍຶດຄືນໂດຍຖັນຂົ້ວໂລກ. ໂມເລກຸນທີ່ບໍ່ມີຂົ້ວໂລກລ້າງອອກຢ່າງໄວວາດ້ວຍໄລຍະມືຖືທີ່ບໍ່ມີຂົ້ວໂລກ.
-
The Pro Tip: ຖ້າທ່ານເພີ່ມ polarity ຂອງໄລຍະມືຖືຂອງທ່ານ (ເພີ່ມ isopropanol ເລັກນ້ອຍ), ຕົວຢ່າງຂອງທ່ານຈະເຄື່ອນທີ່ໄວຂຶ້ນ.
B. Reverse Phase Chromatography
ມື້ນີ້, ນີ້ແມ່ນມາດຕະຖານຄໍາ. ອາດຈະເປັນ 90% ຂອງວຽກທີ່ຂ້ອຍເຮັດຢູ່ໃນຫ້ອງທົດລອງກ່ຽວຂ້ອງກັບ chromatography ໄລຍະປີ້ນກັບກັນ. ທີ່ນີ້, ພວກເຮົາ flip script ໄດ້. ຖັນແມ່ນບໍ່ມີຂົ້ວໂລກ (hydrophobic, ຄ້າຍຄືນ້ໍາມັນ), ແລະໄລຍະມືຖືເປັນຂົ້ວ (ປົກກະຕິແລ້ວເປັນປະສົມຂອງນ້ໍາແລະ methanol ຫຼື acetonitrile).
-
ເຫດຜົນ: ໂມເລກຸນທີ່ຮັກນ້ຳ (ຂົ້ວໂລກ) ຊູມຜ່ານ ເພາະວ່າພວກມັນກຽດຊັງຖັນທີ່ມີນໍ້າມັນ. ໂມເລກຸນທີ່ຮັກໄຂມັນ (ບໍ່ມີຂົ້ວໂລກ) ຕິດກັບຖັນຄືກັບກາວ.
-
ເປັນຫຍັງພວກເຮົາຮັກມັນ: ມັນເປັນການຄາດຄະເນ, ມີຄວາມຫຼາກຫຼາຍ, ແລະການນໍາໃຊ້ລະຫວ່າງນ້ໍາທີ່ງ່າຍທີ່ຈະຄຸ້ມຄອງ.
3. "ກົດລະບຽບທອງ" ຂອງຄຸນນະພາບຂອງສານລະລາຍ
ທ່ານຈະເຫັນ "HPLC Grade" ໃນປ້າຍກຳກັບດ້ວຍເຫດຜົນ. ຢ່າຄິດກ່ຽວກັບການໃຊ້ ACS ເກຣດ ຫຼືອັນໃດໜ້ອຍລົງ. ເປັນຫຍັງ? ເນື່ອງຈາກວ່າສິ່ງສົກກະປົກ "ນ້ອຍໆ" ເຫຼົ່ານັ້ນຢູ່ໃນສານລະລາຍລະດັບຕ່ໍາຈະສະສົມຢູ່ໃນຄໍລໍາຂອງເຈົ້າໃນໄລຍະເວລາ, ຂ້າການແກ້ໄຂຂອງເຈົ້າແລະສ້າງຈຸດສູງສຸດຂອງຜີທີ່ແປກປະຫຼາດ.
ໃຊ້ນ້ຳເກຣດ Milli-Q (18.2 MΩ.cm) ສະເໝີ. ຖ້ານ້ໍາຂອງເຈົ້າ "ເປື້ອນ", ພື້ນຖານຂອງເຈົ້າຈະມີລັກສະນະເປັນພູເຂົາ, ແລະເຈົ້າຈະໃຊ້ເວລາສາມມື້ເພື່ອຄົ້ນຫາວ່າເປັນຫຍັງ.
4. Degassing and Filtration: The Performance Killers
ອາກາດແມ່ນສັດຕູຂອງໄລຍະມືຖື hplc. ພາຍໃຕ້ຄວາມກົດດັນປົກກະຕິ, ອາກາດລະລາຍຢູ່ໃນສານລະລາຍຂອງທ່ານ. ແຕ່ເມື່ອສານລະລາຍນັ້ນຕົກໃສ່ປ້ຳ, ຟອງນ້ອຍໆເຫຼົ່ານັ້ນສາມາດຕິດຢູ່ໃນປ່ຽງກວດ ຫຼືຫ້ອງກວດສອບ.
-
ຜົນໄດ້ຮັບ: ການເຫນັງຕີງຂອງອັດຕາການໄຫຼ, ພື້ນຖານການເຕັ້ນຂອງຈັງຫວະ, ແລະເວລາເກັບຮັກສາການເຄື່ອນຍ້າຍ.
-
ການແກ້ໄຂ: ການນໍາໃຊ້ degassers ໃນຕົວ, ຫຼື sonication\ / ການກອງສູນຍາກາດຖ້າຫາກວ່າທ່ານກໍາລັງດໍາເນີນການວິເຄາະຄວາມອ່ອນໄຫວສູງ.
ການກັ່ນຕອງບໍ່ແມ່ນທາງເລືອກ. ແມ່ນແຕ່ຕົວລະລາຍລະດັບ HPLC ສາມາດມີອະນຸພາກກ້ອງຈຸລະທັດຈາກຂະບວນການຜະລິດ ຫຼືຝາຂວດໄດ້. ກັ່ນຕອງຜ່ານເຍື່ອ 0.22µm ຫຼື 0.45µm ກ່ອນທີ່ມັນຈະແຕະໃສ່ອ່າງເກັບນ້ຳຂອງເຈົ້າ. ມັນເປັນວຽກງານ 5 ນາທີທີ່ສາມາດຊ່ວຍປະຢັດຖັນຂອງທ່ານຈາກການເສຍຊີວິດກ່ອນໄວອັນຄວນ.
5. Buffers ແລະກັບດັກແກ້ວ
ໃນ reverse chromatography, ພວກເຮົາໃຊ້ buffers ເພື່ອຮັກສາ pH ຄົງທີ່ສໍາລັບຕົວຢ່າງ ionizable.
-
Pro Tip: ຖ້າທ່ານໃຊ້ buffer ໃນມື້ນີ້, ລ້າງລະບົບດ້ວຍນ້ໍາບໍລິສຸດ\/ ປະສົມອິນຊີກ່ອນທີ່ທ່ານຈະໄປເຮືອນ. ຖ້າຫາກວ່າທ່ານບໍ່ເຮັດແນວໃດ, ເກືອເຫຼົ່ານັ້ນຈະໄປໄປເຊຍກັນແລະ shred ປະທັບຂອງການສູບ.
-
ການໃສ່ກັບດັກແກ້ວ: ເຈົ້າຮູ້ບໍ່ວ່າຖ້າ pH ມືຖື hplc ຂອງເຈົ້າແມ່ນ > 8.0, ມັນສາມາດຮົ່ວໂລຫະ ions ອອກຈາກອ່າງເກັບນ້ໍາແກ້ວໄດ້ບໍ? ປ່ຽນເປັນສະແຕນເລດຫຼືຖັງພາດສະຕິກພິເສດໃນກໍລະນີເຫຼົ່ານີ້.
ຂໍໃຫ້ການແຍກອອກຂອງທ່ານສົມບູນແບບ
ການໄດ້ຮັບໄລຍະມືຖືທີ່ຖືກຕ້ອງແມ່ນ 80% ຂອງການສູ້ຮົບໃນ HPLC. ຖ້າທ່ານກໍາລັງຕໍ່ສູ້ກັບ "shag carpet" ພື້ນຖານ, ຄວາມກົດດັນ, ຫຼືຜົນໄດ້ຮັບທີ່ບໍ່ສອດຄ່ອງ, ຢ່າເສຍເວລາການຄາດເດົາອີກມື້.
ຂ້ອຍໄດ້ໃຊ້ເວລາຫຼາຍພັນຊົ່ວໂມງຢູ່ບ່ອນນັ່ງເພື່ອແກ້ໄຂບັນຫາທີ່ແນ່ນອນເຫຼົ່ານີ້. ຂ້ອຍດີໃຈສະເໝີທີ່ຈະແບ່ງປັນຄຳແນະນຳ "ການພິສູດຈາກຫ້ອງທົດລອງ" ເລັກນ້ອຍເພື່ອໃຫ້ໂຄງການຂອງເຈົ້າກັບມາສູ່ເສັ້ນທາງໄດ້.
ເອກະສານອ້າງອີງ
-
Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2011). ແນະນຳກ່ຽວກັບ Liquid Chromatography ສະໄໝໃໝ່. ສະບັບທີ 3. John Wiley & Sons. ("ມາດຕະຖານຄໍາ" ສໍາລັບຄວາມເຂົ້າໃຈກົນໄກການແຍກ HPLC).
-
Dolan, J. W. (2002). "ການກະກຽມໄລຍະມືຖື." LCGC ອາເມລິກາເຫນືອ, ຊຸດການແກ້ໄຂບັນຫາ. (ຄູ່ມືພາກປະຕິບັດທີ່ສໍາຄັນສໍາລັບການ degassing ແລະການກັ່ນຕອງ).
-
Aparicio, R. (Ed.). (2013). ຄູ່ມືການເພີ່ມປະສິດທິພາບ HPLC. Elsevier. (ຂໍ້ມູນທີ່ສົມບູນແບບກ່ຽວກັບການຂົ້ວລະລາຍແລະການຄັດເລືອກ buffer ໃນ chromatography ໄລຍະປີກັບກັນ).
-
ເຕັກໂນໂລຊີທີ່ວ່ອງໄວ. "ຄູ່ມືການແກ້ໄຂບັນຫາລະບົບ HPLC: ຫຼີກເວັ້ນຄວາມຜິດພາດຂອງໄລຍະມືຖືທົ່ວໄປ." ຫໍສະຫມຸດຊັບພະຍາກອນດ້ານວິຊາການ.
-
ບໍລິສັດນ້ໍາ. "ຫຼັກການຂອງ Chromatography: ໄລຍະປົກກະຕິທຽບກັບໄລຍະປີ້ນກັບກັນ." ຊຸດການສຶກສາ.
-
ກອງປະຊຸມສາກົນກ່ຽວກັບການປະສົມກົມກຽວ (ICH). Q2(R1) ການກວດສອບຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງຂັ້ນຕອນການວິເຄາະ: ຂໍ້ຄວາມ ແລະວິທີການ. (ມາດຕະຖານສໍາລັບປະລິມານພື້ນທີ່ສູງສຸດແລະຄວາມຫມັ້ນຄົງທີ່ໃຊ້ເວລາເກັບຮັກສາ).
ພາສາອັງກິດ
ຈີນ
