Išsamus pirminio HPLC mėginio apdorojimo vadovas – filtravimas, ekstrahavimas ir derivatizavimas
Naujienos
kategorijas
UŽKLAUSIMAI

Pirminis HPLC mėginio apdorojimas – nuoseklus vadovas

2025 m. spalio 21 d
ŽYMĖS:

Mėginio išankstinio apdorojimo apžvalga

Mėginio paruošimas apima visas operacijas prieš injekciją. Be svėrimo, ištirpinimo ir skiedimo, jis taip pat apima šiuos veiksmus:

  • Filtravimas
  • Ištraukimas
  • Derivatizavimas (iki stulpelio darymas)
  • Skysčių chromatografija (žemo slėgio kolonėlės chromatografija)

Pirminis apdorojimas gali būti atliekamas rankiniu būdu arba automatizuotai. Ar esate susipažinę su pirminiu mėginių apdorojimu?


Derivatizacija

Kai kurių mėginių vis tiek negalima tiesiogiai švirkšti po išankstinio apdorojimo. Norint, kad junginiai be UV sugerties ar fluorescencijos būtų aptinkami UV arba fluorescencijos detektoriais, reikalingas derivatizavimas.

  • Pagerina jautrumą
  • Pagerina atskyrimą (kokybės pasikeitimas)

Galimos problemos yra mėginio praradimas, užteršimas, neužbaigtos reakcijos arba keli šalutiniai produktai, kurie gali turėti įtakos tikslumui arba sukelti klaidų.

Mėginio filtravimas

LC mėginiai turi būti vienodi ir be dalelių; dalelės gali pažeisti purkštuką arba užblokuoti kolonėlę. Veiksmai apima:

  • Prieš injekciją suplakite mėginį ir patikrinkite, ar nėra dalelių, drumstumo ar emulsijų
  • Jei pastebite dalelių, filtruokite mėginį naudodami membraną, kuri gali išlaikyti ≥0,15 μm daleles

Galimos problemos: mėginio užteršimas, adsorbciją mažinanti komponentų koncentracija ir tirpiklio išgaravimas, sukeliantis klaidas.

Ekstrahavimo metodai

Ekstrahuojant analitės atskiriamos nuo kitų tirpiklių arba pašalinamos trukdančios medžiagos (pvz., baltymai). Organiniai tirpikliai turi būti mažai toksiški, lakūs, turėti mažai priemaišų ir gerai ištirpinti mėginį.

Įprasti tirpikliai: dietilo eteris, etilo acetatas, dichlormetanas, chloroformas, benzenas arba mišiniai.

Po ekstrahavimo mėginiai gali būti įpurškiami tiesiogiai arba koncentruojami, kad padidėtų analitės koncentracija ir jautrumas.

Vandenyje tirpių mėginių ekstrahavimas

  1. Rūgštiniai komponentai ir druskos: ekstrahuokite priemaišas organiniu tirpikliu, sureguliuokite iki rūgštingumo, tada ekstrahuokite arba įpurkškite; arba prieš injekciją išdžiovinkite N2 ir ištirpinkite atitinkamame tirpiklyje.
  2. Pagrindiniai komponentai ir druskos: ekstrahuokite priemaišas organiniu tirpikliu, sureguliuokite iki bazinės, tada ekstrahuokite arba įpurkškite; arba prieš injekciją išdžiovinkite N2 ir ištirpinkite atitinkamame tirpiklyje.
  3. Neutralūs komponentai: ekstrahuokite priemaišas organiniu tirpikliu, tada analizuokite tiesiogiai atvirkštinės fazės chromatografija.


Riebaluose tirpių mėginių ekstrahavimas

Ekstrahuokite organiniu tirpikliu arba įšvirkškite tiesiogiai; arba prieš injekciją išdžiovinkite N2 ir ištirpinkite atitinkamame tirpiklyje.


Taršos šaltiniai

Galimi užteršimo šaltiniai analizėje:

Užteršimo tipas

Šaltinis

Prevencinės priemonės

Aplinkosaugos

Kenksmingos dujos, dulkės, aerozoliai

Prietaisų patalpa turi būti izoliuota, švari; įdiegti AC; kontroliuoti drėgmę <70%; išvengti drėgmės, korozijos, vibracijos

Konteineriai

Stiklo, keramikos, kvarco, plastiko laboratorijos indai

Kiekvienam mėginio tipui pasirinkti tinkamus konteinerius; kruopščiai išvalykite

Reagentai

Nechromatografiniai reagentai

Naudokite chromatografinius, didelio grynumo arba analitinius reagentus


Standartinio tirpalo paruošimas

  • Pirmiausia paruoškite vidinį etaloninį tirpalą; naudokite tą pačią partiją standartuose ir pavyzdžiuose, kad sumažintumėte klaidas
  • Medžiagos turi būti chromatografiškai tinkamos ir stabilios
  • Standartinius tirpalus laikykite ruduose buteliuose žemoje temperatūroje
  • Vitaminams naudokite rudas matavimo kolbas arba saugokite nuo šviesos


Dažnos pirminio mėginių apdorojimo ir sprendimų problemos

Problema

Priežastis

Sprendimas

Nesusijusios smailės chromatogramoje

Filtro užterštumas

  1. Sudrėkinkite filtrą mėginio tirpiklyje ir išbandykite injekciją

  2. Pakeiskite filtro tipą

  3. Naudokite alternatyvius valymo būdus

Mažas didžiausias atsakas (ypač mažos koncentracijos mėginiai)

Adsorbcija ant filtro paviršiaus

  1. Pakeiskite filtro tipą

  2. Apdorokite visus mėginius tomis pačiomis sąlygomis

  3. Naudokite alternatyvius valymo būdus

Mažas atsigavimas

Nepilnas ištraukimas

  1. Pailginkite ekstrahavimo laiką, naudokite karštą tirpiklį

  2. Sureguliuokite valymo būdą

Išplėstos smailės, sutrumpintas kolonėlės tarnavimo laikas

Mėginio trukdžiai ir užterštumas

Pagerinkite valymo metodą

Prastas tikslumas

Nepilnas atsigavimas

  1. Optimizuokite arba pakeiskite derivatizaciją, atskyrimą, ekstrahavimą ar kitas sąlygas

  2. Norėdami pagerinti tikslumą, naudokite automatizuotą tvarkymą

Užklausa