Visaptveroša rokasgrāmata paraugu pirmapstrādei ar HPLC — filtrēšana, ekstrakcija un atvasināšana
Jaunumi
kategorijām
JAUTĀJUMS

HPLC paraugu pirmapstrāde — soli pa solim

2025. gada 21. oktobris
ETIĶES:

Parauga pirmapstrādes pārskats

Parauga pirmapstrāde ietver visas darbības pirms injekcijas. Papildus svēršanai, šķīdināšanai un atšķaidīšanai tas ietver arī šādas darbības:

  • Filtrēšana
  • Ekstrakcija
  • Atvasināšana (pirmskolonnas atvasināšana)
  • Šķidruma hromatogrāfija (zema spiediena kolonnas hromatogrāfija)

Iepriekšējo apstrādi var veikt manuāli vai automatizēti. Vai esat iepazinies ar paraugu pirmapstrādi?


Derivatizācija

Dažus paraugus pēc pirmapstrādes joprojām nevar tieši injicēt. Atvasināšana ir nepieciešama, lai savienojumus bez UV absorbcijas vai fluorescences varētu noteikt ar UV vai fluorescences detektoriem.

  • Uzlabo jutību
  • Uzlabo atdalīšanu (kvalitātes izmaiņas)

Iespējamās problēmas ietver parauga zudumu, piesārņojumu, nepilnīgas reakcijas vai vairākus blakusproduktus, kas var ietekmēt precizitāti vai radīt kļūdas.

Parauga filtrēšana

LC paraugiem jābūt viendabīgiem un bez daļiņām; daļiņas var sabojāt inžektoru vai bloķēt kolonnu. Darbības ietver:

  • Pirms injekcijas paraugu sakratiet un pārbaudiet, vai tajā nav daļiņu, duļķainības vai emulsijas
  • Ja tiek novērotas daļiņas, filtrējiet paraugu, izmantojot membrānu, kas var aizturēt ≥0,15 μm daļiņas

Iespējamās problēmas: parauga piesārņojums, adsorbciju samazinoša komponentu koncentrācija un šķīdinātāja iztvaikošana, kas izraisa kļūdas.

Ekstrakcijas metodes

Ekstrakcija atdala analītus no līdzšķīdinātājiem vai atdala traucējošās vielas (piemēram, olbaltumvielas). Organiskajiem šķīdinātājiem jābūt ar zemu toksicitāti, gaistošiem, ar zemu piemaisījumu saturu un labi jāizšķīdina paraugs.

Parastie šķīdinātāji: dietilēteris, etilacetāts, dihlormetāns, hloroforms, benzols vai maisījumi.

Pēc ekstrakcijas paraugus var tieši injicēt vai koncentrēt, lai palielinātu analīta koncentrāciju un jutību.

Ūdenī šķīstošo paraugu ekstrakcija

  1. Skābie komponenti un sāļi: ekstrahējiet piemaisījumus ar organisko šķīdinātāju, pielāgojiet skābiem, pēc tam ekstrahējiet vai ievadiet; vai žāvē zem N₂ un pirms injekcijas izšķīdina atbilstošā šķīdinātājā.
  2. Pamatkomponenti un sāļi: ekstrahējiet piemaisījumus ar organisko šķīdinātāju, noregulējiet uz bāzes, pēc tam ekstrahējiet vai ievadiet; vai žāvē zem N₂ un pirms injekcijas izšķīdina atbilstošā šķīdinātājā.
  3. Neitrālie komponenti: ekstrahējiet piemaisījumus ar organisko šķīdinātāju, pēc tam analizējiet tieši ar apgrieztās fāzes hromatogrāfiju.


Taukos šķīstošo paraugu ekstrakcija

Ekstrahē ar organisko šķīdinātāju vai tieši injicē; vai žāvē zem N₂ un pirms injekcijas izšķīdina atbilstošā šķīdinātājā.


Piesārņojuma avoti

Iespējamie piesārņojuma avoti analīzē:

Piesārņojuma veids

Avots

Profilakses pasākumi

Vides

Kaitīgas gāzes, putekļi, aerosoli

Uzturiet instrumentu telpu izolētu, tīru; uzstādīt maiņstrāvu; kontroles mitrums <70%; novērst mitrumu, koroziju, vibrāciju

Konteineri

Stikla, keramikas, kvarca, plastmasas laboratorijas piederumi

Izvēlieties atbilstošus konteinerus katram parauga veidam; kārtīgi notīriet

Reaģenti

Nehromatogrāfijas kvalitātes reaģenti

Izmantojiet hromatogrāfijas kvalitātes, augstas tīrības vai analītiskas kvalitātes reaģentus


Standarta šķīduma sagatavošana

  • Vispirms sagatavo iekšējo standarta šķīdumu; izmantot vienu un to pašu partiju standartos un paraugos, lai samazinātu kļūdas
  • Vielām jābūt hromatogrāfijas kvalitātes un stabilām
  • Uzglabājiet standarta šķīdumus brūnās pudelēs zemā temperatūrā
  • Vitamīniem izmantojiet brūnas mērkolbas vai sargājiet no gaismas


Izplatītas problēmas paraugu pirmapstrādes un risinājumu jomā

Problēma

Cēlonis

Risinājums

Nesaistīti pīķi hromatogrammā

Filtra piesārņojums

  1. Iemērciet filtru parauga šķīdinātājā un pārbaudiet injekciju

  2. Mainiet filtra veidu

  3. Izmantojiet alternatīvas tīrīšanas metodes

Zema maksimālā reakcija (īpaši zemas koncentrācijas paraugiem)

Adsorbcija uz filtra virsmas

  1. Mainiet filtra veidu

  2. Apstrādājiet visus paraugus tādos pašos apstākļos

  3. Izmantojiet alternatīvas tīrīšanas metodes

Zema atveseļošanās

Nepilnīga ekstrakcija

  1. Palieliniet ekstrakcijas laiku, izmantojiet karstu šķīdinātāju

  2. Pielāgojiet tīrīšanas metodi

Paplašinātas virsotnes, saīsināts kolonnas kalpošanas laiks

Parauga traucējumi un piesārņojums

Uzlabojiet tīrīšanas metodi

Slikta precizitāte

Nepilnīga atveseļošanās

  1. Optimizējiet vai nomainiet atvasināšanu, atdalīšanu, ekstrakciju vai citus apstākļus

  2. Izmantojiet automatizētu apstrādi, lai uzlabotu precizitāti

Izziņa