Mūsdienu analītiskajā laboratorijā hromatogrāfija ir daudz vairāk nekā parasts protokols; tā ir sarežģīta molekulārās mijiedarbības deja. Neatkarīgi no tā, vai kvantitatīvi nosakāt farmaceitiskos piemaisījumus vai konstatējat vides piesārņotājus mikroelementu līmenī, atdalīšanas pamatfizikas izpratne ir tas, kas atšķir tehniķi no meistara hromatogrāfa.
Laboratorijas panākumus nodrošina ne tikai augstas klases instrumentu iestatījumi. Tas darbojas sinerģijā starp jūsu metodes ķīmiju un augstas kvalitātes palīgmateriāliem, kas aizsargā jūsu parauga integritāti. Tiem, kas orientējas sarežģītās jomās
HPLC vs LC-MS: kuru izvēlēties
, vai cīnoties ar nestabilām bāzes līnijām, šajā rokasgrāmatā ir sniegti praktiskie noslēpumi, lai iegūtu pasaules līmeņa datus un maksimāli palielinātu instrumenta darbības laiku.
Izpratne par hidrofobisko rokasspiedienu: kas ir reversās fāzes hromatogrāfija?
Lai atbildētu uz pamatjautājumu — kas ir reversās fāzes hromatogrāfija —, jāskatās tālāk par mācību grāmatas definīciju. Tās pamatā ir atdalīšana, kuras pamatā ir "bailes no ūdens" (hidrofobitāte). Reversās fāzes augstspiediena šķidruma hromatogrāfijā (RP-HPLC) mēs izmantojam nepolāru stacionāro fāzi un polāro kustīgo fāzi, lai sakārtotu molekulas pēc to hidrofobiskā rakstura.
C18 (oktadecila) ķēdes ķīmija
Visizplatītākā stacionārā fāze ietver daļiņas uz silīcija dioksīda bāzes, kas saistītas ar C18 (oktadecila) ķēdēm. Mana pieredze liecina, ka šo C18 ķēžu blīvums un silīcija dioksīda atbalsta kvalitāte nosaka jūsu metodes izturību. Daudzi analītiķi, analizējot bāziskos savienojumus, sastopas ar pīķa atkāpšanos. To bieži izraisa atlikušās silanola grupas uz silīcija dioksīda virsmas, kas darbojas kā nevēlamas jonu apmaiņas vietas.
Lai to atrisinātu, mēs izmantojam kolonnu ar gala vāciņu, kur mazāki silāni "maskē" šīs aktīvās vietas. Tomēr pat labākā kolonna nevar novērst sliktu injekciju. Ja jūsu hromatogrāfiskais maksimums izskatās izkropļots, pirms tas pat sasniedz kolonnu, pārbaudiet flakonu. Izmantojot augstas tīrības pakāpes
9 mm īsu diegu flakoni ar universālu piegulšanu
nodrošina, ka jūsu analizējamā viela neabsorbējas uz flakona sieniņām, pirms adata to pat paņem.
Organiskā modifikatora māksla HPLC metodes izstrādē
Jūsu analizējamo vielu aiztures laiku nosaka organiskā modifikatora HPLC koncentrācija. Pielāgojot acetonitrila vai metanola attiecību pret jūsu ūdens buferšķīdumu, jūs noregulējat mobilās fāzes "eluēšanas stiprumu".
Izplatīta kļūme, ko es redzu metodes pārnesē, ir pārprasta gradienta eluēšanas līkne. Ja pārāk ātri paaugstināsit savu organisko modifikatoru, jūs zaudējat izšķirtspēju; pārāk lēni, un jūs ciešat no maksimālās paplašināšanās un izšķērdēta šķīdinātāja. Pārslēdzoties starp
Analītiskā pret sagatavošanu HPLC
, gradienta slīpuma pārvaldība kļūst par galveno faktoru veiksmīgai mēroga palielināšanai. Atcerieties, ka acetonitrils piedāvā zemu viskozitāti un augstu eluēšanas stiprumu, savukārt metanols var nodrošināt atšķirīgu selektivitāti polārajiem savienojumiem, kuru ACN var nepamanīt.
GC eluēšanas secības atšifrēšana: savienojumu atdalīšanas prognozēšana
Gc eluēšanas secības prognozēšana ir viens no vislielākajiem izaicinājumiem gāzu hromatogrāfam. Atšķirībā no HPLC, kur šķīdinātāja ķīmija ir galvenā svira, GC atdalīšanu nosaka "atdalīšanas trīsvienība": viršanas temperatūra, molekulārā polaritāte un kolonnas temperatūras programmēšana.
Termodinamika pret dipola mijiedarbību
Nepolārā stacionārā fāzē gc eluēšanas secība stingri atbilst viršanas temperatūrai. Gaistošākie savienojumi izplūst vispirms. Tomēr spēle mainās, ja izmantojat polāro kolonnu, piemēram, PEG\/Wax. Es nesen apstrādāju projektu, kurā bija iesaistīti izomēri, kur viršanas punkti bija gandrīz identiski. Pārejot uz polāro fāzi, dipola-dipola mijiedarbība ļāva mums atdalīt šos savienojumus, pamatojoties uz to elektronisko struktūru, nevis to lielumu.
Augstas jutības darbam, piemēram, vides pēdu analīzei, jūsu parauga konteinera integritāte ir vissvarīgākā. Izmantojot
20 mm gofrēti augšdaļas flakoni
novērš gaistošo analītu zudumu, nodrošinot, ka jūsu masas spektrālā dekonvolūcija ir balstīta uz patiesu jūsu parauga attēlojumu, nevis uz noplūdušo daļu.
HPLC vs LC-MS: Navigācija jutības nobīdē
Mūsu laboratorijā bieži uzdots jautājums: "Kad mums vajadzētu pāriet no HPLC un LC-MS?" Atbilde slēpjas jūsu vajadzīgajā jutīgumā. Lai gan HPLC ar UV noteikšanu ir lieliski piemērota ikdienas kvalitātes kontrolei mikrogramu līmenī, LC-MS ir nepieciešama, ja nepieciešams noteikt pikogrammu līmeņus vai identificēt nezināmus sarežģītās matricās.
Ja pārejat uz LC-MS, flakonu izvēle kļūst vēl svarīgāka. Standarta vāciņi var izskalot plastifikatorus jūsu mobilajā fāzē, radot "Ghost Peaks", kas vajā jūsu hromatogrammu. Tāpēc Aijirens
Salīmēti skrūvējami vāciņi
ir galvenais MS sertificētās laboratorijās — tās novērš risku, ka starpsienas iekristu flakonā vai piesārņotāju izskalošanās detektorā.
Perfekta hromatogrāfiskā pīķa anatomija
Katrs hromatogrāfiskais maksimums ir diagnostikas instruments. Asa, simetriska Gausa virsotne norāda, ka jūsu sistēma ir optimizēta. "Plecs" vai "aste" norāda, ka kaut kas nav kārtībā, bieži vien tas ir saistīts ar aparatūru vai mirušo skaļumu.
Dead Volume un Extra-Column Volume likvidēšana
Viens no klusajiem izšķirtspējas slepkavām ir miris apjoms. Ja starp adatu un flakona dibenu ir atstarpe, paraugs izkliedējas. Mikroparaugu ņemšanai es vienmēr iesaku izmantot Conical Inserts. Šie ieliktņi piespiež paraugu šaurā, vertikālā ceļā, nodrošinot "asu spraudņa" injekciju. Tas tieši rada asāku maksimumu un labākas signāla un trokšņa attiecības, īpaši augstspiediena sistēmās, kur izkliede ir ienaidnieks.
Problēmu novēršana kā profesionālis: sākot no bāzes trokšņa līdz Septa Coring
Problēmu novēršanas gados esmu atklājis, ka 70% instrumentu problēmu patiesībā ir patērējamās problēmas.
-
Sākotnējā trokšņa un spoku virsotnes: ja redzat virsotnes vietās, kur tām nevajadzētu būt, jūsu filtri var būt vainīgi. Vienmēr atsaucieties uz
Pilnīga rokasgrāmata par 0,22 mikronu filtriem
pirms šļirces filtru izvēles.
-
Starpsienu izgriešana: ja savā flakonā redzat silikona gabaliņus, jūsu adata ir "izurbusi" starpsienas. Tas notiek ar sliktas kvalitātes vāciņiem. Mūsu ND11 gofrētie vāciņi un 10-425 skrūvējamie vāciņi ir precīzi izstrādāti, lai izturētu vairākas caurduršanas bez sadrumstalotības.
-
Stabilitāte uzglabāšanā: EPA metodēm vai ilgstošai uzglabāšanai, izmantojot
24-400 EPA flakoni
izgatavots no borsilikāta stikla, nodrošina nulles šķīdinātāja zudumus un nulles piesārņojumu.
Kāpēc datu integritāte sākas ar izejmateriālu
Mēs bieži tērējam 50 000 USD augstas klases sistēmai, pēc tam mēģinām ietaupīt santīmus uz flakona. Pēc manas pieredzes, zemākas kvalitātes flakons ir visdārgākā lieta jūsu laboratorijā, jo tas noved pie "atkārtotas palaišanas" un "neveiksmīgas validācijas".
Neatkarīgi no tā, vai jums ir nepieciešami 1 ml apvalka flakoni vienkāršai hromatogrāfijai vai 18 mm skrūvējami vītnes flakoni automatizētai GC, Aijiren nodrošina konsekvenci, ko pieprasa eksperti. Mēs nodrošinām, ka jūsu gc eluēšanas secība ir atkārtojama katru dienu, un jūsu hromatogrāfiskais maksimums paliek tikpat ass kā dienā, kad izstrādājāt metodi.
Ekspertu atbalsts un aptaujas: vai jūs saskaraties ar pretrunīgiem rezultātiem vai cīnāties ar metodes izstrādi? Optimizēsim jūsu darbplūsmu kopā. Sazinieties ar mani, lai saņemtu tehnisko konsultāciju:
Secinājums Apgūt to, kas ir apgrieztā fāze, un apgūt instrumenta nianses, ir nepārtrauktas mācīšanās ceļojums. Izvēloties pareizo organisko modifikatoru HPLC un savā klasē labākos palīgmateriālus, jūs ieguldāt savu datu patiesumu. Neļaujiet nepilnvērtīgam flakonam sabojāt izcilo metodi, kuru izstrādājāt nedēļas.
angļu valoda
ķīniešu
