Fampidirana
Efa tonga teo amin'ny misy anao aho — nibanjina ny monitor tamin'ny 2 ora maraina, nijery ny fitetezam-paritra toy ny sambo very eny an-dranomasina, manontany tena raha noforonina ny "HPLC doo-hickey" mba hitsapana ny fahalalako. Raha toa ianao ka manafintohina ny manandrana manodina ny lohanao amin'ny chromatography ranon-javatra avo lenta (HPLC), maka aina. Tsy boaty misy ampahany lafo vidy fotsiny izany; dihy marefo eo amin'ny simia sy ny fizika izany.
Ao amin'ny laboratoara, matetika isika no milaza fa ny dingana finday dia ny "tsipika fiainana" an'ny rafitra. Raha tsy misy izany, ny santionanao dia mipetraka ao anaty tsindrona, tsy mandeha na aiza na aiza. Ahoana anefa no hisafidiananao ny "lalana" mety hitondrana ny molekiolao mankany amin'ny mpitsikilo? Andeha hovakiantsika toy ny miresaka amin'ny kafe ao amin'ny efitrano fialan-tsasatra.
1. Inona no atao hoe HPLC, Tena?
Amin'ny fotony, ny HPLC dia momba ny fisarahana. Eritrereto ho toy ny hazakazaka izay ny "lalana" dia ny dingana mijoro (ny tsanganana) ary ny "rivotra" manosika ny mpihazakazaka dia ny hplc mobile phase.
Ny majika dia mitranga satria samy manana ny "affinité" ny molekiola samihafa. Ny molekiola sasany dia tia ny dingan'ny finday ary midira amin'ny tsanganana. Ny hafa dia "mifikitra" - mikorontan-tsaina amin'ny dingana tsy misy dikany izy ireo ary mihemotra. Io fahasamihafan'ny hafainganam-pandeha io no mahatonga ireo tampon'ny chromatograma ireo.
2. Dingana mahazatra vs. dingana mivadika
Matetika no manomboka manongotra ny volony ny tsirairay. Tao anatin'ny taona fanazaran-tenako, hitako ny fomba mora indrindra hahatsiarovana izany dia ny fijerena ny polarity.
A. Chromatography amin'ny dingana mahazatra
Izany no fomba "sekoly taloha". Ao amin'ny chromatography phase ara-dalàna, ny dingan'ny mijanona dia polar - eritrereto ho toy ny andriamby ho an'ny molekiola polar. Ny dingana finday ampiasaintsika eto dia tsy polar, matetika solvents toy ny hexane na heptane.
-
Ny lojika: Ny molekiola "sticky" polar dia voatazon'ny tsanganana polar. Ny molekiola tsy polar dia misasa haingana miaraka amin'ny dingana finday tsy polar.
-
Ny Soso-kevitra Pro: Raha mampitombo ny polarity amin'ny dingana finday ianao (miampy isopropanol kely), dia hifindra haingana kokoa ny santionany.
B. Chromatography amin'ny dingana miverina
Amin'izao fotoana izao, izany no fenitra volamena. Angamba ny 90% amin'ny asa ataoko ao amin'ny laboratoara dia misy chromatography amin'ny dingana miverina. Eto isika dia mamadika ny script. Ny tsanganana dia tsy polar (hydrophobic, toy ny menaka), ary ny phase mobile dia polar (matetika fifangaroana rano sy methanol na acetonitrile).
-
Ny lojika: Ny molekiola tia rano (polar) dia mihamitombo satria mankahala ny tsanganana be menaka. Ny molekiola tia matavy (tsy polar) dia miraikitra amin'ny tsanganana toy ny lakaoly.
-
Ny antony itiavantsika azy: Azo vinaniana, azo ampiasaina ary mampiasa solvent miorina amin'ny rano izay mora kokoa ny mitantana.
3. Ny "Fitsipika volamena" momba ny kalitaon'ny solvent
Hahita "Grade HPLC" ianao amin'ny etikety noho ny antony iray. Aza mieritreritra ny hampiasa naoty ACS na zavatra kely kokoa. Nahoana? Satria ireo loto "kely" ao amin'ny solvents ambany dia hiangona eo amin'ny tsangananao rehefa mandeha ny fotoana, mamono ny fanapahan-kevitrao ary mamorona tampon'ny matoatoa.
Mampiasà rano mivaingana Milli-Q (18.2 MΩ.cm). Raha "maloto" ny ranonao, dia hitovy amin'ny tandavan-tendrombohitra ny faritra misy anao, ary handany telo andro ianao hamantatra ny antony.
4. Degassing sy filtration: The Performance Killers
Ny rivotra dia fahavalon'ny dingana finday hplc. Amin'ny fanerena ara-dalàna, levona ao anaty solvents ny rivotra. Saingy raha vantany vao midona amin'ny paompy io solvent io, dia mety ho voafandrika ao amin'ny valva fanaraha-maso na ny sela mpitsikilo ireo bubbles kely ireo.
-
Ny vokatr'izany: Ny fiovaovan'ny tahan'ny fikorianan'ny rivotra, ny tsipika fototra mifofotra, ary ny fotoana fitehirizana mihetsika.
-
Ny famahana: Mampiasà degassers naorina, na sonication\/vacuum filtration raha toa ka manao fitiliana avo lenta ianao.
Tsy safidy ny filtration. Na ny solvent amin'ny kilasy HPLC aza dia mety manana poti-bitika avy amin'ny fizotran'ny famokarana na ny satroka tavoahangy. Sivana foana amin'ny alalan'ny membrane 0.22µm na 0.45µm alohan'ny hikasika ny fitahirizanao. Asa 5 minitra izay afaka mamonjy ny tsangananao amin'ny fahafatesana aloha loatra.
5. Buffers sy ny fandrika fitaratra
Amin'ny chromatography amin'ny dingana miverina, mampiasa buffer izahay mba hitazonana ny pH ho an'ny santionany azo ionizable.
-
Pro Soso-kevitra: Raha nampiasa buffer ianao androany dia sasao amin'ny rano madio\/fangaro organika ny rafitra alohan'ny handehananao mody. Raha tsy manao izany ianao, ireo sira ireo dia hanjary kristaly ary hanimba ny tombo-kase paompy anao.
-
Ny fandrika fitaratra: Fantatrao ve fa raha > 8.0 ny pH-n'ny hplc-nao, dia mety handroaka ny ion metaly avy amin'ny fitahirizana fitaratra? Miverena amin'ny vy tsy misy pentina na fitoeran-plastika manokana amin'ireo tranga ireo.
Andao hatao lavorary ny fisarahanao
Ny fahazoana tsara ny dingana finday dia 80% amin'ny ady amin'ny HPLC. Raha toa ka sahirana amin'ny tsipika fototra "shag carpet" ianao, ny fiakaran'ny tsindry, na ny vokatra tsy mifanaraka, aza mandany andro maminavina.
Nandany ora an'arivony tao amin'ny dabilio aho hamahana ireo olana marina ireo. Faly foana aho mizara torohevitra "voaporofon'ny laboratoara" mba hamerenana ny tetikasanao.
References
-
Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2011). Fampidirana ny Chromatography Liquid Modern. 3rd Edition. John Wiley & Sons. (Ny "Gold Standard" ho an'ny fahatakarana ny fomba fisarahana HPLC).
-
Dolan, J. W. (2002). "Fiomanana amin'ny dingana finday." LCGC Amerika Avaratra, andiany famahana olana. (Torolalana azo ampiharina ilaina amin'ny fanalana gazy sy sivana).
-
Aparicio, R. (Mpand.). (2013). Torolàlana momba ny HPLC Optimization. Elsevier. (Angona feno momba ny polarity solvent sy ny fifantenana buffer amin'ny chromatography amin'ny dingana miverina).
-
Agilent Technologies. "Torolàlana hamahana olana amin'ny rafitra HPLC: Misoroka ny hadisoana mahazatra amin'ny dingana finday." Tranomboky ara-teknika loharanon-karena.
-
Ny orinasa Waters Corporation "Fitsipika momba ny Chromatography: Phase Normal vs. Phase Reverse." Andian-pampianarana.
-
Fihaonambe iraisam-pirenena momba ny fampifanarahana (ICH). Q2(R1) Fanamarinana ny fomba famakafakana: lahatsoratra sy fomba fiasa. (Manara-penitra ho an'ny fatran'ny faritra faratampony sy ny fahamarinan'ny fotoana fihazonana).
anglisy
Sinoa
